真菌的微生物检验

§ 多细胞真菌由菌丝和孢子组成
菌丝分枝交织成团，形成菌丝体（Mycelium）， 并长有各种孢子，这类真菌即一般称为霉菌（Mold）。
§ 由于生活环境（如营养、温度、氧气等）的 改变，有些真菌的孢子与菌丝两种形态可以
互变，这类真菌称为二相性真菌（dimorphic fungus），如球孢子菌、组织胞浆菌及芽生 菌。
多见
无
单纯菌丝
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（二）检验方法：
§ 1．直接镜检：直接采取病变部位的标本，用显微镜检 查有无菌丝及孢子的存在，本法迅速简便，是临床真 菌检查最常用的方法
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2．分离培养：
取毛发、皮屑、甲屑等标本，用70％乙醇 消毒，接种沙保氏琼脂斜面培养基，25℃培养 7～14天，根据菌落形态及颜色、并挑取菌落 镜检菌丝及孢子的特征进行鉴定。
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（二）致病性和免疫性
§白色念珠菌可侵犯人体许多部位，可引起：
1. 皮肤念珠菌病：好发于皮肤皱褶处； 2. 粘膜念珠菌病：鹅口疮、口角炎、阴道炎最多见。 3. 内脏及中枢神经念珠菌病：肺炎、肠胃炎、心内膜
炎、脑膜炎、脑炎等。
§机体可产生一定免疫力。
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§ 深部真菌可用血琼脂或脑心葡萄糖血琼 脂37℃培养；
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（三）免疫学试验
§用于检测深部感染真菌的抗体，作为辅助诊 断组织胞浆菌、念珠菌、曲霉菌。
§检测深部感染真菌的抗原，用于早期、快速、 特异的诊断。
▪ 乳胶凝集法检测新型隐球菌病患者的荚膜多糖抗原 ▪ ELISA法检测白色念珠菌感染者的甘露聚糖抗原 ▪ 免疫荧光法检测孢子丝菌病患者的可溶性抗原
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（二）免疫性
1．非特异性免疫：人类对真菌感染有天然免疫力。
皮肤分泌短链脂肪酸和乳酸、血液中转铁蛋白、中性 粒细胞和单核巨噬细胞的吞噬作用，以及正常菌群的
拮抗作用。
2．特异性免疫：真菌感染中细胞免疫是机体排菌
杀菌及复原的关键，T细胞分泌的淋巴因子、以T细胞 为主导的迟发型变态反应引起免疫病理损伤能局限和 消灭真菌，以终止感染。
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4．血清学诊断
用于诊断全身性念珠菌病。以念珠菌为抗 原测定机体抗念珠菌抗体
§ 为条件致病性真菌。
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（一）生物学特性
§ 卵圆形，大小2μm×4μm，革兰氏染色阳性。 § 有假菌丝。
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§ 培养特性：典型类酵母型菌落，表面光滑，呈 灰白色或奶油色，有酵母气味。
§ 涂片镜检，可看到表层为卵圆形芽生细胞，底 层有较多假菌丝。
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三、微生物学诊断
（一） 直接检查
1．不染色标本的直接镜检：
直接采取标本制片、显微镜下直接观察，若发现真菌菌丝 或孢子存在时，即可初步判定为真菌感染。
1）标本制备： 2）检查方法： 3）封固液：
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§ ①KOH溶液：本液适于检查致密的难以透明的材料（如
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2）TZC试验：将白色念珠菌接种于含0.005％
氯化三本四氮唑的沙保培养基中，经22～ 25℃，24～48h培养， 白色念珠菌不变色或仅淡红色，其他念珠菌或 酵母菌呈红色或深红色。
3）糖发酵和糖同化试验：
根据这两种试验可将常见的几种念珠菌进行鉴别。
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➢ 细胞壁为几丁质(Chitin)（多聚N－乙酰葡萄糖 组成），并含葡聚糖，甘露聚糖及蛋白质，某些酵母菌
还含类脂体。
➢ 细胞内有较为典型的核结构和细胞器。
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真菌形态分单细胞和多细胞两类
§ 单细胞真菌主要为酵母和类酵母菌（如隐球 菌、念珠菌），呈圆形或椭圆形。以出芽方 式繁殖。
4）动物实验： 本菌对兔有致病力。给兔耳静脉注射本菌，
经4～5天死亡。解剖可见肾、肝肿胀、充血， 并有小脓肿，涂片及培养均可见本菌及其假菌 丝存在。
5）厚膜孢子形成试验： 本试验亦是鉴定白色念珠菌的重要方法之一，
在玉米粉聚山梨酯－80琼脂培养基培养本菌， 镜检观察到厚膜孢子及假菌丝。
