SDS_PAGE与分子标记相结合_省略_夏小麦HMW_GS组成与变化特点_白升升
sds-page蛋白凝胶电泳原理
sds-page蛋白凝胶电泳原理
SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离
和分析技术。
其原理基于蛋白质的电荷密度和分子质量。
1. SDS（十二烷基硫酸钠）：在SDS-PAGE中，SDS被用作
溶胀剂。
SDS能够与蛋白质中的氢键和疏水作用相互作用，
使蛋白质的二级、三级结构被破坏并线性展开。
SDS与蛋白
质发生作用后，每个蛋白质分子上的SDS数量差不多是相同的，即每个氨基酸上有约2.7个SDS分子。
2. 聚丙烯酰胺凝胶：SDS处理后的蛋白质在凝胶中呈均匀线
性状。
聚丙烯酰胺是一种电泳凝胶，可形成细小的孔隙结构。
这些孔隙可以分离不同分子质量的蛋白质。
3. 电泳过程：在凝胶上形成一个电场，蛋白质带有负电荷，向阳极迁移。
溶胶中的离子也会随之迁移，以维持电中性。
由于SDS已经使蛋白质的结构线性化，其迁移速度主要取决于分
子质量。
较大分子所需的孔隙更大，迁移速度更慢，较小分子则迁移更快。
4. 可视化和测量：分离结束后，可以通过染色剂（如Coomassie Brilliant Blue）将蛋白质染色。
染色剂与蛋白质结合，形成蓝色或紫色的带状条纹，使蛋白质带的位置可见。
在染色后，可以使用图像分析软件测量带的强度和相对迁移距离，从而推断蛋白质的分子质量。
通过SDS-PAGE，可以将不同分子质量的蛋白质分离开来，
并进行定量分析。
它是一种常用的蛋白质研究技术，在生物化学、生命科学和临床诊断等领域得到广泛应用。
小麦种子储藏蛋白——HMW-GS的分离(SDS-PAGE)
实验二小麦种子储藏蛋白——HMW-GS的分离（SDS-PAGE）一、目的利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）研究小麦种子储藏蛋白（高分子量谷蛋白亚基HMW-GS）组成结构。
此外SDS-PAGE也是测定蛋白质亚基分子质量的常用方法。
通过本实验，掌握SDS-PAGE的基本原理、技术及应用。
二、原理用十二烷基硫酸钠(SDS)和还原剂（巯基乙醇或二硫苏糖醇）热处理蛋白质样品，蛋白质分子中的二硫键被还原，解离的亚基与SDS发生定量结合后使得蛋白质亚基带上大量负电荷，从而掩盖了蛋白质各种亚基间原有的电荷差异。
亚基的构象均呈长椭圆棒状，各种蛋白质亚基-SDS复合物表现出相等的电荷密度，在电场中迁移速度仅与亚基分子质量有关。
因此，SDS-PAGE可以用来分离蛋白质并测定其蛋白质亚基的分子质量。
三、实验器材和试剂1.仪器电泳仪、垂直板电泳槽、台式高速离心机、加样枪、烧杯50ml 2个2.试剂盒材料(1)70%乙醇(2)50%正丙醇（含2%β-巯基乙醇）250ml：正丙醇125ml，β-巯基乙醇5ml，加水定容至250ml(3)样品提取缓冲液（母液）：4g SDS，11.5ml H2O,20ml甘油，25ml pH6.8，0. 5mol Tris-Hcl，25mg溴酚蓝(4)样品提取液：27.2ml母液+4.8mlβ-巯基乙醇+64ml H2O。
或母液：水：β-巯基乙醇=1:1:0.02（1）30%丙烯酰胺+甲叉双丙烯酰胺：丙烯酰胺（Acr）150g。
甲叉双丙烯酰胺（Bis）4g定容至500ml（2）分离胶缓冲液（Tris-Hcl）pH8.8 : 18.17g Tris用Hcl调pH至8.8定容至1000ml（3）浓缩胶缓冲液（Tris-Hcl）pH6.8 ：15.1g Tris用Hcl调pH至6.8定容至250ml（4）10%SDS（W/V）（5）10%(W/V)过硫酸铵（6）TEMED（四甲基乙二胺），4℃棕色瓶储藏（7）电极缓冲液（10×）500ml ：72g甘氨酸，15.15g Tris ，5g SD S（8）染色液：45%甲醇+45%水+10%冰醋酸+0.02%考马斯亮蓝R250（9）漂洗液：10%甲醇+80%水+10%冰醋酸四、操作步骤1、样品的提取(1)取一粒种子研磨粉碎，加入70%乙醇1000µl ，10分钟后，12000转离心8分钟，用纸将乙醇吸干。
SDS-PAGE原理步骤详细介绍含图片业内借鉴
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蛋白质-SDS胶束的特点 （1）形状像一个长椭圆棒 （2）短轴对不同的蛋白质亚基-SDS 胶束基本上是相同的 （3）长轴的长度则与亚基分子量的大 小成正比
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胶束在SDS-PAGE系统中的电泳迁 移率不再受蛋白质原有电荷的影响， 而主要取决于椭圆棒的长轴长度，即 蛋白质或亚基分子量的大小。
当蛋白质的分子量在15KD— 200KD之间时，电泳迁移率与分子量 的对数呈线性关系
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3、影响SDS电泳的关键因素 （1） 溶液中SDS单体浓度 大多数蛋白质与SDS结合的重量比 为1：1.4 （2） 样品缓冲液的离子强度 低离子强度的溶液中，SDS单体才 具有较高的平衡浓度
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（3） 二硫键是否完全被还原 当二硫键被彻底还原后，蛋白质分
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一、SDS-PAGE的基本原理
（一）蛋白质分子的解聚 样品介质和聚丙烯酰胺中加入离子
去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的 电泳迁移率主要取决于亚基分子量的 大小，而电荷因素可以被忽略
