【医学】抗酸染色+标本片
抗酸染色——标准操作
抗酸染色一、原理本试剂盒采用WHO推荐的Ziehl-Neelsen法分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
二、试剂石碳酸复红染液、酸性酒精溶液、亚甲蓝溶液三、方法1.涂片：参见各标本操作程序涂片，涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰2.固定：常用高温进行固定。
即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。
要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色3.染色3.1 滴加石碳酸复红染液盖满玻片，染色10分钟或更久，无需加温3.2 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.3 滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色1-2分钟，如有必要，需流水冲去溶液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止3.4 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.5 滴加亚甲蓝溶液，染色30秒钟3.6 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水，待玻片干燥后镜检3.7 一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块四、结果判定1.干燥后油镜观察300个视野（观察时间不少于4min），抗酸性细菌呈红色，其它细菌或细胞呈蓝色2. 报告方式2.1 未找到抗酸杆菌2.2 找到抗酸杆菌±：可疑，发现抗酸杆菌1-2条/300视野2.3 找到抗酸杆菌1+：发现抗酸杆菌3-9条/100视野2.4 找到抗酸杆菌2+：发现抗酸杆菌1-9条/10视野2.5 找到抗酸杆菌3+:发现抗酸杆菌1-9条/1视野2.6 找到抗酸杆菌4+：发现抗酸杆菌≥10条/1视野五、注意事项1.每一玻片只能涂一份标本，以防脱落混淆2. 脱色时间需根据涂片厚薄而定，厚片可适当延长，以无红色脱出为止3. 冬季室温过低时，染色时间要适当延长4. 有时同一个抗菌体上红色深浅也有不同，观察时应注意5. 每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发，储存时应避免高、低温及阳光照射6. 在涂抹痰标本时，严禁对玻片加热7. 染色时勿使玻片上的染液干燥六、临床意义分支杆菌属（结核分支杆菌、麻风分枝杆菌、非典型分支杆菌）、放线菌抗酸染色阳性，可初步鉴定细菌。
医学微生物学实验二抗酸染色
实验考试
（五）实验结果
初染
石
脱色
盐 酸 酒 精
复染
碱 性 美 兰
未染色
初染后
脱色后
复染后
红色为抗酸染色阳性； 蓝色为抗酸染色阴性。 红色为抗酸染色阳性； 蓝色为抗酸染色阴性。
结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序， 结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝 状生长；背景及非抗酸性细菌呈兰色。 状生长；背景及非抗酸性细菌呈兰色。
二实验原理分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质主要是分枝菌酸它包围在肽聚糖的外面所以分枝杆菌一般不易着色要经过加热和延长染色时间来促使其着色同时分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后就很难被酸性脱色剂脱色故名抗酸染色
医学微生物学实验二
微生物学教研室： 微生物学教研室：3029130
科教科： 科教科：3029945
实验内容
1.实验一结果的观察和分析； 1.实验一结果的观察和分析； 实验一结果的观察和分析 2.细菌内毒素的检测技术； 2.细菌内毒素的检测技术； 细菌内毒素的检测技术 3.抗酸染色； 3.抗酸染色； 抗酸染色 4.实验考试。 4.实验考试。 实验考试
一、实验一结果的观察和分析
咽喉部细菌
空气中细菌
