高温高压抗原修复法提高乳腺癌免疫组化准确率的应用研究
免疫组化中抗原修复方法及修复液的比较
免疫组化中抗原修复方法及修复液的比较邹亮【摘要】目的本实验通过比较几种常用的抗原修复技术在免疫组化中的效果,寻求一种简洁、方便、实用的抗原修复方法.方法分别选取10种细胞核及细胞浆或膜标记的抗体,对理论上阳性的组织进行标记,对每种抗体均分别采用不修复,PH6.0柠檬酸煮沸,PH6.0柠檬酸高温高压修复,PH9.0EDTA煮沸,PH9.0EDTA高温高压修复.结果本实验的20种抗体均标记理论上为阳性的组织,不修复的有16种抗体阴性,水煮热修复与高压热修复的修复效果并无明显差别.抗原修复液中高PH值(9.0)时的染色结果明显好于相同修复方式的低PH值(6.0).结论免疫组化质量与是否进行抗原有关,但与抗原修复方法无关;抗原修复液PH值影响免疫组化质量,掌握抗体最佳的修复液能提高免疫组化结果的阳性率、染色强度,稳定性及准确性.【期刊名称】《健康研究》【年(卷),期】2013(033)003【总页数】3页(P176-178)【关键词】免疫组化;抗原修复;PH【作者】邹亮【作者单位】浙江大学医学院附属第一医院,病理科,浙江,杭州,310003【正文语种】中文【中图分类】R365免疫组织化学技术具有特异性、灵敏性、简洁性等优点,还能够将形态和功能结合,定性、定位和定量相结合,因此,在半个多世纪以来免疫组织化学技术广泛应用于病理诊断,尤其是在肿瘤诊断中不可缺少。
其原理是用已知抗体去检测未知抗原,而抗原在组织固定过程中因蛋白质的氨基与醛基交联成羧基,使部分蛋白抗原决定族被封闭,因此,在免疫组化染色前,必须进行抗原修复,打开其封闭状态使其充分暴露,才能与抗体充分结合,故在免疫组织化学技术中抗原的暴露修复是至关重要的[1]。
自1991年加热抗原修复报道后,免疫组化工作者对抗原修复方法及修复液进行了不断的探索,并对其效果进行比较研究,归纳起来影响抗原修复的因素主要有两种,一是抗原修复的温度,二是抗原修复的PH值。
本文对常用的两种修复液及最常用的两种修复方式进行比较分析。
不同抗原修复液和固定时间对免疫组化结果的影响
不同抗原修复液和固定时间对免疫组化结果的影响【摘要】目的针对不同的抗原修复液与时间对免疫组化所产生的影响进行探讨。
方法取出26例乳腺浸润性导管癌标本试样。
其中的每例中附着4个时间点，这四个时间点组分别为：立即固定组，延迟12小时固定组，延迟24小时固定组和延迟48小时固定组。
依次对所选取4块肿瘤组织，在肿块部位进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋和切片等相关操作，利用行he染色方法验证试验中的肿瘤组织，再通过抗原修复液展开免疫组化验证实验。
结果ck7、er和c-erbb-2在4组试样在不等的时间和不同的抗原修复液的乳癌组织间表现出了不同的效果，并且结果的差异可以从统计学角度进行分析。
结论在本实验中，所进行延迟固定的组织，在通过充分固定和进行选取抗原修复液a[高温高压edta（ph9.0）缓冲液修复）]、抗原修复液b[高温高压edta（ph8.0）缓冲液修复]、抗原修复液c[高温高压柠檬酸盐（ph6.0）缓冲液修复]和抗原修复液d[微波炉edta（ph9.0）缓冲液修复法]的前提下能够进行免疫组化检测，但需要注意的是尽量减少和避免延迟固定时间。
【关键词】抗原修复液；固定时间；免疫组化doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.089 文章编号：1004-7484（2012）-08-2487-02随着医学技术和相关领域的不断发展，免疫组织化学技术作为一门新兴的学科出现了。
它是一门基于免疫和分子生物学与病理形态学等学科综合的技术，主要是通过已知抗体或抗原进行对实验中的组织细胞中探测的抗原或抗体检测。
典型特征包括操作易于实现，准确性高和特异性强，并且能够将形态和机能相互整合。
该种技术已在实际中能够进行病理和鉴别诊断，组织胚胎和神经解剖等相关领域的实验研究[1]。
通常情况下，只有在正确及时的固定离体组织前提下，免疫组化技术才能得出精确度高的实验结果。
但是，由于实际操作中存在大量的影响因素造成不能正确及时的固定离体组织，特别是在进行尸检标本时，对实验的要求更高。
胰酶修复法、高压修复法和微波修复法对免疫组化结果的影响分析
胰酶修复法、高压修复法和微波修复法对免疫组化结果的影响分析韦翠容【摘要】目的探析三种免疫组化抗原热修复方法的对比情况。
方法分别采用胰酶修复法、高压修复法和微波修复法,并根据方法的不同分为酶消化组、高压加热组与微波修复组,三组均实施maxvison试剂盒,检测CD45RO和CDla、Ki-67和CD8、CD4和CD83及CD3染色结果。
结果三种抗原修复方法存在的差异性显著,相比微波修复方法,高压修复法具有较高的阳性率,最次为胰酶修复法。
结论相比胰酶修复法和微波修复方法,高压加热组织抗原修复方法具有操作便捷和经济等优势,能在大量标本中广泛应用。
【期刊名称】《临床检验杂志(电子版)》【年(卷),期】2018(007)001【总页数】2页(P80-81)【关键词】免疫组化染色;抗原修复;高压加热法【作者】韦翠容【作者单位】[1]贵港市人民医院,广西贵港537100;【正文语种】中文【中图分类】R322-34免疫组织化学又名免疫细胞化学，它属于一项新技术，表示待显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过组织化学的呈色反应与抗原体反应，能够对相应抗原予以定量、定位及定性测定。
该项技术不仅具有能紧密结合机能、代谢及形态等优点，而且还具有特异性强、较高的敏感性和操作便捷等优势，现已在神经解剖、鉴别诊断与病理诊断等研究中得到广泛应用[1]。
免疫组化染色的成败和组织中抗原修复技术、抗原性妥善保存具有一定的关联性，在常规石蜡包埋、福尔马林固定的组织中抗原显著伴有一定的问题，要因在其他固定液或者福尔马林中组织会导致蛋白间与蛋白内亚甲基桥的桥连，造成大部分抗原簇被封闭，所以会有效降低染色效果与表达反应，使其对诊断的准确性产生影响[2]。
为使染色效果得到最佳状态，行抗原修复时临床多实施抗原修复技术。
不同抗原修复方法会影响实验结果的表达，本研究采用胰酶修复法、高压修复法和微波修复法等三种不同抗原修复方法，分析比较免疫组化试验结果表达和三种修复方法的关系，现将研究详情报道如下。
不同修复方法对免疫组化染色结果的影响_崔永兴