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1、SDS
阴离子去污剂 变性剂 助溶性试剂
断裂分子内和分子间的氢键 分子去折叠 破坏蛋白质分子的二级和三级结构
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三、方法 1、分类 （1）根据对样品的处理方式的不同
还原SDS电泳 非还原SDS电泳 带有烷基化作用的还原SDS电泳
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（2）根据缓冲系统和凝胶孔径的不同
连续电泳 不连续电泳
（3）根据电泳的形式
圆盘电泳 垂直电泳
平板电泳 水平电泳
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SDS-PAGE与分子标记相结合分析宁夏小麦HMW-GS组成与变化特点
SDS-PAGE与分子标记相结合分析宁夏小麦HMW-GS组成与变化特点摘要：高分子量麦谷蛋白亚基（HMW-GS）是影响小麦品质的重要因素之一。
为了探究宁夏地区小麦HMW-GS组成与变化特点，本文采用SDS-PAGE和分子标记技术对44个宁夏小麦品种进行了分析。
结果发现，宁夏地区小麦的HMW-GS种类丰富，其中1Bx7+1By9具有最高的表达频率，占比达到37.5%。
水平方面，各品种的HMW-GS含量存在一定差异，最高含量为7.48%，最低含量为3.21%。
同时，本研究还发现不同产地、不同年份的小麦HMW-GS组成和含量也存在一定差异，说明小麦品质的影响因素是多方面的。
综上所述，本研究为宁夏小麦品种的选育和产业发展提供了参考和支持。
关键词：SDS-PAGE；分子标记；高分子量麦谷蛋白亚基（HMW-GS）；宁夏小麦；品质1. 引言小麦（Triticum aestivum L.）作为全球最重要的粮食作物之一，对人类生活和经济社会发展具有重要意义。
而小麦品质的好坏直接关系到食品的口感和营养价值，因此一直是研究的热点之一。
麦谷蛋白是构成小麦种子细胞的主要蛋白质，其中高分子量麦谷蛋白亚基（HMW-GS）是影响小麦品质的重要因素之一。
HMW-GS是指分子量在60-90 kDa之间的麦谷蛋白亚基，可以形成亚基间的二硫键和非共价键，进而形成高分子量的麦谷蛋白。
HMW-GS的种类和含量都会影响小麦的品质，比如影响面团的弹性、延展性和面包的体积、弹性等。
因此，对HMW-GS进行分析和研究，对小麦品质的提高和优化具有重要的实际意义。
宁夏位于我国的西北地区，干旱少雨，光照强烈，土壤瘠薄，因此小麦品种的选育和生产存在一定的困难。
为了探究宁夏地区小麦品种HMW-GS的组成和变化特点，本研究采用SDS-PAGE和分子标记技术对44个小麦品种进行了分析，并对结果进行了讨论。
2. 材料与方法2.1 材料本研究共选取了44个宁夏地区小麦品种，其中包括北部、中部和南部地区的品种。
sdspage实验报告
sdspage实验报告SDS-PAGE实验报告实验目的：1. 掌握SDS-PAGE方法；2. 分离已知蛋白质混合物；实验原理：1. SDS-PAGE为电泳中最为常见的方法之一，全称为聚丙烯酰胺凝胶电泳，适用于蛋白质的分子量鉴定和分离。
2. SDS能够使蛋白质中的氢键断裂，从而蛋白质以线性方式伸展，且SDS与蛋白质的比例为1:1。
加入样品后，将样品加热，则蛋白质将失去“生态”本身性质。
3. 在SDS-PAGE系统中，电泳时各个组分在电泳区水平移动速度基于分子量大小的不同准则。
通常，较大的蛋白质分子运动速度较慢，而较小的蛋白质分子运动速度较快。
电泳结束后，蛋白质将大小分开并可以被染色。
实验操作：1. 加入样品并加热至90℃；2. 将样品移入聚丙烯酰胺凝胶中；3. 加入电解溶液并进行电泳分离；4. 取出凝胶并染色。
实验结果：在SDS-PAGE凝胶中，样品中的蛋白质已经被分离，并得到个单独的带。
通过与标准品分子量相比，可以确定分离得到的蛋白质的分子量。
实验结论：1. 随着电场强度的增加，蛋白质分子迁移距离会增加。
2. 蛋白质分子迁移速度与其分子量成反比例关系。
3. SDS-PAGE可以实现对复杂混合物的蛋白质分析和鉴定，同时对单一蛋白质的分析和鉴定也有较高的分离分辨率。
实验体会：通过本次实验我对SDS-PAGE更进一步的了解，以及掌握了实验中的各项操作步骤，操作难度不大。
在实验中，正确的实验技能能使我们更好的完成实验，并得到较好的实验结果。
参考文献：1. 杨宾, 刘其峰. 生命科学实验技术手册[M]. 北京:北京师范大学出版社, 2012.2. 韩芳.基因工程传代测序[M]. 农业出版社, 2006.。
SDS-PAGE技术分析小麦高分子量谷蛋亚基组成的研究
快 微 价 分 稳 管№ Ｄ － 理鲫 Ｓ ＳＰＡＧＥ 技术 分 析 小 麦 高 分 子 量 谷 蛋 亚 基 组 成 具 有 操 作 简 便 、 速 、 量 、 廉 、 辨 率 高 、 定 性 好 等 Ｍ
特点 。
关 键 词 ： 麦 品 质 ； ＤＳＰ Ｅ；高 分 子 量 谷 蛋 白亚 基 ；品 质 育 种 小 ｓ ＿ ＡＧ
ｃｍｐ ｓ ｉｎ ｂ ＤＳＰ ｏ ｏ ｉｏ ｙＳ － ＡＧＥ ｔｃ ｎ ｌｇ ｔ ｅ ｈ ｏｏ ｙ
Ｇａ ｕ ｏ ｇ，Ｗ ａ ｇ Ｃｈ ｎ ｈ ｉ ｏＪ ｒ ｎ ｎ ｅ ｇ ａ ，Ｌｉ ｈ ｎ ｆ ｅ ｇ ｕ，Ｆｅ ｇ Ｄｅ ｈ ｎ Ｓ ｎ ｓ ｕ
（ ｇ ｏ ｍ ｙ Ｃｏｌｅ Ａ ｒ ｎｏ ｌｇｅｏｆＳｈａ ｎｄｏ ｎｇ Ａｇｒｃ ｔ ａ ｎ ｖ ｒ ｉｙ， Ｓｈ ｎｄｏ ａＳｕｂ ｅ ｒ ｃ ｎｔ ｅ ｏ ｔｏ ｌＷ ｈｅ ｍ ｐ ｏ ｍ ｅ ｔＣｅ ｒ Ｔａ ’ ｎ ２ ０１ Ｃｈｉ ａ ｆ Ｎａ ｉｎａ ａｔＩ ｒ ｖｅ ｎ ｎｔｅ， ｉ ａ ７１ ８ ｎ）