ห้องสมุดไป่ตู้三）实验材料
1.细菌： BCG）。 1.细菌：卡介苗 （BCG）。 细菌 2.抗酸染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、 2.抗酸染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱 抗酸染液 盐酸酒精 性美兰溶液。 性美兰溶液。 3.其它：接种环、酒精灯、载玻片，玻片夹等。 3.其它：接种环、酒精灯、载玻片，玻片夹等。 其它
二、内毒素的检测技术 鲎试验） （鲎试验）
1.内毒素检测方法 1.内毒素检测方法 家兔发热法，鲎试验。 家兔发热法，鲎试验。
抗酸染色
检验科
抗酸染色
作业指导书
文件编号：
第1页，共1页
版本：第一版，第0次修改
生效日期：2011年4月
一、目的
主要用于结核杆菌等抗酸性菌的涂片染色。
二、原理
结核菌、麻风杆菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜而不易着色，但一经着色后，酸性酒精的作用亦是不容易把它脱色。
三、试剂组成
1、石碳酸复红溶液
6、滴加亚甲基蓝溶液，染色30秒钟。
7、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去亚甲基蓝溶液，然后沥去标本上剩余的水，
待玻片干燥后镜检。
五、结果解释
在淡蓝色背景下，抗酸性菌呈红色，其他细菌及细胞呈蓝色。
六、注意事项
1、染色时勿使玻片上的染液干燥。
2、涂抹后的痰膜不能太厚或太薄，以透过痰膜看报纸上的5号字时字迹较模糊，为适宜的厚度；看不见5号字或很清晰，则表明该玻片涂抹太厚或太薄。
2、酸性酒精溶液
3、亚甲基蓝溶液
4、
四、检验方法
1、涂片自然干燥后加热固定。
2、滴加石碳酸复红溶液盖满玻片，加热至蒸汽后停止加热，保持染色5分钟。
3、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水。
4、自痰膜上端外缘滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色1~2分钟。
5、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去酸性酒精溶液，沥去标本上剩余的水。
3、由于香柏油能够溶解复红染料，使萋-尼氏染色褪色，并且容易干燥凝结，对油镜头造成损害，故禁止使用香柏油，必须使用显微镜专用的镜油
4、酸性酒精溶液用完后，可自制5%盐酸酒精溶液作为脱色液。
5、每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发。
6、试剂贮存时，尽量避免高温、低温环境及阳光直射。
7、本试剂应由专业人员使用。
实验九抗酸染色
3）复染：用碱性美兰溶液复染1’，用水冲洗后用吸 水纸吸干。
3、油镜观察
五、实验结果：
结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无 序，偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
六、注意事项：
1、无菌操作 2、涂片厚度要适中 3、固定 4、冲洗 5、染色时间 6、初染加热的温度，勿沸腾
一、实验目的：
1.掌握抗酸染色的原理和方法
2掌握结核分支杆菌痰涂片的报告方 法。
二、实验原理：
❖ 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分 枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌 一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促 使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合 后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
1、细菌涂片的制备 1）涂片：20mm*25mm薄涂片或
20mm*15mm厚涂片 2）干燥：自然干燥 3）固定：火焰固定
四、实验方法：1、细菌涂片标本制备涂片干燥固定
2、染 色