第３卷第２期唐山职业技术学院学报Ｖｏｌ．３Ｎｏ．２２００５年１２月ＪｏｕｒｎａｌｏｆＴａｎｇｓｈａｎＶｏｃａｔｉｏｎａｌ＆ＴｅｃｈｎｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅＤｅｃ．２００５不同修复方法对免疫组化染色结果的影响崔永兴１涂静宜１李冬梅２李红民３（１－唐山职业技术学院，２－唐山开滦医院，３－唐山协和医院，河北唐山０６３００４）【摘要】目的：探讨不同抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响。
方法：选取常用需要修复的抗体１６种，对每种抗体采用多种修复方法，比较免疫组织化学染色结果。
结果：１６种抗体经修复后，均有较好的阳性表达，其中热修复的高压锅方法背景清晰，阳性颗粒明确，效果最好；微波法次之；胃酶及胰酶修复法结果稍差。
结论：本文通过对临床几种常用抗体在不同抗原修复方法下的表达进行研究表明，抗原热修复法可替代酶消化法，热修复方法中以高压锅抗原修复法效果最好。
【关键词】抗原修复；抗体；免疫组化目前免疫组化技术已成为病理诊断必不可少的重要辅助手段，但常规石蜡切片标本，一般均用１０％中性甲醛固定，而使其抗原蛋白的氨基与固定液中的醛基交联形成醛键、羧甲键，从而封闭了部分抗原决定簇；或由于蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽，因此使其免疫组化标记的敏感性明显降低，甚至出现假阴性。
因此抗原决定簇的充分暴露是免疫组化染色成功的关键。
在免疫组化染色时，通常采用抗原修复方法使抗原决定簇充分暴露。
抗原修复方法主要有两种：一种为化学方法－－即酶消化法，是最早的抗原修复方法，另一种为物理方法－－即热修复法。
但在日常工作中，不同的抗体，试剂公司推荐的修复方法不尽相同，操作起来较繁琐，增加了工作量和成本，而且染色结果也不尽如人意。
为了解决这些问题，提高工作效率和节省试剂，我们对一种需要进行抗原修复的抗体采用高压加热法、微波加热法、胰酶消化、胃酶消化方法分别修复，探讨不同修复方法对染色结果的影响，旨在选取一种简洁、有效的修复方法。
１材料与方法１．１材料：收集唐山市协和医院手术切除的乳腺癌、淋巴瘤、大肠癌标本各１２例，待检组织均经１０％中性福尔马林液固定，常规脱水、透明、石蜡包埋。
免疫组化中抗原修复的方法(一)
免疫组化中抗原修复的方法(一)免疫组化中抗原修复1. 引言在免疫组化实验中，抗原修复是一项重要的步骤。
由于组织样本中的抗原可能会被固定、石化或脱变，导致免疫染色的效果不佳。
因此，进行抗原修复可以提高抗体与抗原的结合率，增强信号的强度和特异性。
2. 抗原修复的方法热原修复法热原修复法是最常用的抗原修复方法之一。
具体步骤如下：•将切片置于含有缓冲液的载玻片上；•将载玻片放置在加热板上，设定适当的温度和时间，通常为95°C，15-20分钟；•等待切片冷却至室温，继续下一步的处理。
酶解原修复法酶解原修复法适用于某些情况下，特别是当形状石化的抗原需要修复时。
具体步骤如下：•将切片置于含有酶解液的载玻片上；•将载玻片放置在适当的温度和湿度条件下进行酶解，通常为37°C，30分钟；•冷却切片至室温，然后进行下一步处理。
酸性原修复法酸性原修复法主要用于修复石蜡包埋组织标本中的抗原。
具体步骤如下：•将切片浸泡在含有酸性溶液的容器中，通常使用的酸性溶液；•在合适的温度条件下进行酸解，通常为95°C，30分钟；•将切片冷却至室温，并进行下一步处理。
高压原修复法高压原修复法是相对较新的抗原修复方法，它利用高压力来提高修复效果。
具体步骤如下：•将切片置于含有修复液的载玻片上；•将载玻片放置在高压原修复设备中，设定适当的压力和时间；•冷却切片至室温，并进行后续处理。
3. 结论抗原修复在免疫组化实验中起到至关重要的作用，可以修复被固定、石化或脱变的抗原，提高抗体与抗原的结合率，增强信号的强度和特异性。
常用的抗原修复方法包括热原修复法、酶解原修复法、酸性原修复法和高压原修复法。
选择合适的方法进行抗原修复，可以提高免疫组化实验的准确性和可靠性。
以上就是本文对免疫组化中抗原修复的相关方法进行的详细介绍。
希望对读者在免疫组化实验中的抗原修复环节有所帮助。
4. 热原修复法的原理和优缺点原理热原修复法是利用高温对抗原进行恢复性变性处理，使其重回天然的结构状态。
免疫组化抗原修复方法
免疫组化抗原修复方法免疫组化（Immunohistochemistry, IHC）是一种用于检测组织或细胞中抗原的方法，通过使用特异性抗体和染色剂来定位和定量目标抗原。
然而，在实际的免疫组化实验中，可能会出现抗原修复不完整的情况，导致结果不准确甚至失真。
因此，免疫组化抗原修复方法的研究和应用显得尤为重要。
目前，常见的免疫组化抗原修复方法包括热诱导抗原修复（heat-induced epitope retrieval, HIER）和酶诱导抗原修复（enzyme-induced epitope retrieval, EIER）。
热诱导抗原修复是通过高温和缓冲液来还原和暴露被固定、包埋或变性的抗原，使其恢复到可以与抗体结合的状态。
而酶诱导抗原修复则是利用蛋白酶来降解和去除与抗原结合的蛋白质，从而使抗原重新暴露出来。
这两种方法各有优势，可以根据实验需求选择合适的修复方法。
除了常规的抗原修复方法外，近年来还出现了一些新的免疫组化抗原修复方法，如微波诱导抗原修复（microwave-induced epitope retrieval, MIER）、超声波诱导抗原修复（ultrasonic-induced epitope retrieval, UIER）等。
这些新方法在修复效果和操作便捷性上都有所突破，为免疫组化实验提供了更多的选择。
在选择免疫组化抗原修复方法时，需要考虑样本的类型、固定方式、抗原的性质等因素。
例如，对于经过长时间固定的组织样本，可能需要选择更强效的修复方法来恢复抗原的活性；而对于一些蛋白质结合紧密的抗原，则需要选择更温和的修复方法，以免造成抗原的损伤或丢失。
此外，在进行免疫组化抗原修复时，还需要注意修复液的配制和处理，以及修复条件的控制。
合理的修复液配制可以提高修复效果，而适当的修复条件控制可以避免对组织结构和抗体活性的影响。
综上所述，免疫组化抗原修复方法在免疫组化实验中起着至关重要的作用。
微波法与高温高压法抗原修复的探讨
温 孵育 ５ ｎ Ｏ ｎ， ｍｉ ～ｌ ｍｉ 以消 除内源性过 氧化 物酶的 活性 一蒸馏水 冲洗
一 ＰＢ Ｓ浸泡 ２ ｎ× ３ 一滴加一 抗工作 液 ， ７ ｍｉ 次 ３ ℃孵育 ｌ ｈ～２ ｈ或 ４ ℃
过 夜一 Ｐ Ｓ冲洗 ２ ｉ Ｂ ａ ｒ ｎ×３ 一滴加适 当量的 二抗 ， ７ 次 ３￣ Ｃ孵育 ０ ５ ．ｈ— Ｐ Ｓ冲洗 ２ ｎ ×３ 一显色 剂显色（ ＡＢ 一 自来水 充分 冲洗 ， Ｂ ｍｉ 次 Ｄ ） 复染 ，
脱水 ， 明 ， 片 。 透 封
