免疫胶体金试纸条的开发及应用
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关键点： （1）均质器使用后须清洗干净，防止交叉污染。 （2）均质样本越细，提取效果越好；
（2）提取
----称取1.0±0.05g均质物，加入1ml去离子水，加入 100μl提取剂1，加入100μl提取剂2，再加入4ml乙腈，涡 动2min，再加入4g无水硫酸钠，立即拧紧盖子，倒置轻 轻敲打，上下振荡1min，3000g以上，室温离心5min；
免疫胶体金试纸条的 开发及应用
目录：
1. 免疫胶体金试纸条原理及开发流程 2. 免疫胶体金试纸条的应用 3. 胶体金读数仪的发展及应用
一、免疫胶体金试纸条原理及开发流程
• 简单/现场/快速
特点
1.打开包装取出试纸条
2.滴加样品
3.结果判读（3-10min）
1、试纸条结构图
样品垫
胶体金垫
控制线（C线）
二、免疫胶体金试纸条的应用
应用领域 • 人医方面
如早孕检测，急性心肌梗塞的诊断……
• 非法添加物检测
如尿液中“瘦肉精”检测……
• 抗生素残留检测：
如牛奶中β-内酰胺类药物检测……
• 毒素类检测
如饲料中黄曲霉毒素检测……
• 毒品检测
如吗啡、病毒等检测
1. 以尿液中检测莱克多巴胺残留为例
1) 尿液的收集
----取1ml上清液至10ml新聚苯乙烯离心管中，加入100μl 孔雀石绿氧化剂（现加现配）。涡动5s，于50~60℃水浴 氮气或空气流下吹干； ----加入0.5ml样品稀释液涡动溶解2min，取70l用于分析。
2) 检测步骤
（1）从原包装中取出试剂桶，打开后取出所需数目的微孔试剂和 试纸条，并做好标记。 （2）用微量移液器吸取70l待检水产样本溶液于微孔中，缓慢抽 吸且充分与微孔中试剂混匀。 （3）室温孵育5min后，将标记好的试纸条插入微孔中——印有 “MAX”线端朝下，使之充分浸入溶液中。 （4）室温孵育5-10min后，取出试纸条并根据示意图判定结果， 其他时间判定无效。
吸水滤纸
PVC底板
层析方向
测试线 （T线）
NC膜（硝酸纤维素膜）
2、反应原理--竞争法
莱克异性抗体
胶体金检测试纸条实物图
样本检测过程示意图
层析方向
C T S
样品垫 金标垫
T线（测试线）
C线（质控线）
NC膜
吸水纸
抗原抗体生物原料
3. 产品开发流程
• C\T线溶液前处理:
1.过滤,0.2um孔径滤膜 2.离心10000rpm,10min
• 喷点工艺与接触划点工艺
• 胶体金垫
材料选择；糖的作用；缓冲溶液的作用
样品垫
• 材料选择 • 各成分的作用
1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSA\PVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100
3) 取出试纸条并编号
关键点： （1）试纸条需恢复到室温； （1）手不能接触试纸条观察区的白色膜面； （2）试纸条取出后在1小时内使用。
4) 用一次性吸管吸取尿液
关键点：一次性吸管不能重复使用，防止交叉污染。
5) 点样
吸取尿液滴加到加样孔中，一般2~3滴， 反应5~10分钟判定结果。
关键点： （1）滴加尿液过多或过少，均会影响显色情况。 （2）使用前如观察区内滴入液体，此条作废。
标记技术
NC膜与划线
胶体金垫与溶液喷点
样品垫
吸水纸
粘性底板
干燥方法
溶液体系分析
装配\切条\包装
抗原抗体生物原料
抗体 Antibody
• 来源差异: 鼠抗,兔抗和羊抗 • 种类差异: 单抗,多抗 • 腹水的处理: 饱和硫酸铵沉淀法 • 特异性:亲和层析柱 • 溶解液:不含盐,例如PB
抗原 Antigen
偶联抗原物质: BSA, OVA等 待测物: 合成抗原
标记技术 Conjugate • 容器硅化处理 • 金颗粒制备 (负电)
• 颜色与颗粒的关系
最佳标记颗粒大小40nm.