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主要用于新型隐球菌荚膜的染色。隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，细胞核 呈黑色。
6）荧光染色：
主要使用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、培养涂片及组
织切片。
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（二）培养检查
§ 本法可确定菌种，辅助直接检查的不足；
§ 通常用沙保氏培养基（SDA）（22～ 28℃）；
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第二部分 浅部真菌
浅部真菌主要为皮肤丝状菌（Dermatophytes），侵 犯皮肤、毛发、指甲等角化组织引起癣症，又称癣 菌(Ringworm)，分为三属，共37个种。
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(一)、生物学特征
皮肤癣菌的特征
属名
种 数
毛癣 菌属
21
小孢子 癣菌属
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四、防治原则
§ 真菌感染尚无特异预防，主要注意公共卫生和个人卫生； § 碘化物治疗孢子丝菌病、毛霉菌病有一定疗效； § 制霉素、灰黄霉素、克霉唑（三苯甲霉唑）等外用或内
服对癣症和白色念珠菌病等有较好疗效； § 近年报道5-氟胞嘧啶（5-FC）治疗单细胞真菌感染疗效
显著； § 二性霉素B可用于深部全身真菌感染。
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真菌的形态构成
菌 营养菌丝 丝 气生菌丝→ 生殖菌丝
有性 由同一菌体或不同菌体上的二个细胞 孢子 融合形成
分生 分生孢子梗的 大分生孢子
无 孢子 顶端或侧面
孢
小分生孢子
子
性
芽生孢子
孢 叶状 孢子
菌丝细胞直接 形成
关节孢子
子
厚膜孢子
子囊 菌丝末端形成膨大的囊状结构 孢子 即孢子囊，内含很多孢子
2. 条件致病性真菌：
是人体正常菌群的成员，当机体抵抗力下降时才 致病，如新型隐球菌、白色念珠菌、曲霉菌和毛霉菌 等。
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一、白色念珠菌
§白色念珠菌（canidia Albicans）又称白色假 丝酵母菌，广泛存在于自然界，也存在于正 常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在 正常机体中数量少，不引起疾病 。
§ 对热敏感，一般60℃1小时可杀死真菌菌丝和孢子。
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二、致病性与免疫性
（一）致病性
真菌引起的疾病大致包括
1. 真菌性感染：主要是外源性感染 § 浅部真菌侵犯皮肤、指甲及须发等组织，顽强繁殖，
发生机械刺激损害，同时产生酶及酸等代谢产物，引 起炎症反应和细胞病变。 § 深部真菌侵犯皮下，内脏及脑膜等处，引起慢性肉 芽肿及坏死。
2．条件致病性真菌感染： 主要是内源性感染（如白色念珠菌），亦有外源性
感染（如曲霉菌）。
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3．过敏性真菌病：
由真菌性过敏原（如孢子抗原）引起过敏症，如哮 喘，变态反 应性肺泡炎和癣菌疹等。
4．真菌毒素中毒症：
侵犯害肝、肾、脑、中枢神经系统及造血组织。如 黄曲霉毒素、某些镰刀菌素和黑葡萄穗素。
毛癣 菌
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（三）变异性
§ 真菌易发生变异，在人工培养基中多次传 代或孵育过久，可出现形态结构、菌落性 状、色素及毒力等改变。
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（四）抵抗力
§ 真菌对干燥、阳光、紫外线及一般化学消毒剂有一 定的耐受力，但充分暴露于阳光，紫外线及干燥情 况下大多数真菌可被杀死，且对2.5%碘酒，10%福 尔马林都敏感，一般可用福尔马林薰蒸被真菌感染 的房间。
（三）检验方法及鉴定 1．直接镜检：革兰氏染色镜检 2．培养特点：典型的酵母菌落。
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3．鉴定试验
1）芽管试验：取少许待检的白色念珠菌接种于
0.5ml人或兔血清中，混匀，直37℃水浴2-3h后，取出 一接种环菌液，涂片、镜检。有芽管产生者为白色念 珠菌，其他念珠菌不产生芽管。
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2．染色标本检查： 1）革兰氏染色：
各种真菌均为革兰氏阳性，为深蓝色。常用于酵母菌、白色念珠 菌、孢子丝菌、诺卡菌及组织胞浆菌等。
2）乳酸酚棉蓝染色
3）糖原染色：菌体均染成红色。用于标本直接涂片及组织
病理切片染色。
