中药显微鉴定

3 粉末特殊处理制片方法
含多量淀粉的药材粉末 大量淀粉粒的存在会 影响观察、描绘及摄影等效果。取一部分粉末于 试管中加水煮沸，使淀粉粒糊化而溶解，放置或 用离心机使所需细胞、组织下沉管底，用长吸管 将沉淀物吸出供制片观察。
含多量油类的药材粉末 进行脱脂以除去大部 分油脂，取少许粉末于小烧杯中，加氯仿少许搅 拌浸渍，过滤，在滤纸上再加少许氯仿洗涤粉末 即可。也可直接将粉末水洗，用柔软的毛刷轻轻的刷洗表面。 杀生 固定 保存 将需要制片材料迅速杀死，使组织保持原生活 状态，一般以渗透力较强的的药剂作杀生剂较好。 固定液 ⑴ FAA固定液 38%甲醛：冰醋酸：70%乙醇 5：5:95
用于根、茎、叶、花药、子房的固定，固定时间24h ⑵ FPA固定液 38%甲醛：丙酸：70%乙醇 5：5:95 ⑶卡诺氏固定液 乙醇：冰醋酸 3:1
冷冻切片
仪器：冷冻切片机 包埋材料：水、胶水 切片温度：-20℃ 优点：节省时间、方便快捷。
注意事项：
包埋时，不能有气泡，否则会有空洞。
一定要将材料放直立胶水的中央，使材料完全被 胶水包裹。并且外围胶水的厚度要大于等于材料 的半径，有利于粘片。
不宜将材料和胶水冻的太硬，否则在切片过程中 会造成中间材料的破损。
用于根尖、花药、子房的固定，固定不超过时间24h 材料处理时，注意不能影响要观察的显微鉴别特征。如要观察菊 糖、粘液等在软化、切片、装片等过程中，均不可与水接触，以 免溶解消失；要观察挥发油、树脂等，则不可与高浓度乙醇或其 它有机溶媒接触。
3 脱水
脱水常用乙醇、二氧六环、正丁醇、叔丁醇、丙酮等
目的 除去组织中的水分，使细胞变硬； 便于包埋物进入组织及细胞，便于切片； 脱水后的组织再经过透明，便于观察。
透蜡常用固体石蜡 目的 石蜡进入细胞组织内，便于切片 透蜡方法 50%、75% 、100%石蜡各处理3h。温度：63-64 ℃ 包埋 材料在石蜡中央，便于修蜡和切片
5 蜡块的分割、切片
蜡块的分割 将蜡块修成适合的大小，蜡边与材料尽量平行。上 宽下窄，分割好的材料要妥善保管。
切片 将蜡块粘在切片机上，调整刀的角度（与蜡块保持15°的 倾角），厚度调整为20微米以内。
永久制片 （以石蜡切片为例）
石蜡切片
石蜡制片法 借助于石蜡的特性，以其作 为填充剂和包埋剂，用石蜡切片机进行切 片的制作方法。 石蜡制片是目前植物性中药重要的、常用 的、效果较好的切片方法之一，但制片周 期较长是其缺点。
石蜡制片的步骤及操作基本过程如下：取材→固定→ 冲洗→脱水→透明→浸蜡及包埋→切片→粘片→脱蜡 →染色→透明→封片。
4 中成药粉末制片
水泛丸：全球面取样，将丸药从中心剖开，从1/2球 面上刮取。 大蜜丸：将丸药从中心剖开，从1/2或1/4球面上刮 取；也可从内部挑取适量粉末。
散剂、颗粒剂、胶囊：挑取部分粉末； 包衣丸、片：剥除糖衣或包衣，取适量丸或片心磨碎 后，取粉末装片。
5 粉末半永久制片或永久制片
半永久制片 粉末加少量稀甘油充分湿润后，吸除多余的甘油，并将
7 染色、透明及封片
染色方法 复染和单染 ；滴染和泡染。 染料的分类 天然和人工染料；碱性、中性和酸性染料；核燃料、细 胞质染料、细胞壁染料、组织化学染料、活体染料等。 常用染料 苏木精、碱性品红、番红和固绿； 透明 梯度二甲苯 目的 便于观察 封片 用加拿大树胶封片、 目的 便于长期保存；由于 加拿大树胶折射率高适合在显 微镜下观察。
植物显微鉴别不但适用于中药材（饮片），也 适用于中成药制品。这一检测方法先后被《中 国药典》、《香港中药材标准》、《日本药局 方》、《印度草药典》、《美国药典》等采用。
《中国药典》附录Ⅱ 显微鉴别法
显微鉴别法系指用显微镜对药材（饮片） 切片、粉末、解离组织或表面制片及含药材 粉末的制剂中药材的组织、细胞或内含物等 特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择具有 代表性的供试品，根据各种鉴别项的规定制 片。制剂根据不同剂型适当处理后制片。