1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红 2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽 即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免 干涸，加热5-10分钟，待标本冷却后用水冲洗。
准备
❖ 细菌：卡介苗 ❖ 染液：抗酸染液（2套/室） ❖ 其它：载玻片（1张/人）、结核分枝杆菌示
教片（1张/人） ❖ 痰标本 8盒
❖ 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与 石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理 也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍 然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。
三、实验材料：
细菌：结核杆菌 染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美
《抗酸染色+标本》课件
这种方法使用荧光染色剂，使抗酸菌呈现黄绿色荧光，有助于快速检测。
Ziehl-Neelsen染色的步骤是什么？
1
制备涂片
将待染菌涂于玻璃载玻片上，形成细加热固定 Nhomakorabea2
菌单层。
用加热法使细菌附着在载玻片上，并
固定其形态和结构。
3
染色
在载玻片上滴加抗酸染色剂，使细菌
脱色
4
呈现红色。
与常规染色相比，抗酸染色更具选择性，能够突出抗酸菌的特征。同时，抗 酸染色也需要使用特定的染色剂和技术步骤，以扩大可观察的细菌范围。
抗酸染色有哪些常用方法？
1 Ziehl-Neelsen染色法
这种方法使用碱性染色剂和酸性脱色剂，使抗酸菌呈现红色，而其他细菌则呈现蓝色。
2 Kinyoun染色法
与Ziehl-Neelsen染色法类似，但使用的染色剂浓度更高，可以更好地突出抗酸菌的颜色。
抗酸染色的原理基于细菌细胞壁的化学成分差异。染色过程中，通过特定染 色剂的作用，使得抗酸菌呈现鲜艳的颜色，而其他细菌则没有被染色。
抗酸染色的应用范围是什么？
抗酸染色广泛应用于微生物学、医学诊断和环境卫生等领域。它可以帮助研 究人员识别和鉴定细菌群落，并在疾病诊断和卫生监测中起到重要作用。
抗酸染色与常规染色有什么不 同？
抗酸染色的结果如何分析？
抗酸染色结果可通过显微镜观察，根据染色颜色、形态、结构等特征来鉴定 和分析细菌的种类和数量，从而得出相关结论。
抗酸染色中常见的误诊是什么？
在抗酸染色过程中，可能会出现误诊情况，例如未正确定位抗酸菌，染色剂 浓度不足或过量等。正确的技术操作和经验可以减少误诊的发生。
抗酸染色在细菌学研究中的应用案例。
抗酸染色操作
抗酸染色操作程序【检验原理】抗酸染色可将细菌分为两大类，即抗酸性细菌和非抗酸性细菌，因日常大多数病原菌为非抗酸性细菌，所以抗酸染色不作为临床上常规的细菌检测项目，只针对结核病等具有抗酸性细菌标本的染色。
【主要组成成分】1.石碳酸复红溶液2.脱色剂（3%盐酸酒精溶液）3.复染液（吕氏美兰溶液）【样本要求】1.直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率；2.直接用细菌染色，要注意防护，以防生物感染。
【检验方法】1.涂片经火焰固定，加1液徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。
染5分钟（若染色奴卡氏菌需要更长时间），水洗。
2.加第2液不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗；3.加3液，染0.5-1分钟，水洗。
4.干后油镜镜检。
【结果判断】分支杆菌在暗背景中呈红色，背景为蓝色。
镜检结果分级报告抗酸杆菌阴性（-）：连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌抗酸杆菌阳性（报告抗酸杆菌菌数）：1~8条/300视野抗酸杆菌阳性（1+）：3~9条/100视野，连续观察300个视野抗酸杆菌阳性（2+）：1~9条/10视野，连续观察100个视野抗酸杆菌阳性（3+）：1~9条/每视野抗酸杆菌阳性（4+）：≥10条/每视野【注意事项】1、严格掌握脱色时间，要脱色充分，脱色时间过短易使红色的石炭酸复红染料残留显红色而造成假阳性。
