实验一显微镜的使用及微生物形态的观察

四、器材
显微镜、细菌三型涂片、霉菌和放线菌 的永久玻片等。
五、操作步骤
（ 1 ）置显微镜于平稳的实验台上，镜座距 实验台边沿约 3-4 ㎝，镜检者姿势要端正， 一般用左眼观察，右眼便于绘图或记录，两 眼必须同时睁开，以减少疲劳，亦可练习左 右眼均能观察。
（ 2 ）调节光源、光线较强的天然光源宜用 平面镜；光线较弱的天然光源或人工光源宜 用凹面镜。
聚光器（condenser）：光源射出的光线通过聚光器汇聚成光锥照射 标本，增强明度和造成适宜的光锥角度，提高物镜的分辨力。聚 光器由聚光镜和虹彩光圈（iris diaphragm）组成，聚光镜由透 镜组成。虹彩光圈由簿金属片组成，中心形成圆孔，推动把手可 随意调整透进光的强弱。调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小， 可得到适当的光照和清晰的图像。
三、基本原理
1、 细菌的个体形态是指细菌细胞的大小， 形状等特征，利用观察个体形态对细菌 进行初步识别和鉴定。
2、 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体 的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多 能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培 养基内生长的叫基内菌丝，基丝生长到一 定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并 进一步分化产生孢子丝及孢子。
显微镜是由机械装置和光学系统两大部分组成。
1．机械装置
镜座（base）和镜臂（arm） 镜座位于显微镜底部 , 呈马蹄形，它支持全镜。镜 臂有固定式和活动式两种，活动式的镜臂可改变角 度。镜臂支持镜筒。
镜筒（body tube） 是由金属制成的圆筒，上接目镜，下接转换器。镜 筒有单筒和双筒两种，单筒又可分为直立式和后倾 式两种。而双筒则都是倾斜式的，倾斜式镜筒倾斜 45 °。双筒中的一个目镜有屈光度调节装置，以备 在两眼视力不同的情况下调节使用。
实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察
一、目的要求 1．熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能； 2．学习并掌握油镜的原理和使用方法； 3．学习观察微生物的个体形态； 4．学会生物图的绘制。
二、显微镜的基本构造
1. 物镜转换器 2. 接物镜 3.游标卡尺 4.载物台 5.聚光器 6. 彩虹光阑 7.光源 8. 镜座 9. 电源开关 10. 光源滑动变阻器 11. 粗调螺旋 12. 微调螺旋 13. 镜臂 14.镜筒 15.目镜 16.标本移动螺旋
目镜（coular lens）：装于镜筒上端，由两块透镜组成。目镜 把物镜造成的像再次放大，不增加分辨力，上面一般标有7 ×、10×、15 ×等放大倍数，可根据需要选用。一般可按 与物镜放大倍数的乘积为物镜数值孔径的 500-700 倍，最 大也不能超过 1000 倍的选择。目镜的放大倍数过大，反而 影响观察效果。
光源（light source）：较新式的显微镜其光源通常是安装在显微镜 的镜座内，通过按扭开关来控制；老式的显微镜大多是采用附着 在镜臂上的反光镜，反光镜是一个两面镜子，一面是平面，另一 面是凹面。在使用低倍和高倍镜观察时，用平面反光镜；使用油 镜或光线弱时可用凹面反光镜。
滤光片（filter）：可见光是各种颜色的光组成的，不同颜色的光线 波长不同。如只需某一波长的光线时，就要用滤光片。选用适当 的滤光片，可以提高分辨力，增加影像的反差和清晰度。滤光片 有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等各种颜色的，分别透过不同波 长的可见光，可根据标本本身的颜色，在聚光器下加相应的滤光 片。
六、思考题和作业题
1、使用油镜观察时，为什么要低倍物 镜观察，而不是直接用高倍物镜或油镜 观察？
3、绘制青霉和根霉图
3．高倍镜观察
将高倍镜转至正下方，在转换物镜时， 需用眼睛在侧面观察，避免镜头与玻片相 撞。如果高倍镜触及载玻片应立即停止旋 动，说明原来低倍镜就没有调准焦距，目 的物并没找到，要用低倍镜重调，如果调 对了，换高倍镜时基本可以看到目的物， 若有点模糊，用细调节器调就清晰可见。 找到最适宜观察的部位后，将此部位移至 视野中心，准备用油镜观察。
4．油镜观察
（ 1 ）用粗调节器将镜筒提起约2㎝，将油 镜转至正下方。
（ 2 ）在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏 油，切勿加多。
（ 3 ）从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心 地降下，使油镜浸在香柏油中，其镜头几 乎与标本相接，应特别注意不能压在标本 上，更不可用力过猛，否则不仅压碎玻片， 也会损坏镜头。
2．低倍镜观察
检查的标本需先用低倍镜观察，因为低倍镜 视野较大，易发现目标和确定检查的位置。
将三型涂片玻片标本置镜台上，用标本夹 夹住，移动推动器，使观察对象处在物镜正下 方，转动粗调节器，物镜降至距标本约 0.5cm 处，由目镜观察，此时可适当地缩小光圈，否 则视野中只见光亮一片，难见到目的物，同时 用粗调节器慢慢升起镜筒，直至物像出现后再 用细调节器调节到物像清楚时为止，然后移动 标本，认真观察标本各部位，找到合适的目的 物，并将其移至视野中心，准备用高倍镜观察。
转换器（nosepiece）：为两个金属碟所合成的一个转盘， 其上装 3 - 4个物镜 , 可使每个物镜通过镜筒与目镜构成 一个放大系统。
载物台（stage）：又称镜台，为方形或圆形的盘，用以载 放被检物体，中心有一个通光孔。在载物台上有的装有 两个金属压夹称标本夹，用以固定标本；有的装有标本 推动器，将标本固定后，能向前后左右推动。有的推动 器上还有刻度，能确定标本的位置，便于找到变换的视 野。
霉菌可产生复合分枝的菌丝体，分基 内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一 定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝 产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝) 及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌 的重要依据。
毛霉与根霉
青霉
分生孢子梗
分生孢子 小梗 梗基 附枝
顶囊 分生孢子梗
足细胞
曲霉
分生孢子 次生小梗 初生小梗
调焦装置：是调节物镜和标本间距离的机件，有粗动螺旋 （coarse adjustment）即粗调节器和微动螺旋（fine adju stment）即细调节器，利用它们使镜筒或镜台上下移动， 当物体在物镜和目镜焦点上时，则得到清晰的图像。
2．光学系统
物镜（objective）：安装在镜筒下端的转换器上，因接近被观 察的物体，故又称接物镜。其作用是将物体作第一次放大， 是决定成像质量和分辨能力的重要部件。物镜上通常标有 数值孔径、放大倍数、镜筒长度、焦距等主要参数。如： NA 0.30 ；10 ×；160/0.17 ；16mm。其中“ NA 0.30” 表 示数值孔径（numerical aperture，简写为 NA），“10 ×” 表示放大倍数，“160/0.17”分别表示镜筒长度和所需盖玻 片厚度（mm）,“16”表示焦距。