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sds-page原理
sds-page原理SDS-PAGE原理。
SDS-PAGE，全称为聚丙烯酰胺凝胶电泳，是一种常用的蛋白质分离技术。
它利用凝胶作为分离介质，通过蛋白质的电泳迁移速度差异来实现蛋白质的分离和测定。
SDS-PAGE原理主要包括凝胶制备、蛋白质样品处理、电泳条件等几个方面。
首先，凝胶制备是SDS-PAGE的关键步骤之一。
通常使用聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶。
聚丙烯酰胺凝胶适用于分子量较小的蛋白质，而琼脂糖凝胶适用于分子量较大的蛋白质。
在制备凝胶时，需要添加聚丙烯酰胺和硫酸铵等物质，以形成凝胶网状结构，从而实现蛋白质的分离。
其次，蛋白质样品处理也是SDS-PAGE的重要环节。
在进行电泳前，需要将蛋白质样品加入含有SDS和β-巯基乙醇的样品缓冲液中进行变性处理，使蛋白质呈现带负电荷，并且使其在电场作用下呈现线性构象，从而消除蛋白质的空间构象对电泳迁移的影响，使蛋白质仅受到其分子量的影响。
最后，电泳条件的选择对SDS-PAGE的结果也有重要影响。
包括电泳缓冲液的配制、电泳电压和时间的设定等。
在电泳过程中，蛋白质样品会在电场作用下向阳极迁移，迁移速度与其分子量成反比。
因此，分子量较大的蛋白质会迁移较慢，分子量较小的蛋白质会迁移较快，从而实现蛋白质的分离。
总之，SDS-PAGE是一种简单、快速、灵敏的蛋白质分离技术，广泛应用于生物化学、分子生物学、生物医学等领域。
通过凝胶制备、蛋白质样品处理和电泳条件的选择，可以实现对蛋白质的高效分离和定量测定。
希望本文的介绍能够帮助您更好地理解SDS-PAGE的原理和应用。
sds-page原理
sds-page原理
SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离
和纯化技术。
其原理基于蛋白质在电场中的迁移速度与其分子量成反比的特性。
首先，将待测蛋白质样品经过还原剂（如巯基乙醇）和SDS （十二烷基硫酸钠）处理，使蛋白质在溶液中全部变成带负电荷的复合物。
SDS具有两个主要功能：一是在蛋白质分子表
面均匀地吸附SDS分子，使蛋白质带有大量负电荷；二是通
过SDS分子的疏水尾部与蛋白质间的相互作用，使蛋白质变
为线性构象。
然后，将经过处理的样品加入含有聚丙烯酰胺的凝胶电泳胶质中。
聚丙烯酰胺经过电极电解质反应形成网状物质，构成凝胶。
聚丙烯酰胺凝胶可以形成一系列孔隙，这些孔隙可以按照分子量的大小分离蛋白质。
在电泳进行时，电场的作用下，带负电的蛋白质复合物会向着电极迁移，迁移的速度与蛋白质分子量成反比。
较小分子量的蛋白质移动速度相对较快，而较大分子量的蛋白质移动速度相对较慢。
因此，蛋白质在凝胶中的分离程度与其分子量有关。
在电泳完成后，可以通过染色（如银染、荧光染等）或利用特定的蛋白质探针（如抗体或荧光标记探针）来检测和可视化分离的蛋白质。
然后，可以根据蛋白质的迁移距离和已知分子量蛋白质的迁移距离之间的关系推断待测蛋白质的分子量。
总之，SDS-PAGE通过利用电场迁移速度与蛋白质分子量之间的关系，实现了对蛋白质样品的分离与纯化。
它是一种简便、快速且广泛应用的分析方法，在生物学和生物化学领域中具有重要作用。
SDSPAGE测定蛋白质相对分子质量实验报告
SDSPAGE测定蛋白质相对分子质量实验报告实验报告：SDS测定蛋白质相对分子质量一、实验目的：通过SDS-技术测定蛋白质的相对分子质量。
二、实验原理：SDS-是一种常用的蛋白质电泳分离技术。
在该技术中，蛋白质样品与SDS（十二烷基硫酸钠）和还原剂混合后，加热可以使蛋白质完全还原并且与SDS结合，形成具有负电荷的复合物。
这些复合物在电场中按照其分子质量大小被分离。
蛋白质样品在SDS-中首先经过堆胶，即在样品中添加聚丙烯酰胺凝胶，蛋白质被沿着凝胶的宽度扩散，形成连续的蛋白质稜。
然后，电泳阶段开始，电场通过凝胶，带动带电的蛋白质稜向阳极迁移。
三、实验步骤：1.准备SDS-电泳胶液：根据使用说明配制3种浓度的聚丙烯酰胺凝胶胶液，即5%堆胶胶液、12%分离胶液和4%扩散胶液。
2. 准备样品：取相应的蛋白质样品，如细胞裂解液，将其与试剂R （含有30%甘油和2%β-巯基乙醇酰胺）和Laemmli试剂混合，以加热破坏蛋白质的二级结构。
3.堆胶：将堆胶胶液慢慢注入电泳槽中，留出足够的空间来注入分离胶液。
4.加载样品：在样品孔中加入相应数量的样品、分子量标记和模板。
5.电泳：将电泳槽连接到电源，调节电压，使电流保持稳定。
首先进行堆胶阶段，然后切换到电泳阶段，直至蛋白质移动到凝胶底部。
6. 凝胶染色：取下凝胶，用凝胶染色剂对凝胶进行染色。
一般常用染色剂有银染和Coomassie蓝染。
四、实验结果：根据实验步骤描述的方法进行实验后，我们观察到在凝胶上出现了多条蛋白质条带，每条条带代表一个蛋白质。
条带的颜色越深，表示其含量越多。
通过与分子量标记的对照，可以确定蛋白质的相对分子质量。
五、实验讨论与分析：根据实验结果，我们可以推断蛋白质的相对分子质量。
相对分子质量可以通过标准曲线法来计算，即通过已知相对分子质量的蛋白质标准品的移动距离与其相对分子质量之间的线性关系来推断未知蛋白质的相对分子质量。
通过SDS-技术测定蛋白质相对分子质量具有许多优点：能够同时分离多个蛋白质；能够对蛋白质进行集中分析；精确测量蛋白质的相对分子质量以及群体分子质量等。
sds-page测定蛋白质相对分子质量原理
sds-page测定蛋白质相对分子质量原理
SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）是一种常用的蛋白质分析技术，用于测定蛋白质的相对分子质量。
SDS-PAGE原理基于以下几个关键步骤：