2、在染片过程中，加1液后一定要酒精灯徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾，这样才能使细菌充分着色。
3、石碳酸对皮肤、粘膜有强烈的刺激性和腐蚀性，使用时要注意安全，如果不慎沾到皮肤上，立即用水或酒精冲洗。
4、涂片染色阳性只能说明抗酸杆菌的存在，不能区分是结核菌还是非结核分支杆菌。
抗酸染色Kinyoun染色法
3 用抗酸染液将涂片浸泡 5~10min，不必加热；
4 弃去染液，冷却后用水洗载玻片，在加下一个溶液之前去除多余的水分； 5 加脱色液分色 15~20sec，手持载玻片的一端，是载玻片呈一定的角度，使分色液顺载玻 片的另一端流下，直至颜色不再改变；
6 用复染液复染 30sec；
7 用 95%乙醇脱水 2min、100%乙醇脱水 2min、二甲苯透明 2×5min； 8 封片剂封片，显微镜下观察。
结果
抗酸菌染成红色，非抗酸菌及细胞均染成淡蓝色。
注意事项
1 抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，
须掌握复染时间。如果背景过深，影响镜检。
2 诺卡菌可呈弱抗酸性，染色时间比抗酸杆菌稍长。取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象， 视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察
时应予注意。
3 如果您第一次使用本试剂盒，建议做 1~2 个预实验。 温馨提示
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。
储存温度
室温下避光储存 6 个月。 包装清单
货号
品名
包装
ST043A
抗酸染液
100mL
ST043B
脱色液
100mL
ST043C
复染液
100mL
说明书
1份
1
抗酸染色（Kinyoun 染色法）
抗酸染色（Acid-fas，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以
分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌
酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
实验流程
抗酸染色的操作及临床应用
抗酸染色的操作及临床应用抗酸染色是一种在临床病理学中常用的技术，用于检测和诊断与酸性染料亲和的微生物，特别是结核分枝杆菌。
这种染色方法被广泛应用于结核病的确诊、治疗监测及相关疾病的鉴别诊断。
下面将详细介绍抗酸染色的操作及临床应用。
操作方法：1. 原料准备：准备好益氏染液、酸酒红溶液、高锰酸钾溶液、酸性酮液、甲苯、绝对醇和脱脂溶剂等试剂和溶液。
2. 标本制备：将待检标本如痰液、尿液、刮片等经过前处理（如离心、加热、电洗等）后涂片制备，并将涂片固定在90摄氏度的焙烧烘箱中固定片上3~5秒钟，然后用冷水洗净。
3. 染色操作：将固定的检测标本涂片用甲苯浸泡2~5分钟，将甲苯吸出后加入酒精脱脂2~5分钟，然后再用绝对醇脱脂2~5分钟，最后用脱脂溶剂脱脂30~120秒。
4. 抗酸染色：将脱脂后的标本涂片完全浸入益氏染液中，保持液面在标本上1~2毫米高，将益氏染液再加热到80摄氏度，静置5~10分钟，待酸性酮为蓝色。
5. 染色反应：用高锰酸钾溶液滴落在标本上，加热到细菌虫红颜色被去掉，再滴落高锰酸钾溶液热到细菌虫红显现为红色。
6. 清洗与固定：倾倒掉多余的染色剂和高锰酸钾溶液，用自来水彻底冲洗，将标本涂片风干或用吹风机吹干。
7. 反染：将涂片溶于酸酒红溶液中，温和地与酸酒红反应。
反应结束后，再次用自来水冲洗，风干，镜片上缀油。
临床应用：1. 结核菌检测：抗酸染色是诊断结核病的重要手段之一。
通过检测患者痰液、刮片等标本中的抗酸染色-阳性颗粒，可以快速、敏感、直观地进行结核分枝杆菌的检测和诊断。
2. 结核病确诊：抗酸染色技术作为结核病的初筛方法，可帮助医生进行早期诊断和治疗。
对于疑似结核病患者，通过抗酸染色检测可快速识别结核菌，指导早期治疗方案的制定。
3. 结核病治疗监测：抗酸染色技术可用于结核病治疗效果的评价和疗程的调整。