高压 锅直 接煮 沸法 ： 石蜡 切片 脱蜡至 水 。Ｐ Ｓ浸 泡 ２ ｉ ×３ Ｂ ａ ｒ ｎ 次 将修复液 烧开 后将切 片放入 高压锅 中 ， 然后 盖好 盖子 ， 加上 气压阀 ， 继 续加热 至喷汽时 ， 即达 到工作 温度和 工作 力 ， 开始计时 ２ ｉ ａ ｒ ｎ后压 力
直 接 煮 沸法进 行抗 原修 复 ， 后进 行 免疫 组化 染 色。 然
１ ４ 方 法 ．
微波 辐射法 ： 蜡 切片脱蜡 ≤水 。Ｐ ＢＳ浸泡 ２ ｉ ×３次 ， ａ ｒｎ 先将修
复液烧开 ， 度为 ９ ℃ ～１ ０ 温 ５ ０ ℃然后 将切片 放人修 复液 中 ， 加热 ３ ｉ ， ａ ｒ ｎ
Ｃｈｉａ Ｈ ｅ ｌｈ Ｃａ ｅＮ ｕ ｒｔｏ ＼ ｎ ａ ｔ ｒ ｔｉｉ ｎ
Ｉｖ 。Ｉ 缝 －， ，
吕 Ｏ － Ｔ
‘
微 波 法 与高温 高压 法抗原 修复 的探 讨
吴 建 君
【 中图分类 号 】Ｒ ６ ４ ６ ４ ｉ 【 献标 识码 】 Ａ 文 【 文章编 号】 １ ０ －７ ８ （ ０ ｏ ｏ － ｆ ４ ４ ４ ２ 『 ） ７ ０ ５ ０ ５ —０ 后 。但经 ｌ ％福尔 马林 固定石蜡包埋 的切片 ， Ｏ 组织 中的许多抗原 决定 簇被 醛基 交联封 闭 ， 以至于无法 和抗体 结合 ， 从而影 响染 色结果１。因 ２ Ｊ 此组 织中抗原性 修复技 术与免疫组 织化学 染色的成败 有十分密切 的关 系 。我们 应用微 波辐 射法和 高压 锅直接 煮沸 法对 ２ 例 乳腺癌组 织切 ０ 片分 别进 行抗 原修 复 ， 以观 察其 对乳 腺癌 Ｅ Ｒ、Ｐ Ｒ、Ｃ ｅ ｂ －２ － ｒ Ｂ 染 色效果的影响 。我们的体会如下 。 抗原热修 复的原 因和理论基 础是通过 加热水解被 醛基交联封 闭的 许 多抗原 决定簇 ， 使抗原 决定簇 被激 活 。抗 原修 复的有 效性是指 加热 温 度（ ×加热 时 间（ ） Ｔ） ｔ 。所 以修 复 的温 度和 修 复的 时 间非常 重要 。 用微 波炉做抗原 修复 ， 用方便但 温度不 易掌握 ， 使 很容易受外 界因素的 影响 ： 比如修 复液的起始 温度不 同时要适 当改变预热 的时 间 ； 微波炉使 用一 定时间后 ， 即使相 同的加热时 间也可能 会出现温 度不同 ； 修复液的 量不 同加热 所需 要的时 间也 不 同 ； 预热 后维 持的时 间不 够也会使 抗原 暴露 不充分 等等 。用微 波炉 做抗原 修复 还要注 意预 热的温 度 ， 定要 一 达到 ９ ℃～１ ０ ℃ ， ５ ０ 并且要 在预热 温度的 基础 上维 持 １ ｒｉ －２ ５ａｎ ０ ａ ｎ， ｒｉ 这样才 能达 剑使抗 原决 定簇完 全暴露 的 目的。 另 外缓 冲液 沸腾 可导 致脱 片 ， 且金 属仪 器均 不能 使用 ， 有一 定的 局限性 。如 果选 用高 压锅 修复就 可以 避免 因为外 界环境 改变 所导 致 的对温 度的影 响 ， 因此 ｍ ～４ ｍ。每 例均切 ６ ， 贴 于涂有 多聚 一 Ｌ一赖 张 附
3种抗原修复方法对免疫组化染色效果的影响
3种抗原修复方法对免疫组化染色效果的影响郑秋桦;李钰湘;柯野;张海明【摘要】为了确定5种抗体在免疫组织化学染色效果中的最佳修复方法,本文分别采用水煮法、微波法和高压法对抗原进行修复后,按常规免疫组化方法进行染色、镜检.结果表明5个抗体在高压修复下都是强表达,P53、P63在微波修复20 min 下也是强表达.因此,从修复效果、时间及稳定性等角度综合考虑,高压0.1Mpa(121℃)修复2 min是对P53、P63、Ki67、CK5/6、CK7的较佳修复方式.【期刊名称】《韶关学院学报》【年(卷),期】2017(038)012【总页数】4页(P51-54)【关键词】免疫组织化学;抗原修复;染色【作者】郑秋桦;李钰湘;柯野;张海明【作者单位】韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;广州安必平医药科技股份有限公司,广东广州510663【正文语种】中文【中图分类】R446.61免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究.在免疫组织化学的试验过程中，常采用固定石蜡包埋组织，然而组织在使用甲醛固定过程中，形成的醛键会封闭抗原的决定簇，影响抗体和抗原的结合，从而影响染色观察结果；因此，对抗原的修复在免疫组织化学中就尤为重要［1］.不同的抗原修复方法对免疫组化染色结果产生不同的影响［2-3］.如加热抗原修复技术既能保留福尔马林固定石蜡包埋技术良好的组织学形态，又明显提高抗原的检出率，提供良好的IHC染色结果［4-5］；影响加热抗原修复的因素主要包括修复的温度、加热的时间、热源、抗原修复液的pH值等方面［1］.本文采用控制变量法，探究在改良Tris-EDTA(PH9.0)修复试剂中，采用水煮、微波和高压3种不同的热修复方法对P53、P63、Ki67、CK5/6、CK7这5个抗体的免疫组化染色效果的影响.1 材料与方法1.1 试验组织与试剂1.1.1 试验组织由广州安必平（LBP）医药科技股份有限公司提供的阳性组织材料.1.1.2 试验试剂抗体试剂均由LBP公司提供的即用型产品（见表1）；环保透明脱蜡剂；无水乙醇；过氧化物酶封闭液（3%过氧化氢）；二抗试剂：LBP-VBrightI二抗HRP鼠兔通用型（一步法）；DAB显色液（加强型）：1 mL DAB色原/20 mL DAB缓冲液；改良Tris-EDTA(PH9.0)浓缩液（50×）；Mayer’s苏木素染液；PBS 缓冲粉：2 000 mL/包；Tween-20.1.1.3 试剂的配制DAB显色液（加强型）：一滴DAB原液加入至1 mL DAB缓冲液中，该溶液易氧化，现配现用.Tris-EDTA(pH9.0)修复液：改良Tris-EDTA(pH9.0)浓缩液（50×）40 mL加入1 960 mL的蒸馏水搅拌均匀.表1 试验所用抗体信息抗体名称CK5/6 CK7 Ki67 P53 P63克隆号D5、16B4OV-TL12/30 MIB-1 DO7 4A4阳性组织肺鳞癌肺腺癌扁桃体/乳腺癌结肠癌前列腺PBS缓冲液：一包PBS缓冲粉加入蒸馏水2 000 mL搅拌至粉末全部溶解加入4 mL Tween20继续搅拌至完全融合即可.1.2 试验设备Thermoscientific切片机、武汉俊杰电子有限公司生物组织摊烤片机、微波炉、Leica DM500显微镜、Leica ICC50 HD Camera、苏泊尔YS20ED 20 cm高压锅.1.3 方法1.3.1 组织蜡块的切片与前期处理将五种组织蜡块-20℃冷冻，2～3 min后取出，打开空气加湿器减少静电作用，在切片机上连续切片（2μm），放入20%的酒精中展片，再使用防脱载玻片进行捞片，保证每张片捞的方向及位置一样且尽可能在载玻片的中央处，以便阅片及效果对比.