注意：①切片时速度要快，不可来回拉锯式切割； ②切片时右手不动，只是右臂移动，动作用臂力而不用腕力。
机器切片
石蜡切片机
滑走切片机
6 选片、粘片
选片 选择薄而完整的切片置载玻片上，加水1滴于玻片上，在展片 台上展片，置低倍镜下观察，选取组织构造完整、显微特征清晰者 备用。
粘片 用蛋清与甘油（1:1）。顺时针 用力搅拌均匀，搅拌至无泡沫产生为止。 粘片时，滴少许粘片剂，用手指涂抹均匀。
切片时，切片卷起形成圆筒，是刀刃太钝并附有 杂物、刀得倾角太大、切片太厚等原因引起的。
切片有横纹及薄厚不均一，是刀夹松紧不均一、 刀的倾角过大引起的。
切片有纵裂或纵条纹，是因为刀口有缺口，组织 太硬引起的。
冷冻切片机
粉末制片
1 药材粉碎
选取完整的药材或待鉴定部位，粉碎，过《中国药典》4 号筛备用。
方法 由30%、 50%、 70%、 85%、 95%、 100%、 100%各级酒精 处理2-4h。
4 透明
透明常用二甲苯、氯仿、苯、甲苯等
目的 便于包埋剂(石蜡）及封藏剂（加拿大树胶）的互相融合
方法 用1/4二甲苯、 1/3二甲苯、 1/2二甲苯、 二甲苯、 二甲 苯各处理3-4h。
4 透蜡、包埋
载玻片在酒精灯上微微加热，用玻棒挑适量甘油明胶，盖上盖玻片， 并轻轻加压，以免胶层太厚影响观察，待冷却后用刀片刮去盖玻片四 周溢出的明胶。
经水合氯醛处理的制片，需将水合氯醛液尽量除尽，加甘油，再 除去甘油，同上加甘油明胶封藏即可。
永久制片 制备粉末永久片需将粉末置离心管中，加50%～70%的乙醇
使完全浸没，用细玻棒搅拌5～10分钟后离心，倾去乙醇液；再加95% 乙醇搅拌离心，倾去乙醇液；再加无水乙醇2次，倾去乙醇液后加丙酮 1次，然后用丙酮与二甲苯的等量混合液处理，每次1～2分钟。最后加 入二甲苯使材料透明，搅拌均匀后用滴管吸取少量混合液至载玻片上， 滴加1滴中性树胶液，盖上盖玻片即可。
半永久制片粉末加少量稀甘油充分湿润后吸除多余的甘油并将载玻片在酒精灯上微微加热用玻棒挑适量甘油明胶盖上盖玻片并轻轻加压以免胶层太厚影响观察待冷却后用刀片刮去盖玻片四周溢出的明胶
植物显微鉴定的简介(Microscopical
Identification)
植物显微鉴定是植物鉴定的重要手段之一。它 通过植物组织、细胞、细胞后含物等特征进行 微观分析，达到鉴别真、伪、优、劣的目的。
3.4 粉末特殊处理制片方法
斯氏液装片 斯氏液由醋酸∶甘油∶水（1∶1∶1）组成，主要用于观 察淀粉粒及一些遇水合氯醛试液易溶解的成分。如多糖类 成分、树脂类成分等。
水合氯醛液装片 水合氯醛试液能渗透组织，使皱缩的细胞膨胀；并能溶解 淀粉粒、蛋白质、树脂、挥发油和叶绿素等，使细胞组织 变得透明而清晰。
1 材料的选择
选材（取样）： 根据鉴定要求，选择有代表性的部位；根、根茎、藤 茎等类圆形的材料要包含有中心部位，至少为1/4以上； 叶、花萼、花冠等材料要包含主脉部位。 材料切成长3cm、直径1cm左右块或段，待切面应削平。 样品的量一般不得少于实验所需用的3倍，即1/3供实 验分析用，另1/3供复核用，其余1/3则为留样保存， 保存期至少一年。
含纤维较多的粉末 细胞彼此不分离，则可以用5% 氢氧化钾溶液浸渍若干小时或在水浴上加热浸渍， 使组织分解后再行制片观察。
颜色很深的药材粉末 进行脱色处理，取粉末少许 置小烧杯中或载玻片上，加少许3%的过氧化氢溶液 （双氧水）浸渍数分钟，待粉末颜色变浅时，除去 多余液体，加新煮沸的冷蒸馏水，以除去粉末中的 大量气泡即可，然后再行制片观察。
显微鉴别方法分类
1 根据不同剂型适当处理后制片，分为：
药材（饮片）显微制片：横切片或纵切片制片、粉 末制片、表面制片、解离组织制片、花粉粒与孢子 制片、磨片制片。
含饮片粉末的制剂显微制片：按粉末制片法制片
细胞壁性质鉴别：木质化细胞壁、木栓化或角质化 细胞壁、纤维素细胞壁。
细胞内含物性质鉴别：淀粉粒、菊糖、草酸钙结晶 2 根据切片方法，分为：徒手切片、冷冻切片、半薄 切片（0.5-2.0微米）、超薄切片（ 50-70nm)。