治疗过程中，定期检测患者的痰液标本，观察结核菌的存在和培养基的数量，以判断治疗效果并及时调整治疗策略。
《医学微生物学》抗酸染色与墨汁负染色方法实验
《医学微生物学》抗酸染色与墨汁负染色方法实验[目的]1．掌握结核分枝杆菌形态、染色特点。
2．掌握新生隐球菌的形态特点。
3．掌握抗酸染色法。
4．掌握墨汁负染色法。
[内容]1．结核病人痰液的检查。
2．墨汁负染色法。
一、结核分枝杆菌抗酸染色结核病人痰液的检查[抗酸染色原理]分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，特别是其中大量分枝菌酸可影响染料穿入。
石炭酸复红染色加加速剂染色后可以染上，着色后不易被盐酸酒精脱色。
[材料]结核病人的痰液标本、抗酸染色液、木夹、显微镜等。
[方法]1．涂片制备用无菌棉签挑取结核病人痰液标本中的脓性或干酪样部分，在载玻片均匀涂抹成2×2cm大小的卵圆形痰膜；也可待干燥后再涂一层，制成厚膜涂片。
自然干燥，火焰固定，于涂片外周用蜡笔画圈。
2．抗酸染色法（1）初染：用木夹夹住玻片的一端，滴加石炭酸复红染液和加速剂数滴，维持1分钟后水洗，甩干。
（2）脱色：用3%盐酸酒精脱色，至无红色染液流下为止，水洗，甩干。
（3）复染用碱性美兰染色1分钟，水洗。
自然或用吸水纸吸干。
（4）油镜检查。
[结果]结果观察与报告方式：1)抗酸染色标本镜检：在淡蓝色背景下可见染成红色的细长或略带弯曲的杆菌，并有分枝生长趋向，为抗酸染色阳性菌(图6-1)。
其他细菌和细胞呈蓝色。
直接涂片标本中常见菌体单独存在，偶见团聚成堆者。
若在痰、脑脊液或胸、腹水中找到抗酸菌，其诊断意义较大。
显微镜物镜(100×)所见结果按下列标准报告：仔细观察300视野(观察时间不少于4min)，未发现抗酸杆菌。
士：可疑。
发现抗酸菌l～2条／300视野。
1+：发现抗酸菌3～9条／100视野。
2+：发现抗酸菌1～9条／10视野。
3+：发现抗酸菌1～9条／每视野。
4+：发现抗酸菌≥10条／每视野。
以上报告方式只适于直接涂片，对集菌法涂片应按“发现抗酸菌”或“未发现抗酸菌”报告。
图6-1 结核分枝杆菌抗酸染色二、新生隐球菌墨汁负染色法[器材和试剂]1．菌种新生隐球菌。
抗酸染色镜检的操作规程
抗酸染色镜检的操作规程1.目的:通过抗酸染色鉴别结核杆菌.2.原理:一般认为抗酸性菌体内含脂类物质较多,此物质具有抗酸的性质.染色时,它与石碳酸复红结合牢固,能抵抗酸性酒精的脱色作用,同时脂类又不易透过细胞膜,不能被脱色,因此抗酸菌能保持复红的颜色.相反,非抗酸性菌体内含脂类少,易被酸性酒精脱色,脱色时又易从细胞膜渗出而脱掉,最后被复染蓝色.3.试剂:3.1试剂来源:购买珠海贝索3.2试剂盒组成:R1:石碳酸复红溶液1χ100ml R2:酸性酒精溶液1χ100mlR3:亚甲基蓝溶液1χ100ml4.质量控制:室内质控包括痰标本收集,痰片染色和镜检结果复查.痰涂片应保存供上一级参比实验室质量控制检查.5.标本采集与处理:5.1病人留标本前用清水漱口,用力咳出来自支气管深部的脓样或粘液样痰,量不少于3ml避免留唾液或鼻咽部分泌物.5.2夜间痰为就诊前一天晚睡前咳出的痰液.5.3初诊病人应送3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰),痰液不合格者重送.5.4涂片:取脱脂过的干燥、清洁、无油污的新玻片，在玻片背面的左端1/3处以记号笔编号,用折断的竹签挑取痰标本的脓样,干酪样0.1ML,于玻片上均匀涂抹成2ⅹ2.5CM卵圆形痰膜,自然干燥后待检.6.染色方法:6.1用片夹夹住涂片火焰固定,加石碳酸复红溶液,徐徐加热至有蒸汽出现染5分钟,水洗.6.2加脱色剂,不时摇动玻片至无色脱落为止,水洗.6.3加复染液,染0.5-1分钟,水洗涂片后镜检.滴1-2滴香柏油,用油镜仔细观察.8.结果的判断:结核杆菌呈红色,其它细菌呈蓝色.9.实验完后的处理:9.1先用擦镜纸将镜头上的油擦去,再用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2-3次,最后用干净擦镜纸擦2-3次,向一个方向擦拭。
9.2废弃玻片放入5% 84消毒液中浸泡60分钟,消毒液要每天更换。
9.3痰盒和废弃标本等污染物应弃于有盖的污物桶内,消毒后焚烧。
9.4痰检完成后,操作台面用5% 84消毒剂 液擦拭后,紫外线灭菌灯照射30分钟。
实验九抗酸染色.ppt.ppt
准备