每个组织块捞9片，在44℃热水中进行摊片使组织与载玻片平整粘附，无褶皱，60℃的烤片机上进行烤片至组织与载玻片较牢固结合，不会由于重力作用而出现移位，将载玻片转至耐高温塑料切片架后，放入烘片机进行55℃烘片2 h.1.3.2 片子的脱蜡与水化将已完成初步处理的片子放进通风橱中的环保脱蜡剂（代替二甲苯）中进行脱蜡处理3次，每次10 min，确保脱蜡干净后进行梯度水化，梯度水化为无水乙醇→95%乙醇→90%乙醇，每个梯度水化5 min.1.3.3抗原修复1.3.3.1 水煮修复法取2 000 mL修复液于不锈钢锅中，置于电磁炉上加热至沸腾后，放入组织片进行修复，修复时间分别为10 min和20 min.1.3.3.2 微波修复法将组织切片放入2 000 mL修复液中置于微波炉中，微波炉高火（功率750 W）加热至沸腾后，调至中火（功率375 W）开始修复，修复时间分别为10 min和20 min，修复后用自来水迅速降至室温.1.3.3.3 高压修复法将组织切片完全浸置于修复液中，放入高压锅内0.1 MPa（121℃）分别进行修复2 min、2.5 min、3 min和5 min，修复完后，迅速降压降温至常温常压后进行清洗.1.3.4 阻断（内源性过氧化物酶的灭活）立即将修复完后的组织切片进行多次水洗后，置于过氧化物酶封闭液中阻断10min，再进行水洗，然后置于PBS溶液中.1.3.5 抗体孵育从PBS溶液中取出组织切片，迅速甩干大量水珠，放于免疫组化湿盒中，快速滴加即用型一抗，23℃孵育30 min后，用PBS溶液冲洗后，置于PBS溶液清洗缸中取出组织切片去掉大部分水份滴加二抗，室温孵育20 min，再用PBS冲洗后浸泡.1.3.6 DAB显色与苏木素复染从PBS溶液中取出组织切片，甩干大量水分后，迅速滴加DAB显色液，显色3 min后，吸干大部分显色液后，置于DAB清洗液中多次水洗，然后用Mayer’s 苏木素溶液进行复染30 s.1.3.7 PBS返蓝将组织切片放进PBS溶液中进行返蓝1 min，返蓝后的苏木素是标记出细胞核的位置，方便观察时做目标区域的参照物，返蓝后多次水洗.1.3.8 脱水、透明、封片和镜检将片子放进95%乙醇脱水1min后，分别用无水乙醇脱水2次，每次1 min；将切片架放于环保透明脱蜡剂中脱蜡2次，每次3 min，用中性树胶滴入封片后，标记归类；利用Leica ICC50 HD Camera进行拍照保存，并对染色结果进行评分.1.4 评分标准判断评分标准参考文献［6］的方法进行评分.评分方法1：在判断中只考虑阳性细胞所占的百分比，按不同的百分比分级；将阳性细胞百分比分成5级，无阳性细胞为0分，阳性细胞≦25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分.评分方法2：在判断中只考虑阳性细胞的染色程度，按不同的染色强度分级；着色强度无色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分［6］.试验中，Ki67 采用方法 1 的评分方法；CK5/6、CK7、P53和P63采用方法2的评分方法.图1 CK5/6的3种修复方法比较结果图图2 CK7的3种修复方法比较结果图2 结果与分析对5种抗体的3种修复方式，结果分别见图1-5，评分结果见表2.由图1-5和表2可知：5种抗体高压修复的效果均为强表达；微波20 min修复P53和P63均为强表达.CK5/6、CK7和ki67在高压修复较其它两种修复方式有更为理想的染色效果；从节省时间，降低掉片概率及出现背景概率等方面综合考虑，故将Tris-EDTA(pH9.0)高压修复2 min作为最佳修复方式.而P53及P63的微波修复20 min染色强度与高压修复的结果一致，均为强阳性.5种抗体的水煮修复法的染色效果均不理想，主要由于修复液的大量蒸发不但浪费试剂还有可能影响修复液浓度从而导致修复效果不稳定，故不宜使用该方法.微波修复20 min对于部分组织的修复效果可以达到要求，但是微波修复也存在不足，如：长时间的浸泡和机械力容易导致掉片；修复液的大量蒸发浪费试剂，严重时导致干片，抗原失活.综上所述，较佳的修复方式为高压修复2 min.图3 ki67的3种修复方法比较结果图图4 P53的3种修复方法比较结果图3 讨论免疫组织化学的染色质量受整个试验过程多方面因素的影响，如温度、抗原修复方法、抗体浓度、孵育时间及显色时间等多种因素.抗原修复方法是关键的因素之一.由于采用不同的抗原修复方法，导致免疫组化实验结果差异极大甚至出现假阴性.因此寻找理想的抗原修复方式可提高抗原检出率，提高免疫组化结果的准确性［7］.图5 P63的3种修复方法比较结果图表1 3种抗原修复法对免疫组化染色结果的比较注：“0”为阴性；“1”为弱阳性；“2”为阳性；“3”为强阳性抗体名称高压2 min高压2.5 min高压3 min高压5 min水煮10 min水煮20 min微波10 min微波20 minCK5/6CK7Ki67P53P63 3 3 3 3 1 2 1+3 3 3 3 1 2 1 3 3 3 3 1 2 1 2+3 3 3 3 12 1 2+33 3 3 1 2 12++3+3本研究仅对5种抗体采用了3种修复方式的研究，有待一步探究其它的修复方式，以期获得更为直观和方便可行的修复方法.参考文献：［1］姚梅宏,郑智勇.免疫组化抗原修复技术新进展[J].临床与实验病理学杂志,2013,29(5):544-547.［2］陈余朋,张声,王行富,等.不同的抗原修复方法在Ⅳ型胶原免疫组化染色中的应用[J].临床与实验病理学杂志,2014,30(1):98-100.［3］宿颖,刘曼,张辛燕.不同抗原修复方法对KLF4在小鼠舌黏膜上皮中表达的比较[J].北京口腔医学，2014,14(6):344-346.［4］Jagirdar J.Immunohistochemistry:then and now[J].Arch Pathol Lab Med,2008,132(3):323-5.［5］Shi S R,Taylor C R.Extended application of antigen retrieval technique in immunohistochemistry and in situ hybridization[A].Shi S R，Taylor C R，eds.Antigen retrieval immunohistochemistry based research and diagnostics[C].Hoboken:John Wiley,2010:25-45．［6］许良中，杨文淘.免疫组织化学反应结果的判断标准[J].中国癌症杂志,1996,6(4):229-231.［7］何新明,顾霞,郭文婷,等.免疫组织化学染色存在的问题及解决方案[J].实用医技杂志,2017,24(8):871-872.。