4）嗜银染色（GMS）：染成黑色。
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5）粘蛋白卡红染色法（MCS）：
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真菌孢子和细菌芽胞的区别
抵抗力 数目 作用
真菌孢子
细菌芽胞
不强，60-70短时间 杀死
强，煮沸短时间不死
一条菌丝可产生多个 一个细菌体只形成一
孢子
个芽孢
为繁殖方式之一
不是繁殖方式
形成位置 可在细胞内外形成 只在细菌细胞内形成
形状
形态、色泽多样
圆形或椭圆形
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第三部分 深部感染真菌
§ 深部真菌是侵犯皮下组织和内脏，引起 全身性感染的真菌。
§ 多数能引起慢性肉芽肿样炎症、溃疡及 坏死等病变
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深部感染真菌分两大类：
1. 致病性真菌：
此类真菌在正常人体内部不存在，一旦侵入机体， 即可致病，如组织胞浆菌、球孢子菌、芽生菌等，属 外源性，我国少见；
15
表皮癣 菌属
1
侵犯部位
形态特征
皮 指 毛 大分生孢 小分生孢
肤 甲发 子
子
菌丝
螺旋状、鹿角
+
+
+ 细 壁 少长 薄 见、 ， 或棒 无形、梨 较形多、见棒形，状球状、拍，结状单节、纯状破细、梳菌丝纺锤形Fra bibliotek壁 棒形，卵圆
+ - + 较厚， 较多见
形， 较少见
球拍状及破梳 状菌丝
梨形、壁较 + + － 薄，
绝大多数属于非致 病性真菌所具有 小孢子菌属、 表皮癣菌属 毛癣菌属 隐球菌、念珠菌
新型隐球菌
根霉菌
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真菌菌丝形态
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真 菌 孢 子 形 态
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毛癣菌属
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小孢子菌属
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表皮癣菌属
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3．荧光检查：本法主要用于头癣检查。病 发在滤过紫外灯照射下可发出不同色泽 的荧光，如黄癣菌病发呈暗绿色荧光， 白癣小孢子菌属的病发呈亮绿色荧光等。
（二）培养特性
§ 大多数真菌营养要求不高，常用沙保氏培养 基 （SDA）培养。
§ 浅部病原性真菌的最适温度为22～28℃，生 长缓慢，大多于1～4周出现典型菌落。
§ 深部病原性真菌培养在37℃中生长最好，生 长较快，经3-4天即长出菌落。
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真菌菌落类型
类型
定义
酵母型 菌落
为单细胞真菌的菌落，形 态与一般细菌菌落相似， 以出芽形式繁殖
特征 光滑、湿润，
颜色
一般为 乳白色
举例
新型 隐珠 菌
类酵母 型菌落
外观似酵母菌落，但可见 伸入培养基中的假菌丝， 由伸长的芽生孢子形成
光滑、湿润，
一般为 乳白色
白色 念珠 菌
丝状菌 落
为多细胞真菌的菌落，由 许多管状、分枝菌丝体组 成
绒毛状、絮状、 可产生 粉末状、颗粒 各种色 状、石膏状。 素。
真菌的微生物检验
§ 对人类致病的真菌分为： 浅部真菌：侵犯皮肤、毛发、指甲，为慢性，对
治疗有顽固性，但影响身体较小，
深部真菌：可侵犯全身内脏，严重的可引起死亡。
此外有些真菌寄生于粮食、饲料、食 品中，能产生毒素引起中毒性真菌病。
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一、生物学性状
（一）形态结构 § 真菌细胞结构比细菌复杂
毛发、指甲、鳞屑等）。
§ ②墨汁：主要用于检查有荚膜的真菌（如新型隐球菌等）
§。
§ ③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液
透明力较强，只限于不透明的标本。
§ ④生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替
氢氧化钾溶液。
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真菌的微生物检验
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2020/11/29
真菌的微生物检验
第一部分 病原性真菌概述
真菌（Fungus）
▪ 具有典型细胞结构（细胞核、细胞器、细胞壁） ▪ 细胞壁含几丁质和（或）纤维素 ▪ 无根、茎、叶，不含叶绿素 ▪ 以腐生或寄生方式摄取养料 ▪ 能进行有性生殖和（或）无性繁殖
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