细菌：卡介苗 染液：抗酸染液（2套/室） 其它：载玻片（1张/人）、结核分枝杆菌示教片（1张/
人） 痰标本 8盒
历史ⅱ岳麓版第13课交通与通讯 的变化资料
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[自读教材·填要点]
一、铁路，更多的铁路 1．地位 铁路是 交通建运设输的重点，便于国计民生，成为国民经济 发展的动脉。 2．出现 1881年，中国自建的第一条铁路——唐山 至开胥平各庄铁 路建成通车。 1888年，宫廷专用铁路落成。
出口价格同步变动的现象。与这一现象直接相关的近代事
业是
()
A．电报业
B．大众报业
C．铁路交通业 D．轮船航运业
[解析] 材料主要反映了信息交流的快捷，故选A。
[答案] A
[题组冲关]
3．假如某爱国实业家在20世纪初需要了解全国各地商业信
息，可采用的最快捷的方式是
()
A．乘坐飞机赴各地了解 B．通过无线电报输送讯息
2．特点 (1)近代中国交通业逐渐开始近代化的进程，铁路、水运和 航空都获得了一定程度的发展。 (2)近代中国交通业受到西方列强的控制和操纵。 (3)地域之间的发展不平衡。 3．影响 (1)积极影响：促进了经济发展，改变了人们的出行方式， 一定程度上转变了人们的思想观念；加强了中国与世界各地的 联系，丰富了人们的生活。 (2)消极影响：有利于西方列强的政治侵略和经济掠夺。
动了经亥革命和国民大革命顺应
时
代潮流
图说历史
主旨句归纳
(1)1911年，革命党人发动武昌起义，辛亥
革命
爆发，随后建立了中华民国，颁布了《中
华
民国临时约法》；辛亥革命是中国近代化
进
程的里程碑。
(2)1924年国民党“一大”召开，标志着第 一
抗酸染色
抗酸染色一般步骤1）初染
用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。
2）脱色
3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟；用水冲洗。
3）复染
用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察。
抗酸染色的染液配制
1、石炭酸复红
碱性复红酒精饱和溶液 10mL
5%石炭酸 90mL
2、3%盐酸酒精
浓盐酸 3mL
95%酒精 97mL
3、吕氏美兰液
美兰酒精饱和液 30mL
氢氧化钾（1:10000） 100mL
抗酸染色的原理
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
抗酸染色法标本片制作注意事项
抗酸染色法标本片制作注意事项抗酸染色法是一种常用的组织学染色技术，它可以使细胞核染色出深蓝色，而胞质染色出粉红色或红色，从而使细胞核与胞质之间的差异更加明显。
在进行抗酸染色法标本片制作的过程中，需要注意以下几个方面。
一、标本的选择与处理在进行抗酸染色法标本片制作之前，首先需要选择合适的标本进行处理。
一般情况下，可以选择组织固定后的切片作为标本。
在选择标本的过程中，应注意标本的新鲜度和完整性，避免标本受损或变质。
在处理标本之前，需要对其进行适当的处理，以确保标本的质量。
常见的处理方法包括组织固定、脱水和包埋等步骤。
在进行这些处理的过程中，应注意操作的规范性和标本的完整性，避免对组织结构的破坏。
二、染色试剂的配制与储存抗酸染色法的成功与否很大程度上依赖于染色试剂的质量。
因此，在进行标本片制作之前，需要事先准备好各种染色试剂，并确保其质量良好。
在配制染色试剂时，应严格按照标准操作流程进行，避免试剂的浓度和比例出现误差。
同时，还需要注意试剂的保存条件，避免受潮、受热或受光等因素的影响。
三、标本片的制作与染色标本片的制作过程包括切片、贴片和染色等步骤。
在进行这些操作的过程中，需要注意以下几个方面。
1. 切片：在进行切片的过程中，应注意刀片的锋利度和切片的厚度。
刀片的锋利度直接影响到切片的质量，而切片的厚度则会影响到染色的效果。
因此，在切片之前，应先检查刀片的锋利度，并进行必要的修整。
同时，在进行切片的过程中，要保持手的稳定，避免出现抖动或滑动。
2. 贴片：在进行贴片的过程中，应注意标本的平整度和贴片的紧密度。
标本的平整度会影响到染色试剂的渗透和扩散，而贴片的紧密度则会影响到标本的固定和保存。
因此，在进行贴片之前，应先检查标本的平整度，并进行必要的修整。
同时，在进行贴片的过程中，要保持贴片的紧密度，避免出现松动或脱落。
3. 染色：在进行染色的过程中，应注意染色试剂的使用和染色时间的控制。
染色试剂的使用应按照染色试剂的说明书进行，避免使用过量或不足。
抗酸染色检查的原理和方法
抗酸染色检查的原理和方法
抗酸染色检查是一种用于检测酸杆菌的方法，特别用于检测结核杆菌。
它的原理是利用染色剂对细菌细胞壁中的酸性成分进行染色，通过显微镜观察染色后的细菌来进行检测。
具体方法包括：
1. 准备标本：收集待检的样本，如痰液、尿液等，可选择直接或间接涂片法。
2. 固定染色：将标本制成涂片，然后固定在加热后的玻璃片上，通常使用95%乙醇、甲醛等固定剂进行固定。
3. 染色处理：将固定后的标本涂片进行染色处理。
通常使用的抗酸染色法有神经酸染色法、济南中国红染色法和抗酸染色法等。
4. 洗涤：将染色后的标本涂片用清水洗涤，以去除多余染色剂。
5. 干燥：将洗涤后的标本涂片在空气中自然晾干。
6. 观察：将干燥的标本涂片放置在显微镜下进行观察，通过放大镜放大视野，并使用油浸镜头进行观察，寻找染色后细菌的存在。
通过观察染色后的细菌形态和染色情况，可以确定是否存在酸杆菌或结核杆菌等细菌。
这种方法可以有效地检测出结核病等疾病的感染。
抗酸染色实验报告讨论
抗酸染色实验报告讨论一、实验目的本实验旨在掌握抗酸染色技术，了解其原理和应用，并通过实验操作，掌握抗酸染色技术的步骤和注意事项。
二、实验原理抗酸染色是一种常用的细胞学染色方法，它可以对细胞核进行染色。
抗酸染色的原理是利用甲苯胺蓝等碱性颜料在强酸条件下与DNA结合，形成紫色或蓝紫色颜料复合物。
这种复合物可以被观察者通过显微镜观察到，从而达到对细胞核的染色目的。
三、实验步骤1. 取一片已经制片好的标本切片，用甲醛固定5-10分钟；2. 用流动自来水洗涤3次，每次洗涤1分钟；3. 用生理盐水洗涤3次，每次洗涤1分钟；4. 滴加甲苯胺蓝溶液覆盖标本切片并静置5-10分钟；5. 用生理盐水洗涤3次，每次洗涤1分钟；6. 用95%乙醇固定染色，每次固定1-2分钟；7. 用绝对乙醇清洗3次，每次清洗1-2分钟；8. 用苯胺油清洗3次，每次清洗1-2分钟；9. 用封片剂将标本切片封装。
四、实验注意事项1. 实验室操作时应佩戴手套、口罩和护目镜等防护设备；2. 实验中使用的甲苯胺蓝溶液应保持干燥和避光保存；3. 切片操作时应注意不要过度刮伤标本组织，并确保标本组织完整；4. 染色操作时应注意控制染色时间和温度，避免过度染色或染色不均匀。
五、实验结果通过抗酸染色技术，可以明显地观察到标本切片中的细胞核。
在显微镜下观察到的细胞核呈现出紫色或蓝紫色，并且具有明显的形态特征。
通过对比不同样品的细胞核形态和数量，可以得出不同样品之间的差异和相似之处。
六、实验分析抗酸染色技术是一种常用的细胞学染色方法，它可以对细胞核进行染色，并且具有简单、快速、准确等特点。
抗酸染色技术广泛应用于生物医学研究、临床诊断等领域。
在实验操作过程中，需要注意控制好染色时间和温度，避免过度染色或染色不均匀。
此外，在切片操作时也需要注意不要过度刮伤标本组织，并确保标本组织完整。
七、实验结论通过本次实验，我们掌握了抗酸染色技术的步骤和注意事项，并通过实验操作了解了抗酸染色技术的原理和应用。
抗酸染色原理
抗酸染色原理抗酸染色是一种常见的生物组织学技术，广泛应用于医学、生物学、动物学等领域。
它的原理是利用酸性染料与切片中的细胞组织相互作用，并通过特定的处理过程来使染料显色。
本文将介绍抗酸染色的原理、应用及技术流程等方面。
一、抗酸染色的原理抗酸染色的原理是利用酸性染料与细胞中不同的生物化学结构发生反应。
在酸性条件下，酸性染料带有负电荷，能够结合细胞质中的阳离子，如核蛋白、粘多糖等。
这些阳离子结合后，染料被固定在细胞质中，从而形成可见的色彩。
一般来说，抗酸染色会选择一些带有芳香环结构的染料，如苏木精、伊红等，它们能够与细胞核及其他结构中的核酸、蛋白质等有机物结合，从而显色效果更为明显。
二、抗酸染色的应用抗酸染色在医学、生物学及动物学等领域中有广泛应用。
其中，它在组织学领域应用最广泛。
在组织切片染色中，抗酸染色被用于显示特定的细胞和组织结构，如细胞核、细胞膜、细胞质等。
通过观察染色后的组织切片，可以更好地了解细胞内各种结构的分布和形态，进而推断细胞的生理、病理过程。
因此，在组织学研究中，抗酸染色技术是必不可少的。
除此之外，抗酸染色还可以用于检测肿瘤、感染、免疫反应等病理过程中的细胞或病原体。