免疫组化染色质量控制的应用探讨
【 摘要】目的 探 讨免疫组化染 色步骤 的质量 控制及应用 。 方法 详 述免疫组化染 色步骤 ，并对 每步操作进行经验性分 析。 结果 从组 织固定 、 烤 片时间 、 抗原选择 、 时间控制 、 抗体滴加 、 孵育 时间 、 阳性对 照、 显色， 以及对 比染 色时间等方面 ， 进行 阐 述 和分析 。结论 严 格执行免疫组化染色步骤 ， 并 在操作 中总结经验 ， 可以提高免疫组化诊 断的准确率。 【 关键词】 免 疫组化 ； 染色； 质量控制 ； 体会
３ ｍ ｉ ｎ 欣。 ⑩取 Ｄ Ａ Ｂ显色液 向切片 中滴加并进行 ５ ｍ ｉ ｎ 显 色。⑥ 用 自来水对切 片进 行冲洗后利用苏木 素进行复染 。之后进行脱
设置 阳性 对照 ， 避免假 阳性 。选取 已知染色 中度阳性以上的 组织切片染色作为阳性对照 。 提高组织切片 的鉴定准确率 。选择
【 中图分类号】Ｒ ７ ２ ５ ． ６ 【 文献标识码】Ａ 【 文章编号】１ ６ ７ ４ — ０ ７ ４ ２ （ ２ ０ １ ３ ） １ １ （ ｂ ） 一 ０ １ ７ ７ — ０ ２
免疫 组化染色作 为病理诊断 中比较 常见 的诊 断方法 。被广 泛作 为临床诊 断的辅助性参考指标［ １ １ 。病理技 师作 为免疫组化操 作和质量 控制 的执行者 ， 决定着免疫组 化诊 断的准确率 。该研究 中， 详 述免疫 组化染 色步骤 ， 并 对每 步操作 进行经 验性分 析 ， 现
影像与检验
Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ＆ Ｆ ｏ ｒ ｅ ｉ ｇ ｎ Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ Ｉ Ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ 口固 — ■ ■ ■ ■ 鼍 ■ห้องสมุดไป่ตู้■
免 疫组化染色 质量控 制 的应用探讨
董 芳 莉
不同的抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响
【 关键词】免疫组织化学；抗原修复
中图 分类 号 ：Ｒ ４ ． ４ ６６ 文 献标 识码 ：Ａ
文章编号：１７ －６ ９ （０ ９ ３０ ６ —３ ６４４ ５ ２ ０ ）０—０ ２０
Ｓａ ｎｎ ｓ ｌ ｔ ｉ ｉ ｇ Ｒｅ ｕ ｔ ｓ
Ｄｉ ｅ ｅ ｔＭ ｅ ｈ ｄ ｆＡｎ ｉ ｅ ｔ ｉｖ ｌ ｍ ｐ ｃ ｎ ｆ ｒ ｎ ｔ ｏ ｓｏ ｔｇ ｎ Ｒｅ ｒｅ ａ Ｉ ａ ｔｏ Ｌ Ｏ Ｄｅｇ ｉ ＨＵ － ｕ， ＡＮ Ｇ Ｓ ｉ ｈ ｎ ｈ－ ａ ｇ ｚ
（ ｅａｔ ｎ ｏ Ｐ ｔ ｌ ｙ Ｔ ｅ ｅｏ ｄ ｆｉｔ Ｈｏｐｔ ｏ Ｇｕｎ ｚ ｏ Ｍｅｉ ｌ ｏｌ ｅ Ｇ ａｇ ｈ ｕ５０ ６， ｈ ａ Ｄｐｒ ｍｅ ｔ ｆ ａｈ ｏ ， ｈ Ｓ ｃｎ ＡＦｌ ｅ ｏｇ ｉ ａ ｄ ｓｉ ｌ ｆ ａｇｈ ｕ ｄ ａ Ｃ ｌ ｇ， ｕｎ ｚｏ １２ ０ Ｃ ｉ ） ａ ｃ ｅ ｎ 【ｂ ｔ ｃ Ｏ ｊｃ ｖ ｏ ｘ ｌｒ ｄ ｅｅｔ ｔｏ ｓ ｆｎｉｅ ｔｅａｗ ｉ ｅｔｈ Ａ ｓｒ ｔ ｂｅｔ ｅ ｐｏｅ ｉ ｒ ｈ ｄ ａ ｔ ｎ ｅ ｉ ｌ ｈｃ ａ ｃｔｅｍｍｔ ｈｓ ｃ ｅ ｃｌｔｎｎ ｓｌ． ｔｏｓＵ ｉ ａ］ ｉ Ｔ ｅ ｆ ｎ ｍｅ ｏ ｇ ｒ ｒ ｖ ｈ ｆ ｉ ｍｏ ｉｏｈｍｉａｓ ｉｉｇ ｅｕｔ Ｍｅ ｄ ｓ ｇ ｔ ａ ｒ ｓ ｈ ｎ １Ｈ ｇ ｔ ｅ ｔｒ ａｄ ｉ ｐｅｓｒＥ Ｔ ｐ ． ｂ ｆ ｒｅ ｅａ ２ Ｈ ｇ ｔ ｅ ｔｒ ａｄ ｉｈ ｒｓ ｒ Ｅ Ａ（Ｈ８ ） ｕ ｅｒｔｅ ａ ３ ） ｉｈ ｅ ｒｕｅ ｎ ｈｇ ｒｓ ｅ Ｄ Ａ（Ｈ９ ）ｕ ｅｒｔ ｖｌ ） ｉｈｅ ｒ ｕｅ ｎ ｈｇ ｐｅｓ ｅ ＤＴ ｐ ． ｂ ｆ ｒｅ ｉ ｌ ） ｍｐ ａ ｈ ｕ ｏ ｉ ｒ ； ｍｐ ａ ｕ ｏ ｒｖ ；
免疫组化中抗原修复的方法
免疫组化中抗原修复的方法介绍免疫组化是一种重要的实验技术，用于检测细胞或组织中的特定抗原。
然而，在某些情况下，抗原可能会失去其天然的组织学特性，从而导致免疫组化结果的不准确性。
为了解决这个问题，可以使用抗原修复的方法。
本文将详细探讨免疫组化中抗原修复的方法。
抗原修复的目的抗原修复的目的是恢复组织中的抗原在免疫组化实验中的表达，以提高免疫组化结果的准确性。
抗原修复的方法可以解决以下问题： 1. 组织固定时可能导致抗原的变性或掩盖。
2. 组织切片时可能导致抗原的丢失。
3. 某些抗体需要与特定抗原结合才能发挥作用。
常用的抗原修复方法煮沸法煮沸法是一种简单而常用的抗原修复方法。
具体步骤如下： 1. 将组织切片置于含有缓冲盐水的容器中。
2. 将容器放入煮沸器中，保持沸腾10-30分钟。
3. 取出容器，将切片冷却至室温。
4. 切片清洗，以去除残余盐水。
酸性解偶联剂法酸性解偶联剂法可以用于修复因羟烯酸基团损伤而导致的抗原修复问题。
具体步骤如下： 1. 将组织切片置于含有酸性解偶联剂的缓冲溶液中。
2. 在室温下孵育切片1-2小时。
3. 清洗切片，以去除残余缓冲溶液。
高温蛋白酶法高温蛋白酶法可用于修复由于过度固定而导致的抗原修复问题。
具体步骤如下： 1. 将组织切片置于含有高温蛋白酶的缓冲溶液中。
2. 在适当的温度下孵育切片一段时间，并定期观察抗原修复的程度。
3. 停止孵育，冷却切片至室温。
4. 清洗切片，以去除残余缓冲溶液。
抗原修复方法的选择选择适当的抗原修复方法取决于多个因素： 1. 组织的类型和性质。
2. 使用的抗体种类。
3. 实验的目的和要求。
结论抗原修复是免疫组化中的重要步骤，可以提高实验结果的准确性。
本文介绍了煮沸法、酸性解偶联剂法和高温蛋白酶法三种常用的抗原修复方法。
选择适当的抗原修复方法对于免疫组化实验的成功至关重要。
在实际应用中，应根据组织的类型和性质、使用的抗体种类以及实验的目的和要求来选择合适的抗原修复方法。
不同方式的抗原修复对免疫组化结果的影响
不同方式的抗原修复对免疫组化结果的影响目的：探讨免疫组织化学中不同抗原修复方式对染色结果的影响。
方法：采用高温高压修复法、微波修复法和酶消化法对病理科采用的四项免疫组织化学标记（p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1）进行染色，在显微镜下对染色阳性率进行比较。