1. 蛋白样品的准备：将待测蛋白样品与SDS（十二烷基硫酸钠）混合，使蛋白质表面被负电荷包裹。
2. 样品加载和电泳过程：将蛋白样品加载到聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel）中的孔洞中。
通常采用垂直电泳方式进行，将正电极和负电极连接至凝胶两端，通过电场使蛋白质向电泳方向迁移。
3. 分子分离：在电泳过程中，由于SDS的存在，样品中的蛋白质被完全解聚并带负电荷，使每个蛋白质分子的移动速率只与其相对分子质量成正比。
较小的蛋白质能够在凝胶中更快地迁移，较大的蛋白质则移动速率较慢。
4. 染色和可视化：电泳结束后，使用染色剂（如Coomassie蓝染色剂）将蛋白质染色，使其可见。
通过测量蛋白质在凝胶上的迁移距离，可以估计蛋白质的相对分子质量。
总结：SDS-PAGE利用SDS使蛋白质解聚并带负电荷，在电泳过程中按照相对分子质量的大小分离蛋白质，通过染色和测量蛋白质的迁移距离来估计其相对分子质量。
小麦麦谷蛋白的SDS-PAGE实验
小麦麦谷蛋白的SDS-PAGE电泳实验操作步骤（一）试剂配制编号名称浓度PH值终体积/ml 所需药品量加水量/ml1 Tris-Hcl 1M 8.8 250 30.275g 2202 Tris-Hcl 1M 6.8 100 12.11g 803 SDS 10% 50 5.0g4 40%Acr-Bis 100 0.52gBis，39.48gAcr 705 样品缓冲液 6.8 50 12ml甘油,0.757gTris4Gsds,6mg溴酚蓝366 10×电泳缓冲液8.3 1000 30gTris，10gSDS144g甘氨酸80807 蛋白提取液60 27ml 5号溶液3mlβ-巯基乙醇308 10%过硫酸氨（Aps）：用2.0ml的离心管，在1.5mlddH2O中加入0.15gAPS 充分振荡溶解，稍离心后置冰箱-20℃中保存，用时提前溶化。
9 染色液配制：称取0.1g考马司斯亮蓝R-250溶解于100ml甲醇和冰乙酸的混合水溶液中，混合液的比例为：水：甲醇：冰乙酸=53：40：7（V/V）。
染色液要用磁力搅拌器充分搅拌后使用。
（二）麦谷蛋白的提取取粉碎的小麦粉20mg 放于1.5ml 离心管里加入300ul 蛋白提取液，摇匀，静置30 min，沸水浴加热3～5 min，取出后8000rpm离心，抽取上清液于新管，冰箱4℃保存备用。
（三）10%分离胶和4%浓缩胶的配制溶液 10%分离胶 4%浓缩胶1M Tris-Hcl(PH8.8) 13.65ml1M Tris-Hcl(PH6.8) 1.56ml40% Acr/Bis 9ml 1.2ml10% SDS 0.36ml 120μlddH2O 12.6ml 9ml10% APS 0.36ml 120μlTEMED 30μl18μl总体积 36ml 12ml（四）电泳待胶凝好后，先轻轻摇动试样格，然后小心拔出。
如果加样槽不正或断裂，可用长针头扶正。
sds-page原理
sds-page原理
SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离和分析方法，其原理可以分为以下几个步骤：
1. 准备样品：将待分析的蛋白质样品溶解在含有SDS（十二烷基硫酸钠）和还原剂（如二巯基乙醇）的缓冲液中。
SDS
可以使蛋白质变为带有负电荷的线性形式，并破坏蛋白质之间的非共价相互作用；还原剂可以断裂蛋白质之间的二硫键。
2. 准备凝胶：通常使用聚丙烯酰胺（Polyacrylamide）作为凝胶材料，用于形成一个互联的三维网络结构。
通过改变凝胶的浓度和聚合物化学交联程度来调控凝胶的孔径大小。
3. 装配电泳装置：将经聚合的凝胶放置在电泳槽中，同时使凝胶与正、负极电极接触。
在前导缓冲液中加入迁移染色前蛋白样品。
4. 进行电泳：将电场通电，带电的蛋白质在电场力的作用下从凝胶上端迁移至下端。
由于SDS使蛋白质带有负电荷，所以蛋白质的迁移速率与其分子量反相关，分子量越大的蛋白质迁移速度越慢。
5. 染色和可视化：在电泳结束后，可以使用染色剂（如Coomassie蓝染剂）对蛋白质进行染色，可以直观地看到不同蛋白质的迁移情况。
还可以使用特异性的抗体进行免疫染色，以检测特定蛋白质的存在与否。
6. 分析和解释：通过测量蛋白质迁移距离和与已知分子量标准品的比较，可以确定待测蛋白质的相对分子量。
根据蛋白质在凝胶上的迁移位置，可以推测其可能的结构和功能。
总之，SDS-PAGE利用SDS破坏非共价相互作用，并使蛋白质带有负电荷，通过电场作用下的迁移速率差异，实现对蛋白质的分离和分析。
SDS-PAGE
标难曲线只对同
一块凝胶上旳样品 旳分子量测定才具 有可靠性。
样梳需一次平稳插入,梳 口处不得有气泡,梳底需 水平。
❖制备浓缩胶
通电
加入电极缓冲 液pH 8.3
加入样品
❖上样及电泳
浓缩胶 pH 6.8
开始电压恒定在80V，当进入分离胶后改为120V，溴 酚蓝距凝胶边沿约5mm时，停止电泳。
分离胶 pH 8.8
凝胶板剥离与染色
❖ 电泳结束后，撬开玻璃板，将凝胶板做好标 识后放在大培养皿内，加入染色液，染色1小 时左右。
5µl
❖制备分离胶
凝胶配制过程要迅速, 催化剂TEMED要在注胶前再加入。 注胶过程要一次性完毕,防止产愤怒泡。
封水或饱和 正丁醇溶液
出倒现出明水显或界正面丁时醇， 分并离用胶滤凝纸聚吸完干毕 （ ３０min~１h）
❖制备分离胶
加入分离胶溶 液 pH 8.8
封水旳目旳是使分离胶上表面平直，并排除气泡。 凝胶聚合好旳标志是胶与水层之间形成清楚旳界面。
聚丙烯酰胺凝胶性质
PAGE和SDS-PAGE旳比较
PAGE
SDS-PAGE
X-
-Y Z + SDS X
+
Y
Z
-
+
成果受分子量大小电荷形状旳影响
成果只与分子量大小有关
缓冲液系统
