青岛大学医学院微生物学教研室

镊子、玻片、 镊子、玻片、3%H2O2 optochin、杆菌肽纸片， optochin、杆菌肽纸片，： 形态观察：
A、B、D群链球菌，肺炎链球菌，草绿色链球菌革兰染色。 群链球菌，肺炎链球菌，草绿色链球菌革兰染色。
二、培养物观察： 培养物观察：
1. 菌落观察： 菌落观察：
三、生化实验： 生化实验：
1. 触酶试验：3%H2O2 触酶试验： 2. 生化试验： 生化试验： 1）杆菌肽敏感试验： A群、B群链球菌 ）杆菌肽敏感试验： 群 群链球菌 2）胆汁七叶苷试验：草绿色链球菌、D群 ）胆汁七叶苷试验：草绿色链球菌、 群 3） cAMP 实验： A群、B群链球菌 ） 实验： 群 群链球菌 4）高盐试验：草绿色链球菌 、D群链球菌 ）高盐试验： 群链球菌 5）肺炎链球菌与草链球菌的鉴别： ）肺炎链球菌与草链球菌的鉴别： optochin敏感试验： 敏感试验： 敏感试验 菊糖发酵试验： 菊糖发酵试验：.
青岛大学医学院医学检验系
实验3. 链球菌属
闫志勇 青岛大学医学院微生物学教研室
可疑菌落，观察溶血情况 可疑菌落， α溶血 溶血 Optochin — 肺炎链 球菌 γ溶血 溶血 杆 菌 肽 S A 群 β溶血 胆汁 七叶 苷 + D 群
均（—） ）
cAMP cAMP+
+
胆汁七叶苷
— 草绿色 链球菌
+
6.5% NaCl — + 肠球 非肠 菌 球菌
B 群
其 他 链 球 菌
实验材料
一、菌种： 菌种：
A、B、D群链球菌，肺炎链球菌，草绿色链球菌。 群链球菌，肺炎链球菌，草绿色链球菌。
二、培养基： 血平板 培养基：
血清肉汤管
5枚/组 枚组 2支/组 支组
三、生化管： 胆汁七叶苷、血清菊糖、高盐各2支/组 生化管： 胆汁七叶苷、血清菊糖、高盐各2 四、其他： 其他：
cAMP实验 cAMP实验
原理：无乳链球菌（ 能产生cAMP因子， cAMP因子 原理 无乳链球菌（B群）能产生cAMP因子，能促进金黄色葡萄球
菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。 菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。
方法：先将金黄色葡萄球菌(ATCC25923) 方法：先将金黄色葡萄球菌(ATCC25923)
沿直径划线接种，再沿该线垂直方向接种待 沿直径划线接种， 测链球菌，两线不得相接，间隔约3 4mm。 测链球菌，两线不得相接，间隔约3～4mm。 35℃孵育过夜， 35℃孵育过夜，两种划线交界处出现箭头状 孵育过夜 溶血，即为阳性反应。 溶血，即为阳性反应。本法可作为无乳链球 菌的初步鉴定试验。 菌的初步鉴定试验。 金 葡 B 链
A、B群链球菌，肺炎链球菌，草绿色链球菌接种血平板（BAP）。 群链球菌，肺炎链球菌，草绿色链球菌接种血平板（BAP） 接种血平板
2. 液体培养观察： 液体培养观察： 任取2种菌接种血清肉汤，观察生长情况。 任取2种菌接种血清肉汤，观察生长情况。 后取菌做革兰染色） （24h后取菌做革兰染色） 后取菌做革兰染色
杆菌肽敏感试验：
0.04U杆菌肽(bacitracin)药敏纸片贴在涂布有待测菌的 0.04U杆菌肽(bacitracin)药敏纸片贴在涂布有待测菌的 杆菌肽(bacitracin) 羊血琼脂平板上，35℃孵育过夜后， 羊血琼脂平板上，35℃孵育过夜后，观察抑菌环以判断是否为敏 孵育过夜后 感。化脓性链球菌为阳性，可与其他β溶血性链球菌区别。 化脓性链球菌为阳性，可与其他β溶血性链球菌区别。