结果p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1四项标记在三种修复方法下均具有较高的阳性率。
高温高压修复法、微波修复法的染色结果阳性率较高，与酶消化法相比，有统计学意义（P＜0.05）。
结论：三种修复方法均有实用性，三者相比，高温高压修复法、微波修复法修复效果更好，对病理诊断指导意义较大。
标签：免疫组化；抗原修复；方法对比免疫组化技术是病理科常见鉴别技术，在病理诊断中发挥显著作用。
石蜡切片由于在制作过程中使用大量有机溶剂（酒精、二甲苯）和包埋过程中加热处理使抗原活性丧失，所以通常采用抗原修复方法来提高石蜡切片免疫组化反应的敏感性。
抗原修复的质量在一定程度上决定了染色结果的好坏，从而影响诊断结果的判定[1]。
目前，抗原修复的方法有酶修复法、高温高压修复法、微波修复法等。
本科室采用不同抗原修复法对p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1进行比较获取最佳抗原修复方法。
1 材料1.1 材料：选用新疆医科大学第二附属医院病理科2010年3月-2016年6月期间手术切除的经病理证实为食管鳞癌的石蜡包埋组织共150例。
经两位病理医师诊断确诊，组织直径在3cm以上，苏木精-伊红染色法（HE）染色切片细胞清晰，对比度明显、颜色鲜艳。
1.2 主要试剂：即用型p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1一抗，二抗，DAB 试剂，高压锅、微波炉。
2 方法2.1 染色方法：组织经4%甲醛固定，常规石蜡包埋，3～5μm连续切片，60℃烤箱烤片过夜备用。
抗原修复法分三组：①将切片置于盛有柠檬酸盐缓冲液的高压锅内高压修复3min；②用柠檬酸盐缓冲液微波加热10min；③或用胰酶或胃酶消化15min。
抗原修复技术及其在免疫组化中的应用
抗原修复技术及其在免疫组化中的应用福尔马林固定时，组织中的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成了醛键，使得不少抗原决定簇被封闭。
同时，由于甲醛的聚合作用，使蛋白质分子间相互交联形成大分子网络，也导致了抗原决定簇被掩盖，这就使得相当部分的抗原不能与抗体很好是进行反应。
因此，抗原修复也是影响免疫组化染色结果的基本因素。
抗原修复(Antigen retrieval ，AR)技术，建立在Fraenkel-conrat等人[1]一系列生物化学研究，经1991年shi等人[2]发展。
抗原修复是指石蜡、冰冻、火棉胶、塑料切片免疫组织化学（IHC）前用胰蛋白酶、尿素、表面活性剂、微波缓冲液和金属盐等，使被掩盖的抗原决定簇或变性的抗原重新暴露或抗原性得到一定程度的恢复过程。
抗原修复能最大程度地恢复在制片等过程中损失的抗原性，使原来认为不能在石蜡切片上进行IHC的许多抗体获得了良好的染色结果，成为一种有效的补救措施。
本文的目的是概述AR-HIC的发展、应用和标准化。
一、AR技术加热AR技术微波加热方法. 在传统标准方法,经脱蜡、脱水和用3%H2O2阻断内源性过氧(化)物酶，石蜡切片经蒸馏水冲洗，放置在塑料Coplin缸中。
加入AR液，如蒸馏水、缓冲液、金属盐液、尿素等，盖上并置家用微波炉加热5或10分钟（注意防止切片干躁）。
有时在加热5分钟后，间隔1分钟，再加热5分钟（在第一个5分钟后检测液体高度）。
加热后，从微波炉取出塑料Coplin缸，冷却15分钟。
片子经蒸馏水冲洗二次后在PBS液中浸5分钟，才进行IHC染色。
为了保持一致的加热条件，必须设定靠近微波炉中心相同的位置及同一编号的Coplin缸，按照不同的抗体设定不同的加热时间，尽可能的建立标准的加热条件。
微波（MW）加热过程如下：在专用盒内放入200ml柠檬酸缓冲液（PH6.0±0.1），并盖上带有小孔的盖子，微波加热至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架中，放入已沸腾缓冲液中，有作者提供做免疫组化时采用微波炉中等功率800W[3]，微波炉选用解冻档的国产家用微波炉(根据目前的研究,建议用医用微波炉)，中档继续处理10-20分钟；取出微波塑料缸冷却至室温，从缓冲液中取出玻片，片子经蒸馏水冲洗二次，之后用PBS（PH7.2-7.4）冲洗两次，每次3分钟。
免疫组化抗原修复技术新进展_姚梅宏
临床与实验病理学杂志 J Clin Exp Pathol 2013 May; 29( 5)
免疫组化抗原修复技术新进展
·综 述·
姚梅宏，郑智勇
摘要： 抗原修复是影响免疫组化染色结果的重要因素，现已 广泛应用于病理学和形态学研究领域。基于抗原修复的蛋 白质组学研究，有助于从福尔马林固定石蜡包埋组织中提取 蛋白质，为个性化医疗中相关分子生物标记物的应用建立实 用而先进的平台。该文现对抗原修复的机制与其在细胞或 组织样品的制备、免疫组化的标准化以及蛋白质组学等方面 的应用进行综述。 关键词： 抗原修复； 免疫组织化学； 组织病理学； 细胞病理学； 蛋白质组学； 文献综述 中图分类号： R 365 文献标志码： A 文章编号： 1001 － 7399（ 2013） 05 － 0544 － 04
多数情况下经福尔马林固定和 AR 处理后得到的 IHC 信号更强、背景更少、形态更佳。在冷冻组织切片的 IF 和 IHC 染色过程中经常发生的非特异性背景染色，经 AR 处理 后也明显减少。现今 AR-IHC 染色结果作为“金标准”的事 实已逐渐被接受，但在使用 FFPET 切片时应尽可能采用独 立客观的生化方法，如蛋白质印迹（ Western blot） 分析，来验 证不同样品制备条件下的抗体性能。 2． 3 IF 染色 随着新染料的开发及 IF 在图像分析定量测 量和光谱成像显微镜的多重标记上的优势，近日掀起了 IF 法在 FFPET 中 的 应 用 高 潮。经 证 实 AR 作 为 增 强 FFPET IHC 抗原性 的 程 序，具 有 减 少 非 特 异 性 自 体 荧 光 的 优 势。 Long 等［17］运用配伍试验法检测 3 种缓冲溶液（ 100 mmol / L Tris，pH 10； 0. 05% 柠康酸酐； 含 2 mmol / L EDTA 的 10 mmol / L 柠檬酸和 0. 05% 吐温 20，pH 6. 2） 经微波炉加热 AR，均得 到令人满意的 IF 染色结果。
雌、孕激素受体检测中高压加热与微波抗原修复法的比较
２０ ０６年 ６月 第 ２ ７卷 第 ６
韶 关 学 院学 报 ・自然科学
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＳ ａ ｇ ａ ｎ ｖ ｒｉ ￣ ｔ ｒ ｌ ｃ ｅ ｃ ｏ ｒ ａ ｈ ｏ ｕ ｎ Ｕ ｉｅ ｓｔ Ｎａ ｕ ａ ｉｎ ｅ ｏ ｙ Ｓ