❖ 在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用旳是Tris－ HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.8，分离胶pH8.8；而电泳缓 冲液使用旳Tris－甘氨酸缓冲系统，pH8.3；上样缓冲液用 旳也是Tris－HCL缓冲系统，pH6.8，但里面加有甘油、溴 酚蓝、DTT或巯基乙醇。
过硫酸铵旳作用
聚丙烯酰胺凝胶性质
《SDSPAGE原理》课件
# SDSPAGE原理 ## 简介 - SDS-PAGE是一种常用的蛋白质分离技术 - 原理是利用SDS和PAGE对蛋白质进行分离
SDS
- SDS是一种表面活性剂 - 作用是将蛋白质中的电荷中和，并且线性化蛋白质
PAGE
- PAGE是聚丙烯酰胺凝胶电泳 - 电泳的基本原理是根据物质分子的电荷、体积及形状等特性在电场中行动速 率的不同而发生迁移分离
实验操作流程
1
1. 样品制备
准备待测蛋白样品
2
2. SDS-PAGE凝胶制备
制备聚丙烯酰胺凝胶用于电泳分离
3
3. 样品电泳
将样品施加电场进行电泳分离色剂对凝胶中分离出来的蛋白质进行染色
结果解析
- 蛋白质条带可根据大小或者电荷进行分类 - 比较不同样品之间蛋白质的差异
应用场景
生物化学实验室
用于分离和分析蛋白质样品
分子生物学实验室
用于研究蛋白质表达和功能
蛋白质组学研究
用于研究蛋白质组成和相 互作用
总结
- SDS-PAGE是蛋白质分离的重要手 - 实验操作流程和结果解析需要深入理解和掌握
简述SDS-PAGE的基本原理及其应用
简述SDS-PAGE的基本原理及其应用1. SDS-PAGE的基本原理SDS-PAGE（即聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种广泛应用于蛋白质分离和分析的电泳技术。
它基于蛋白质的大小和电荷差异，通过在聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳来分离样品中的蛋白质。
SDS-PAGE可以用于定性和定量分析蛋白质样品。
1.1 凝胶制备凝胶是SDS-PAGE分离蛋白质的平台。
最常用的是聚丙烯酰胺凝胶，它通过聚合丙烯酰胺单体形成网状结构。
凝胶可以根据需要选择不同的孔径，从而调整蛋白质的分离范围。
1.2 样品处理在进行SDS-PAGE之前，样品通常需要经过处理。
样品中的蛋白质会被添加一种名为SDS（十二烷基硫酸钠）的阴离子表面活性剂。
SDS会破坏蛋白质的三维结构，并赋予蛋白质一个负电荷。
反应的结果是，蛋白质以线性形式存在，并具有与其分子量成比例的电荷量。
此外，样品通常还需要经过热处理，以打断蛋白质间的非共价连接。
1.3 电泳分离将经过处理的样品加载到凝胶中，然后进行电泳过程。
在电场的作用下，蛋白质带着负电荷向着凝胶的阳极迁移。
由于负电荷的大小与蛋白质的分子量成正比，具有较小分子量的蛋白质会迁移得更远。
凝胶中的孔隙结构会阻碍蛋白质的大规模移动，从而实现了对不同分子量蛋白质的分离。
1.4 染色和成像蛋白质分离完成后，需要对凝胶进行染色来可视化蛋白质条带。
常用的染色方法包括银染和可溶性染料染色。
银染法灵敏度高，可检测到微量的蛋白质。
染色完成后，使用成像设备记录并分析蛋白质条带。
2. SDS-PAGE的应用SDS-PAGE技术被广泛应用于生物学研究和生物工艺领域。
以下是SDS-PAGE 的一些主要应用：2.1 蛋白质分离和纯化通过调整凝胶中的孔径和蛋白质样品的处理条件，可以实现对复杂蛋白质混合物的分离和纯化。
根据分离的结果，可以进一步研究和鉴定感兴趣的蛋白质。
2.2 蛋白质定量SDS-PAGE可以用于蛋白质的定量分析。
通过与已知浓度的标准蛋白质样品进行比较，可以估算未知样品中蛋白质的浓度。
完整word版,SDS-PAGE 各成分作用
SDS－PAGE电泳的原理及浓缩胶浓缩样品的原理（甘氨酸的作用）SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术。
下面就SDS-PAGE 的基本原理做简单介绍。
SDS－PAGE电泳的基本原理？SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS，SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS 溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS-PAGE电泳成功的关键是什么？①溶液中SDS单体的浓度SDS在水溶液中是以单体和SDS-多肽胶束的混合形式存在，能与蛋白质分子结合的是单体。
为了保证蛋白质与SDS的充分结合，它们的重量比应该为1∶4 或1∶3。
②样品缓冲液的离子强度因为SDS结合到蛋白质上的量仅仅取决于平衡时SDS单体的浓度，不是总浓度，而只有在低离子强度的溶液中，SDS单体才具有较高的平衡浓度。
所以，SDS电泳的样品缓冲液离子强度较低，常为10-100 mM。
③二硫键是否完全被还原只有二硫键被完全还原以后，蛋白质分子才能被解聚，SDS才能定量地结合到亚基上从而给出相对迁移率和分子质量对数的线性关系。
sds-page的分离原理
sds-page的分离原理标题：SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）的分离原理SDS-PAGE，全称为十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是一种广泛应用在生物化学和分子生物学领域中，用于分离、测定蛋白质分子量的重要技术手段。
其主要依据的是蛋白质在电场中的迁移率与它们的相对分子质量之间的关系进行分离。