比如，在肿瘤组织切片染色中，淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的染色可以帮助诊断和分级恶性淋巴瘤。
在感染组织切片染色中，抗酸染色可以检测到结核菌和分枝杆菌等病原体。
在免疫反应研究中，抗酸染色技术也有着重要的应用价值。
三、抗酸染色技术流程抗酸染色技术流程包括以下几个步骤：1. 取得组织样本组织样本可以是活体组织、死亡组织或培养细胞等。
对于取得的组织样本，需要进行必要的处理，如切片、固定、包埋等，以便后续处理。
2. 染色在抗酸染色中，主要选择苏木精、伊红等抗酸性染料。
通常先将切片置于染液中浸泡一定时间，使染料渗入组织样本内部，然后进行洗涤，以去除多余的染料。
洗涤后，还可以进行酸性解剖和再次染色等操作，以增强显色效果。
3. 脱水、清洁与封片通过脱水、透明化和封片等步骤，可以将染色后的切片制成玻璃片，并用石蜡或树脂等物质固定切片。
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微生物学教研室
2011年12月
实验内容
一、细菌染色标本检查法 抗酸染色法（操作） 二、标本片观察： （钩体 、白色念珠菌，曲霉、枯草芽胞杆菌、）
目的要求
掌握抗酸染色技术 掌握钩体，白色念珠菌、曲霉、枯草杆
菌基本形态
一、抗酸染色原理
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸， 它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要 经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的 分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名 抗酸染色。 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复 红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加 碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背 景中的物质为兰色。
3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
冲洗
干燥
油镜观察
三、抗酸染色结果
抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序，
偶呈分枝状生长。
背景及非抗酸性细菌呈兰色。
注意事项：
1、无菌操作 2、菌种管摇匀后取菌 3、涂片均匀 4、初染加热维持3~5分钟，勿沸腾烧干 5、冷却后冲洗 6、油镜下从视野中找红色抗酸菌
二、标本片观察
抗复红，3%盐酸酒精，美蓝
器具：同革兰氏染色
实验方法：
1、细菌涂片标本的制备 涂片 2、染色
1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红 2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽 即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免 干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。
干燥
固定
2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30’’~1’；用水冲洗。
3）复染：用碱性美兰溶液复染1’，用水冲洗后用吸 水纸吸干。
3、油镜观察
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片 干燥 固定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
初染 脱色 复染
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’
冲洗
美蓝复染1 ’
白色念珠菌
钩体
枯草杆菌 曲霉
白色念珠菌
钩端螺旋体
类炭疽（枯草杆菌）
炭疽杆菌
曲霉
实验报告
绘制抗酸染色结果镜下图 绘制四张标本片镜下图