高压与微波抗原修 复， 采用免疫组化方法进行雌 、 孕激素 受体检 测 ， 显微镜 下观察 ． 结果表 明： 用高压抗原修 复 采
法检测 的 Ｅ Ｒ和 Ｐ Ｒ阳性 率分 别为 ８ ．３ ３ ９ ％与 ８ ．６ 其 中中度 阳性和强 阳性 占阳性总数 比例 Ｅｌ ７ ．４ Ｐ ０ ３ ％， ｌ为 ２ ３ ％；Ｒ 为 ７ ．３ ． ３３ ％ 而采用微波抗原修 复法检测的 Ｆ ａ Ｐ Ｒ与 Ｒ阳性 率分别为 ７ ．１ ３２ ％和 ６ ．４ ， 中中度 阳性与 强阳性 占 ９６ ％ 其 阳性 总数 比例 Ｅ Ｒ为 ５ ．２ ；Ｒ为 ５ ．８ ． １２ ％ Ｐ １２ ％ 在雌 、 孕激素 受体的检 测 中， 高压加 热法比微波修 复法效果更好 、 更
Ｊ ｎ．０ ６ ｕ ２０
Ｖｏ ． ７ １２ Ｎｏ． ６
雌 、 激 素 受体 检 测 中高压 加 热 与 孕 微 波 抗原 修 复 法 的 比较
范丽萍 ， 徐 彤， 邱俊 勇 ， 李 静
（ 北人 民 医院 病 理科 ， 东 韶 关 ５２２ 粤 广 １０６）
摘要 ： 为了探讨 高压加热与微波抗原修 复方法在乳腺 癌雌 、 孕激素受体检 测中的作用 ， ５ 对 ６例乳腺 癌组 织分别作
５ 例乳腺癌 Ｅ 、Ｒ高压与微 波抗原修复方法检测结果见表 １从表 １ ６ ＲＰ ． 中可以发现 ： 采用高压抗原修复 方法检测的 Ｅ Ｒ中度阳性与强 阳性例数 占阳性总数的 ７ ． ％（ ／ ）而采用微波法的中度与强阳性例数 占 ２３ ３ ４ ； ４ ４ ７ 阳性总数的 ５ ． ％（１ １， １２ ２／ ）两者存在着统计学差异（ ２ ４ １ ， ＜ ． ）采用高压抗原修复法检测的 Ｐ ， ２ ４ Ｘ ＝ ． Ｐ Ｏ０ ． ５ ５ Ｒ 中度阳性与强阳性例数 占阳性总数的 ７ ． ％（３ ５ ， ３３ ３ ３， ）而采用微波法 的中度阳性与强 阳性例数 占阳性总数 ４ 的 ５ ．８ ２， ）两者亦存在统计学差异（ ２ ４３ ， ００ ） １２ ％（０３ ， ９ Ｘ ＝ ． Ｐ＜ ．５ ． ７
乳腺癌免疫组化内容
乳腺癌免疫组化内容
一、标记物选择
在乳腺癌免疫组化实验中，通常会选择以下标记物：
1.ER（雌激素受体）：用于评估乳腺癌对激素治疗的反应性。
2.PR（孕激素受体）：与ER一起评估激素治疗的反应性。
3.HER2（人类表皮生长因子受体2）：用于评估乳腺癌的恶性程度和预测化疗效果。
4.Ki-67：反映肿瘤细胞的增殖活性。
5.p53：与肿瘤恶性程度和预后相关。
二、实验步骤
1.样本处理：将乳腺癌组织样本进行固定、脱水、透明、浸蜡等处理，以便进行免疫组化实验。
2.切片制备：将处理好的组织样本切成薄片，附着在载玻片上。
3.抗原修复：使用抗原修复液对组织切片进行加热，以暴露抗原并使其易于与抗体结合。
4.抗体孵育：将标记物抗体与组织切片混合，并在适宜温度下孵育一定时间，使抗体与抗原结合。
5.信号转化：使用酶或其他介质将抗原-抗体复合物转化为可见信号，以便在显微镜下观察。
6.染色观察：对组织切片进行染色，并在显微镜下观察标记物的表达情况。
7.结果分析：根据染色强度、阳性细胞比例等因素对结果进行分析，评估乳腺癌的生物学特性。
注意事项：
1.免疫组化实验需要使用特定的抗体，不同的抗体可能对不同的抗原具有特异性，因此选择合适的抗体非常重要。
2.实验过程中需要注意温度、时间和pH值等条件，以确保抗体与抗原的结合和信号转化的顺利进行。
3.免疫组化实验结果需要进行客观、准确的评估，避免出现假阳性或假阴性结果。
抗原修复方法及注意事项
抗原修复方法及注意事项在免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）和免疫细胞化学（immunocytochemistry，ICC）等实验技术中，抗原修复是一个至关重要的环节。
它对于提高抗原的检测敏感性和特异性具有重要意义。
接下来，让我们详细了解一下抗原修复的方法以及需要注意的事项。
一、抗原修复的概念和意义抗原修复，简单来说，就是通过特定的方法，使在组织处理过程中被封闭或改变的抗原表位重新暴露或恢复，从而提高抗原抗体反应的强度和准确性。
在常规的组织处理过程中，如固定、脱水、包埋等，抗原的结构和性质可能会发生变化，导致抗原表位被遮蔽或破坏，影响抗体与抗原的结合。
而通过抗原修复，可以在一定程度上逆转这些变化，提高检测的效果。
二、常见的抗原修复方法（一）热诱导抗原修复（HeatInduced Antigen Retrieval，HIAR）1、水煮法将切片放入盛有修复液的容器中，在电炉或微波炉上加热至沸腾，保持一定时间。
这种方法操作简单，但温度控制相对较难，容易出现干片等问题。
2、高压加热法利用高压灭菌锅进行抗原修复。
在锅内加入适量修复液和切片，设定压力和时间。
高压加热法的温度和压力较为稳定，修复效果较好，但设备要求较高。
（二）酶消化法使用蛋白酶，如胰蛋白酶、胃蛋白酶等，对组织切片进行消化处理。
酶的浓度和作用时间需要根据具体情况进行优化。
酶消化法适用于某些特定的抗原，但可能会对组织结构产生一定的破坏。
（三）微波抗原修复将切片放入含有修复液的容器中，在微波炉中进行加热处理。
微波加热速度快，但需要注意微波辐射的均匀性。
三、抗原修复液的选择常用的抗原修复液包括柠檬酸盐缓冲液（pH 60）、EDTA 缓冲液（pH 80 或 90）等。
选择修复液时，需要考虑抗原的性质、组织类型以及实验条件等因素。
一般来说，柠檬酸盐缓冲液适用于大多数抗原的修复，而EDTA 缓冲液对于某些金属离子相关的抗原修复效果较好。
抗原修复技术在免疫组化中的应用_cropped
染色性 ,而长时间培养则常常可使一些革兰阳性菌变 为革兰阴性菌 ,值得注意 。
革兰染色是一个古老和经典的方法 ,从创立以来 , 就成为世界各细菌实验室每天使用而不可缺少的细菌 实验技术 ,为细菌学在医学和工农业等各个领域里的 应用和发展做出了重大的贡献 。
革兰染色法在过去的 一个多世纪中 , 虽然经过几次改进 , 却都一 直 沿 用 着Gra m 原法的四步法 ,四步法效果虽然很好 , 但操作比较复杂 。
现代实验室工作繁忙 , 对各项技术方法有力 求简便的要求 ,以便在有限的时间内完成更多的任务 本文报道的革兰染色三步法 ,基本原理没有改变 ,只是 把酒精退色和复染的两步合并在一步中进行 , 从而达到减少操作 、缩短时间 、提高工作效率的目的 。