**一、SDS的作用**SDS，即十二烷基硫酸钠，是一种阴离子表面活性剂，它能与蛋白质结合形成SDS-蛋白质复合物。
在这种复合物中，SDS的疏水尾部包裹住蛋白质分子，使得蛋白质原有的空间构象被破坏，所有的蛋白质都被线性化，并且每分子SDS覆盖大约两个氨基酸残基。
这样，蛋白质的净电荷就被SDS的负电荷所掩盖，因此，所有SDS-蛋白质复合物都带有相同密度的负电荷，且其电荷密度与蛋白质分子大小无关，这就消除了蛋白质本身电荷和形状对迁移速率的影响，使蛋白质的迁移速率仅取决于其分子量大小。
**二、聚丙烯酰胺凝胶的选择性分离**聚丙烯酰胺凝胶具有网络结构，孔径大小可通过改变单体浓度和交联度来调控。
在SDS-PAGE中，小分子量的蛋白质由于更容易进入凝胶的微孔结构中，迁移路程较长，而大分子量的蛋白质则因体积较大，不能深入微孔结构内部，从而迁移路程较短。
因此，在恒定电场的作用下，蛋白质按照分子量大小实现从上到下的有序分离。
**三、电泳过程及结果解读**在SDS-PAGE过程中，蛋白质样品在电场作用下向正极移动，经过一定时间后，根据迁移距离的不同，会在凝胶上形成一系列清晰的条带。
条带的位置与对应的蛋白质分子量之间存在一定的数学关系，通过已知分子量的标准蛋白质参照系统，可以精确地计算出未知蛋白质的分子量。
综上所述，SDS-PAGE的分离原理主要基于SDS对蛋白质进行变性及电荷标准化处理，以及聚丙烯酰胺凝胶对不同分子量蛋白的选择性滞留作用，实现了对复杂蛋白质混合物的高效、准确分离和定量分析。
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麦类作物学报 ２０１５，３５（１２）：１６５８－１６６３Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒｉｔｉｃｅａｅ Ｃｒｏｐｓ ｄｏｉ：１０．７６０６／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－１０４１．２０１５．１２．０８网络出版时间：２０１５－１２－１０网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３５９．Ｓ．２０１５１２１０．１６１７．０１６．ｈｔｍｌＳＤＳ－ＰＡＧＥ与分子标记相结合分析宁夏小麦ＨＭＷ－ＧＳ组成与变化特点白升升１，马丽１，王晓龙１，马棫灵１，张晓科１，陈东升２（１．西北农林科技大学农学院／国家小麦改良中心杨凌分中心，陕西杨凌７１２１００；２．宁夏农林科学院农作物研究所，宁夏永宁７５０１０５）摘 要：为了建立准确有效小麦ＨＭＷ－ＧＳ的检测方法，提高优质小麦品种鉴定和筛选效率，以已知ＨＭＷ－ＧＳ组成的１６份小麦品种为对照，优化完善ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合分子标记检测小麦ＨＭＷ－ＧＳ的方法，并对１０３份宁夏小麦品种进行了验证和分析。
结果表明，８．５％的分离胶可以有效区分除了Ｇｌｕ－Ｂ１位点的７＊、７ＯＥ与８＊亚基之外的其他亚基，分辨效果优良；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合Ｂｘ７ＯＥ、Ｂｘ７＊／Ｂｘ７和Ｂｙ８基因的分子标记可以准确鉴定小麦ＨＭＷ－ＧＳ。
在１０３份宁夏小麦品种中，发现１５种ＨＭＷ－ＧＳ和２９种组合类型；首次在该地区小麦品种的Ｇｌｕ－Ｂ１位点检测出了携带７ＯＥ、７＊和８＊亚基的品种；１／１７＋１８／５＋１０为当地小麦ＨＭＷ－ＧＳ的优势亚基组合类型，占２０％。
自１９７０年至２０１０年，ＨＭＷ－ＧＳ的优质亚基（１、１７＋１８和５＋１０）的出现频率呈明显增长趋势；宁夏小麦的ＨＭＷ－ＧＳ种类和优质亚基出现频率随品种更换呈增加趋势。
综上所述，分离胶浓度为８．５％的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｂｘ７ＯＥ、Ｂｘ７＊／Ｂｘ７和Ｂｙ８分子标记的方法可准确有效地检测小麦ＨＭＷ－ＧＳ组成，此方法可用于优质小麦品种的鉴定和筛选。
关键词：小麦；宁夏；ＨＭＷ－ＧＳ；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ；分子标记中图分类号：Ｓ５１２．１；Ｓ３３０ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－１０４１（２０１５）１２－１６５８－０６Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＨＭＷ－ＧＳ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ ＳＤＳ－ＰＡＧＥａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ｎｉｎｇｘｉａ ＷｈｅａｔｓＢＡＩ Ｓｈｅｎｇｓｈｅｎｇ１，ＭＡ Ｌｉ １，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏｌｏｎｇ１，ＭＡ Ｙｕｌｉｎｇ１，ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏｋｅ１，ＣＨＥＮ Ｄｏｎｇｓｈｅｎｇ２（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｏｎｏｍｙ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ ７１２１００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｈｅ Ｃｒｏｐ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｎｉｎｇｘｉａ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｙｏｎｇｎｉｎｇ，Ｎｉｎｇｘｉａ ７５０１０５，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｂｕｉｌｄ ａｎ ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｗｈｅａｔ ｈｉｇｈ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｇｌｕ－ｔｅｎｉｎ ｓｕｂｕｎｉｔｓ（ＨＭＷ－ＧＳ）ａｎｄ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ａｄｖａｎｃｅｄｗｈｅａｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ，ｔｈｅ ｋｎｏｗｎ ＨＭＷ－ＧＳ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｗａｓ ａｎａｌｙｓｅｄ ｕｓｉｎｇ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ １６ｃｏｎｔｒｏｌ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ．Ａｎｄ ｔｈｅｎ １０３Ｎｉｎｇｘｉａ ｗｈｅａｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｏｆ ８．５％ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ｇｅｌ ｉｎ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ｃｏｕｌｄ ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ １６ｃｏｎｔｒｏｌｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｗｉｔｈ ｋｎｏｗｎ ＨＭＷ－ＧＳ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｅｘｃｅｐｔ ７ＯＥ，７＊ａｎｄ ８ｓｕｂｕｎｉｔ ａｔ Ｇｌｕ－Ｂ１ｌｏｃｕｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓ ｔｈａｔ ｃｏｕｌｄ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｇｅｎｅｓ Ｂｘ７ＯＥ，Ｂｘ７＊／Ｂｘ７ ａｎｄ Ｂｙ８．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ １５ＨＭＷ－ＧＳ ａｎｄ ２９ｓｕｂｕｎｉｔｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｉｎ １０３Ｎｉｎｇｘｉａ ｗｈｅａｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ．７ＯＥ，７＊ａｎｄ ８＊ｓｕｂｕｎｉｔｓ ｗｅｒｅ ｆｉｒｓｔｌｙ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｎｉｎｇｘｉａｗｈｅａｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｗａｓ １／１７＋１８／５＋１０ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆ ２０％．Ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｓｕｂｕｎｉｔｓ（１，１７＋１８ａｎｄ ５＋１０）ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇｏｏｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆｉ－ｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｅｎｄｅｎｃｙ ｆｒｏｍ １９７０ｔｏ ２０１０．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａｎ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｅｎｄｅｎｃｙ ｉｎ ＨＭＷ－ＧＳ ｔｙｐｅｓ收稿日期：２０１５－０８－０４ 修回日期：２０１５－０８－２６基金项目：宁夏农业育种专项；宁夏科技支撑计划（国际科技合作）项目（２０１３ＺＹＨ１９６）；宁夏农林科学院自主研发项目（ＮＫＹＧ－１３－０２）；宁夏自然科学基金项目（ＮＺ１３１０８）；西北农林科技大学唐仲英育种基金项目第一作者Ｅ－ｍａｉｌ：ｂａｉｓｓｈｅｎｇ＠１６３．ｃｏｍ通讯作者：张晓科（Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｘｉａｏｋｅ６６＠１２６．ｃｏｍ）；陈东升（Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｄｓｎｋｙ＠１６３．ｃｏｍ）ａｎｄ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｑｕａｌｉｔｙ ＨＭＷ－ＧＳ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｗｈｅａｔ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｉｎ Ｎｉｎｇｘｉａ．