【生物科技行业】细胞生物学实验指导

【生物科技行业】细胞生物学实验指导

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细胞生物学实验指导编者梁亦龙张继承

生物信息学院

2004年9月

前言

细胞是一切生物(包括人类)最基本的结构和功能单位。生命科学中的各个学科领域，甚至非生命科学的许多学科领域中的学者们，越来越多地投入到对细胞生命现象的研究。细胞是生命的载体，不理解细胞就不理解生命。在现代生命科学教学中，不设置细胞生物学课，所培养出来的学生就称不上是完全的生命科学家。在细胞生物学放学中，实验课不可或缺。实验课的基本任务是，让学生学习细胞生物学基本技术，使他们具有一定的实验操作技能，且培养他们树立独立设计实验的思考观念和进行科研的基本素质。

我们借鉴兄弟院校的经验编写了这本《细胞生物学实验指导》•，供我院开设的各专业选用。

由于我们主客观条件所限，而且编写时间仓促，肯定会有不少缺点和错误，请提出批评意见，帮助我们不断改进教学。

编者梁亦龙

2004年9月

目录

实验是规则和操作要求··1

实验一细胞形态及大小的观测··2

实验二相差和暗视野显微镜的原理、使用及标本观察··5 实验三荧光显微镜原理及应用··9

实验四电镜参观··12

实验五植物细胞骨架的显示及光镜观察··14

实验六人淋巴细胞染色体标本制作··15

实验七人淋巴细胞姐妹染色体区分染色··17

实验八碱性磷酸酶的显示·19

实验九叶绿体的制备及其对染料的仍原··22

实验十人体细胞核型图的制作··24

实验十一线粒体的分离及活性测定··27

实验十二联会复合体的染色和观察··32

实验十三细胞融合··33

实验十四死、活细胞鉴别··39

实验十五细胞固定染色法··41

实验十六早熟染色体凝集（PCC）·43

实验十七细胞同步化··46

实验十八动物染色体分带技术··48

实验十九线粒体的显示··50

实验二十植物愈伤组织培养以及再分化··52

实验二十一肿瘤细胞培养实验步骤··57

实验二十二细胞器的分离··62

实验二十三石蜡切片的制作··66

实验室规则和操作要求

为获得较好的实验结果，避免发生差错和意外事故，特制定以下规则和要求，希望实验者能严格遵守。

（一）显微镜的使用及保护

①显微镜是细胞生物学实验的主要观察工具，使用时必须注意保持外观整洁、防湿、防高温、防药品侵蚀，使用时勿使染液或其它溶液沾污镜头，一旦沾污，及时用擦镜纸蘸上镜头清洗液（无水乙醚：无水乙醇＝7：3）轻轻擦拭干净。

②带光源的显微镜待电压稳定后，将电源的光亮度调节器调至最小，再打开显微镜的电源，缓慢调节光亮度适当进行量度观察，观察完毕后，则先将光亮度调节器调至最小，然后再关闭显微

镜电源开关。

③镜头的清洗：实验完毕后，镜头的清洗很重要。用擦镜纸蘸取少量镜头清洗液，先从镜头的中央开始清洗，轻轻旋转擦至镜头的边缘部分，如此重复2－3次。

④载物台必须保持清洁，必要时亦可用擦镜纸蘸少量清洗液擦试载物台。聚光器上的污物的去除亦可采用类似的方法。

⑤使用完毕后，玻片一律取下，套上布袋.放回原处。本桌的显微镜一律不准搬离本实验桌。若需使用者，可到该桌使用，使用后务必保持该显微镜的清洁。

如若发现违章使用情况，必追究使用者责任，本次实验作零分计。

（二）实验时，实验室内，一律不准高声喧哗整洁，保持室内安静，认真操作，仔细做好各项观察和记录。

（三）实验室内的一切仪器、物品必须爱护。节约材料、药品，取用时不要过量。公用物品不得独自占用，用后归仍原处。

（四）注意安全。使用有毒物品、强酸、强碱等，应严格按照操作规程。易燃物品远离火源。禁止湿手拿取电源开关或接触电源。如发生触电等事故，及时方案。

（五）取用各种试剂，要用及时盖上瓶盖。按献宝取出所需之药品或溶液后，不得将原液倒回瓶内。滴管、玻棒、吸管不可混用。

（六）实验中如有丢失、损坏仪器设备及用具，及时登记且方案，凡违反操作规程造成不应有的损失者，视其情节轻重，态度好坏，按有关规定处理。

（七）本实验室欢迎各位实验者对每一实验本身提出新的见法和做法，至于能否采用，视具体情况而定。任何人未经老师许可，不得自作主张，改动任何实验步骤和操作方法。

（八）实验完毕后，须摆齐药品，洗净器皿，做好本桌清洁。整个实验室清洁由本班班长安排。离开前要关好门、窗、水、电。

实验一、细胞形态及大小的观测

一、目的：

1.观测细胞形态及大小，了解细胞的分类

2.学习显微测量的方法

3.学习使用油镜

二、测微技术的原理：

显微侧微尺分为物镜测微尺（简称物微尺或台微尺）和目镜测微尺（简称目微尺）。目镜测微尺是一个能够放入目镜内的特制园玻片，玻片中央刻的刻度长5或10mm，将其分成50或100格（也有刻成十字形的）如下图。物微尺为一载片上贴着一圆形玻片中央带有刻度、长度为1mm，等分为100格，每一格长0.01mm（图一）。当测量细胞的大小时，不能用物微尺直接测量细胞，而只能使用目微尺。因目微尺测量的是细胞经物镜放大后的像，因而它每格所代表的实际长度随物镜的放大率而变，在测量时需先用物微尺标定，求出某一放大率时目微尺每格所代表的实际长度，然后再用以测量细胞大小。

三、油镜的原理：

油侵系物镜（简称油镜），和干燥系物镜不同，载波片和物镜之间的介质不是空气，而是一层香柏油，其折射率为1.515左右。和玻片折射率相近。光线通过载片后，可直接透过香柏油而进

入物镜，折射程度轻，这样物镜的镜口率增大，从而提高物镜的分辨率。

显微镜的分辨力和物镜的镜口率成反比，和光线的波长成正比；即：

R=0.61λ/2NA=0.61λ/2n.sinα/2

从上式可知提高介质的折射率能够提高显微镜的分辨能力，如果我们用NA为1.30的物镜，可见光平均波长为550nm即黄绿光，则分辨力为0.2μ。在油镜镜头上一般标有“0i1”，或有一黑色环等做为标志，油镜的放大倍数为90或100倍。

四、实验用品：

显微镜、测微尺、动物及植物的组织切片、香柏油、檫镜纸、二甲苯。

五、实验操作

1、目微尺的标定

（1）卸下目镜的上透镜（如为Olympus显微镜，则卸下目镜下方的金属环），将目微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上上透镜（金属环）。将目镜插入镜筒。

（2）将物微尺刻度向上放在镜台上夹好，以低倍镜调焦能见到物微尺的刻度，换上你用来测量细胞的物镜（本实验用油镜）。调焦至见清刻度，这时镜中同时见清俩尺。

小心移动物微尺和转动目镜，使俩尺平行，起点线重合，如下图：

然后找出另一处俩尺刻度重合处，记录起点线到重合线之间各尺的刻度数（格数），按下式计算。在该放大系统下目微尺每格所代表的实际长度：

目微尺每格所代表的实际长度（μ）=台微尺格数/目微尺格数*10（μ）