(收稿日期 :2004209214)(技术方法栏目编辑 :张玉亭)综述讲座抗原修复技术在免疫组化中的应用陈 龙 ,周晓春 ,齐洁敏(承德医学院 ,河北 承德 067000)【关键词】免疫组织化学 ;抗原修复 ;应用 【中图分类号】R392 . 11【文献标识码】A【文章编号】100426879 (2004) 0420325203的原理可能是 : ( 1) 水解作用 : 高温 、高压 、酸性条件等使醛 、羧甲键断裂 ,和蛋白质一级结构折叠成的三维结构因水解而断裂 ,从而打开了抗原因福尔马林固定所引起 的 抗 原 决 定 簇 的 交 联 , 暴 露 出 抗 原 决 定 簇4 ～6(2) 蛋白酶 、尿素等能溶解“被覆”表面的变性蛋白 , 且易于洗脱 ,从而暴露抗原决定簇7。
( 3) 微波辐射作用下 ,蛋白质分子碰撞 、运动 ,使得蛋白质分子的化学键得到重新结合 ,缓冲液中长时间浸泡 ,使蛋白质分子抗原决定簇有足够的时间恢复活性状态 , 暴露出被掩盖 的活性基团 ,而起到修复作用 。
2 常用的抗原修复方法2 . 1 酶消化方法 酶消化方法是最早的抗原修复方法 ,消化酶的作用在于能够溶解“被覆”于表面的变性 蛋白 ,暴露抗原决定簇 。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
医药 生 Ｑ
笫 ３卷 第 ６ ２ 期
Ｈ ｂｉ ｅｉ ｌｏｒ ｌ ００ Ｖ１ ２Ｍ ｒ ０６ ｅｅ Ｍ ｄ ａ Ｊ ｎ 。 １． ０３ ａ Ｎ 。 ｃ ｕ ａ ２
・
论 著
・
高 温 高 压 抗 原 修 复法 提 高 乳 腺 癌 免 疫 组 化 准 确 率 的应 用 研 究
统计学意义 。
２ 结 果
３ ｍ。试剂 ： 第一抗体为兔抗人 Ｅ Ｒ单克 隆抗体 ， 兔抗人 Ｐ Ｒ单
高温高压抗原修复法处理后 的乳 腺组织切 片 ， 胞核呈褐 细 色， 阳性 物质定位准确 ， 阳性 与阴性对 比明显 ， 细胞结果 与细胞 轮廓完整 清晰 ， 阳性率 明显 高 于微 波 炉抗 原修 复处 理 的切 其 片， 差异有统计学意义 （ ＜ ．５ 。见表 １ Ｐ ００ ） 。
腺癌的组织切 片的雌 激素 受体 （ Ｒ 、 激素 受体 （ ａ） Ｐ ３ Ｅ ）孕 Ｐ 、５ 、
Ｋ６ 行 检 测 ， 法 介 绍 如 下 。 ｉ ７进 方 １ 材 料 与 方 法 １１ 材料 ． 本 科 室 近期 已确 认 乳 腺 癌 ６ ０份 组 织 块 ， 片 厚 度 切
１３ 统计学分析 计数资料采用 Ｘ 检验， ＜ ．５ ． ２ Ｐ ００ 为差异有
３ 讨 论
克隆抗体 ， 兔抗人 Ｐ ３单克 隆抗 体 ， ５ 兔抗 人 Ｋ６ ｉ７单克 隆抗 体。
第二抗体为快捷免疫组化 Ｍ ｘｉｏ Ｍ 检测试剂盒 ， ａｖｓ ｎＴ ｉ 即用型单 克隆抗兔 Ｋ Ｔ ０ ６ 均 购 于福 州迈新 生 物技 术开 发有 限公 司 ， Ｉ５ ０ （ 直接使用 ， 无需稀 释 ）新鲜 配制的 ｐ ， Ｈ值为 ７ ４的 Ｐ Ｓ液为缓 ． Ｂ 冲液。仪器 ： 医用可调控 电炉 ２０ ０ｋ 市 售不锈 钢高压 锅直 ０ Ｗ，
径 １ ｍ，５ Ｎ ｔ ｎｌ 波 炉 １台 。 ６ｃ ７ ０Ｗ ａｏ ａ 微 ｉ
目前 进行 的常规蜡 切片标本 ， 般均 用 甲醛 固定 ， 使许 一 致 多抗原决定簇被醛基 交联封 闭 ， 至于无 法和抗 体结合 ， 以 其
１２ 方法 ．
（） １ 前期 准备 ： 包括组织 即时充分 固定 ， 合理 取材 ，
采 用高压 高温抗 原修 复法作预 处理 ， 石蜡组 织切 片阳性表 达率较微 波炉抗原修复法 明显提 高（ ＜ ．５ 。 Ｐ ０ ０ ）
结论
预处理采 用高温高压抗 原修 复法 ， 高 了免疫 组化 阳性 率的表达 ， 色对 比鲜明 ， 提 显 背景干净 清晰 ， 从 【 关键 词】 高温 高压抗原修 复法 ； 免疫组 织化 学技术 ； 组织预处理
原 因为 ：１ 在 甲醛固定 过程 中形成 的醛 键而封 闭 了部 分抗原 （）
决定簇 ； ２ 甲醛在保存过程 中会形成羧 甲基 ， （） 而封闭抗原决定 簇 ； ３ 在用 固定剂 固定 时 ， 使蛋 白与蛋 白之 间交 联 ， 可能 （） 会 也 会封 闭抗原决定簇 。抗 原修复是影响染 色效果 的最关 键因素 ， 不 同抗原修 复方法 直接影响免疫组化染色结果 的表达 。酶 修复法是最早 的抗原修 复方法 ， 目前热修 复法在免 疫组化 中 但
郭 பைடு நூலகம்芳
【 摘要】 目的 探讨 免疫组化反应 中的 高温 高压抗原修复法预处理方 法对反应 结果的影 响。方法
对６ ０份 经 １ ％ 中性 甲醛液 固定过 的乳腺癌组 织， ０ 经脱水、 石蜡 包埋制成切 片 ， 分别采 用高温高压抗原修 复
法和 微 波 炉抗 原 修 复 法做 预 处 理后 ， 行 免 疫组 化 染 色 。 结果 石 蜡 组 织 切 片 免 疫 组 化 反 应 预 处 理 ， 用 进 采 高温高压抗 原修 复法 ， 其阳性率为 ５ ． ％ ， 用微 波炉抗 原修复法 ， 阳性率 为 ４ ． ％。免疫组化反应 中 ５８ 采 其 ５４
适宜的石蜡包埋 ， 薄而完整均匀 的切片 ， 用经过 Ａ Ｅ Ｐ Ｓ防脱片剂
处 理 过 的载 玻 片 捞 出平 整 而 无 气 泡 的 组 织 片 进 行 免 疫 组 化 染
免疫组化的工作人员 ， 送检组织经过 甲醛 固定抗原决定 簇被醛
基交联封闭 ， 无法有 效地 与抗体 结合 而显 示 出来 ， 从而大 大影
响 了免 疫 组 化 的 结 果 ， 提 高 标 本 中抗 原 检 测 阳性 率 ， 科 为 我
从 ２０ ０４年应用高温高压 抗原 修复法 ， Ｐ Ｓ抗原修 复液 对乳 用 Ｂ
免疫组化 已成为现代病理诊 断中不可缺少 的检测技术 ， 特 别是在判断肿瘤组织 的来源 、 分类 以及 良恶 性肿瘤 的鉴 别诊断 等方面起着重要作用 … ， 但是免疫组化的不稳定性 常常 困扰着
器， 冷却容器 ， 抗原修 复后 的切片用 Ｐ Ｓ液洗 ３次 ， 次 ５ｍｉ； Ｂ 每 ｎ
（ ）０ ６ １ ％正常兔血清 ３ ℃孵育 ３ ｉ ；７ 用 Ｐ Ｓ液洗 ３次 ， ７ ０ｒ ｎ （ ） ａ Ｂ 每 次 ５ｒｎ 滴加 第一抗 体 ３ ℃孵育 １ｈ （ ） Ｂ ｉ， ａ ７ ；８ Ｐ Ｓ液 洗 ３次 ， 每次 ５ｍｎ 滴加第二抗体 ３ ℃孵 育 ３ ｉ；９ Ｐ Ｓ液洗 ３次 ， ｉ， ７ ０ｒｎ （ ） Ｂ ａ 每次 ５ｍｎ Ｄ Ｂ显色 ， ｉ， Ａ 苏木素复染封 片 ；１ ） ６ （Ｏ 将 ０份乳腺 癌组织蜡 块， 分别用高温高压修复法和微波炉法进行抗原修复 。
而提 高病 理 诊 断 的 准 确 率 。
【 中图分类号】 Ｒ７４２ ． ３
【 文献标识码】 Ａ
【 文章编号 】 １０ ７８ （０００ — ６４ ０ ０２— ３６ ２１）６ ０７ — ２
火源 ， 待高压锅 内气 泄 放 完后 打 开锅 盖 自然冷 却 至室 温 。后 者， 加热 ５ｍｉ 医用微 波炉 ） ｎ（ 自然 冷却 ， 再加 热 ５ｒｉ， 出容 ｎ取 ａ