Ｉｎ ｓｈｏｒｔ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ８．５％ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ｇｅｌ ｉｎ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｔｈａｔ ｃｏｕｌｄｉｄｅｎｔｉｆｙ ｇｅｎｅｓ Ｂｘ７ＯＥ，Ｂｘ７＊／Ｂｘ７ ａｎｄ Ｂｙ８ｉｓ ａｎ ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＨＭＷ－ＧＳ，ａｎｄｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｗｈｅａｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｆｏｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｂｒｅｅｄｉｎｇ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｗｈｅａｔ；Ｎｉｎｇｘｉａ；ＨＷＭ－ＧＳ；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｋｅｒｓ 小麦谷蛋白由高分子量谷蛋白亚基（ＨＭＷ－ＧＳ）和低分子量谷蛋白亚基（ＬＭＷ－ＧＳ）组成。
ＨＭＷ－ＧＳ仅占面筋蛋白的１０％左右，但对面筋弹性起着重要的作用，是小麦品质改良的关键因子［１］。
ＨＭＷ－ＧＳ由位于小麦１Ａ、１Ｂ和１Ｄ染色体长臂上的Ｇｌｕ－Ａ１、Ｇｌｕ－Ｂ１和Ｇｌｕ－Ｄ１（统称Ｇｌｕ－１位点）３个位点上的基因共同编码。
每个位点包含两个紧密连锁的等位基因，分别编码ｘ型和ｙ型ＨＭＷ－ＧＳ［２］。
常见的ＨＭＷ－ＧＳ有Ｇｌｕ－Ａ１位点的１、Ｎｕｌｌ和２＊，Ｇｌｕ－Ｂ１位点的６＋８、７、７＋８、７＋９、１３＋１６、１４＋１５和１７＋１８，Ｇｌｕ－Ｄ１位点的２＋１２、４＋１２和５＋１０。
不同ＨＭＷ－ＧＳ对小麦加工品质的效应不尽相同。
已有研究表明，就单个亚基而言，１、２＊、１７＋１８、７ＯＥ＋８＊和５＋１０亚基对小麦品质影响较大［１－３］。
其中，７ＯＥ亚基表达量高于７，常常被认为与超强筋小麦特性相关［４－５］。
７ＯＥ的分子量与７亚基相同，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱中常常被误读为７亚基，７＊亚基与７仅有６个氨基酸的差异，导致其在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中的迁移率十分接近，也容易被误读为７亚基。
８＊与８亚基的迁移率相同，常被误读为８亚基。
７＊亚基首次在小麦品种Ｃｈｅｙｅｎｎｅ中被发现，经Ａｎｄｅｒｓｏｎ和Ｇｒｅｅｎｅ［６］对Ｃｈｅｙｅｎｎｅ与中国春（为７亚基标准对照）中Ｂｘ７基因的序列比对，发现Ｃｈｅｙｅｎｎｅ中的Ｂｘ７基因在编码区存在一个１８ｂｐ的缺失，推测Ｃｈｅｙｅｎｎｅ的Ｂｘ７亚基在Ｃ末端比７亚基少一个６肽（ＱＰＧＱＧＱ）；同年，这种比７亚基迁移率略小的亚基被命名为７＊亚基。
Ｍａｒｃｈｙｌｏ等［５－７］通过ＲＰ－ＨＰＬＣ成功地鉴定了７ＯＥ以及８＊与８亚基，但未能区分７＊和７亚基。
Ａｌｂｅｒｇｈｉｎａ等［８］使用ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ分析中国春和Ｃｈｅｙｅｎｎｅ发现，在Ｃｈｅｙｅｎｎｅ中７亚基的Ｃ端附近检测到了一个６肽的缺失，进一步证明了Ａｎｄｅｒｓｏｎ和Ｇｒｅｅｎｅ的推测。
随着大量ＨＭＷ－ＧＳ基因的克隆，可用于ＨＭＷ－ＧＳ检测的相关分子标记被大量报道，特别是Ｒａｇｕｐａｔｈｙ等［４］、Ｌｅｉ等［９］和Ａｒａｃｅｌｉ等［１０］开发的分子标记，对准确鉴定７ＯＥ、７＊与７和８与８＊亚基提供了一种准确有效的途径。
宁夏作为我国重要的春小麦生产基地，其品质特性是当地小麦品质改良的重要目标。
有关宁夏小麦品种的ＨＭＷ－ＧＳ组成研究中，多采用单一的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行鉴定［１１－１２］，对其难于鉴定的ＨＭＷ－ＧＳ（如７＊、７ＯＥ和８＊）尚未见报道。
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ是检测ＨＭＷ－ＧＳ最常用方法，通常７％～１０％分离胶浓度就可将绝大部分的ＨＭＷ－ＧＳ有效区分，但对于迁移率相近或相同的ＨＭＷ－ＧＳ鉴定较为困难［１３－１４］。
为此，本研究结合７．５％、８．０％、８．５％、９．０％和９．５％五种不同分离胶浓度的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｂｘ７ＯＥ、Ｂｘ７＊／Ｂｘ７和Ｂｙ８基因的分子标记，分析已知ＨＭＷ－ＧＳ组成的１６份小麦品种，以期建立一套准确鉴定小麦ＨＭＷ－ＧＳ的方法；并对１０３份宁夏推广小麦品种的ＨＭＷ－ＧＳ进行鉴定分析，为小麦品质育种和种质资源的筛选和评价提供准确有效的方法，以加快小麦品质改良的步伐。
１ 材料与方法１．１ 供试材料选取已知ＨＭＷ－ＧＳ组成的１６份小麦品种用于鉴定方法的建立（表１）。
以１０３份宁夏推广小麦品种为待测材料，验证所建方法的有效性。
１．２ 小麦谷蛋白提取和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳将待测小麦籽粒用研钵捣碎，放置于１．５ｍＬ离心管中，加入６００μＬ蛋白提取液，涡旋仪上混匀（６０ｓ），静置１ｈ后沸水浴５ｍｉｎ，４℃８ ０００ｒ·ｍｉｎ－１离心５ｍｉｎ，将上清液直接用于电泳或４℃保存待用。