• 蛋白质最适用量测定:盐析法
NC膜 • NC膜的性能
• NC膜的选择
流速对灵敏度的影响 底衬的作用 不同膜厂家的产品差异
喷点溶液 Dispensing
3) 结果判读
阴性（-）：C线显色，T线显色强于C线，表 示水产样本中孔雀石绿浓度低于检测限。 阳性（+）：C线显色，T线明显弱于C线或T 不显色，表示水产样本中孔雀石绿浓度等于 或高于检测限。 无 效：未出现C线，表明不正确的操作过 程或试纸条已变质失效。
读卡仪配套：C线读值大于等于T线读值判阴性，C线读值小于T线 读值判阳性。
6) 结果判定
阴性：C 线显色，T线显色，无 论颜色深浅，均表示尿液样本中 莱克多巴胺浓度低于检测限。
阳性：C 线显色，T线不显色， 表示尿液样本中莱克多巴胺浓度 等于或高于检测限。
无 效：未出现C线，表明不正确 的操作过程或试纸卡已失效。
2. 以鱼肉中检测孔雀石绿残留为例 1) 样本前处理
（1）用均质器均质组织样本
收集活体猪尿液 工具须一次性使用，防止交叉污染。 关键点： （1）尿液需恢复到室温才能进行检测； （2）如尿液较浑浊，需3000rpm以上、室温离心5min，取上清用于检测； （3）尿液在4℃可保存48小时，如需长期保存，可置于-20℃冷冻保存。
2) 尿液编号
对收集好的尿液进行编号，并做好实验记录。
吸水纸
• 吸水效率 • 进口与国产纸的差异
干燥方法 Dry
• 干燥方法的比较
冷冻干燥法;烘箱;烘房
• 温湿度的控制
1.温度对蛋白的影响 2.湿度的控制办法
溶液体系分析
• 各环节缓冲溶液的选择与统一 • 盐的作用 • 表面活性剂的作用 • 糖的作用 • 大分子蛋白的作用 • 其他作用物质
装配\切条\包装Lamination • 装配 • 切条 • 包装
（2）提取
----称取1.0±0.05g均质物，加入1ml去离子水，加入 100μl提取剂1，加入100μl提取剂2，再加入4ml乙腈，涡 动2min，再加入4g无水硫酸钠，立即拧紧盖子，倒置轻 轻敲打，上下振荡1min，3000g以上，室温离心5min；
免疫胶体金试纸条的 开发及应用
目录：
1. 免疫胶体金试纸条原理及开发流程 2. 免疫胶体金试纸条的应用 3. 胶体金读数仪的发展及应用
一、免疫胶体金试纸条原理及开发流程
• 简单/现场/快速
特点
1.打开包装取出试纸条
2.滴加样品
3.结果判读（3-10min）
1、试纸条结构图
样品垫
胶体金垫
控制线（C线）
二、免疫胶体金试纸条的应用
应用领域 • 人医方面
如早孕检测，急性心肌梗塞的诊断……
• 非法添加物检测
如尿液中“瘦肉精”检测……
• 抗生素残留检测：
如牛奶中β-内酰胺类药物检测……
• 毒素类检测
如饲料中黄曲霉毒素检测……
• 毒品检测
如吗啡、病毒等检测
1. 以尿液中检测莱克多巴胺残留为例
1) 尿液的收集
----取1ml上清液至10ml新聚苯乙烯离心管中，加入100μl 孔雀石绿氧化剂（现加现配）。涡动5s，于50~60℃水浴 氮气或空气流下吹干； ----加入0.5ml样品稀释液涡动溶解2min，取70l用于分析。
2) 检测步骤
（1）从原包装中取出试剂桶，打开后取出所需数目的微孔试剂和 试纸条，并做好标记。 （2）用微量移液器吸取70l待检水产样本溶液于微孔中，缓慢抽 吸且充分与微孔中试剂混匀。 （3）室温孵育5min后，将标记好的试纸条插入微孔中——印有 “MAX”线端朝下，使之充分浸入溶液中。 （4）室温孵育5-10min后，取出试纸条并根据示意图判定结果， 其他时间判定无效。
吸水滤纸
PVC底板
层析方向
测试线 （T线）
NC膜（硝酸纤维素膜）
2、反应原理--竞争法
莱克异性抗体
胶体金检测试纸条实物图
样本检测过程示意图
层析方向
C T S
样品垫 金标垫
T线（测试线）
C线（质控线）
NC膜
吸水纸
抗原抗体生物原料
3. 产品开发流程
• C\T线溶液前处理:
1.过滤,0.2um孔径滤膜 2.离心10000rpm,10min
• 喷点工艺与接触划点工艺
• 胶体金垫
材料选择；糖的作用；缓冲溶液的作用
样品垫
• 材料选择 • 各成分的作用
1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSA\PVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100
3) 取出试纸条并编号
关键点： （1）试纸条需恢复到室温； （1）手不能接触试纸条观察区的白色膜面； （2）试纸条取出后在1小时内使用。
4) 用一次性吸管吸取尿液
关键点：一次性吸管不能重复使用，防止交叉污染。
5) 点样
吸取尿液滴加到加样孔中，一般2~3滴， 反应5~10分钟判定结果。
关键点： （1）滴加尿液过多或过少，均会影响显色情况。 （2）使用前如观察区内滴入液体，此条作废。
标记技术
NC膜与划线
胶体金垫与溶液喷点
样品垫
吸水纸
粘性底板
干燥方法
溶液体系分析
装配\切条\包装
抗原抗体生物原料
抗体 Antibody
• 来源差异: 鼠抗,兔抗和羊抗 • 种类差异: 单抗,多抗 • 腹水的处理: 饱和硫酸铵沉淀法 • 特异性:亲和层析柱 • 溶解液:不含盐,例如PB
抗原 Antigen
偶联抗原物质: BSA, OVA等 待测物: 合成抗原
标记技术 Conjugate • 容器硅化处理 • 金颗粒制备 (负电)
• 颜色与颗粒的关系
最佳标记颗粒大小40nm.
• 蛋白质最适用量测定:盐析法
NC膜 • NC膜的性能
• NC膜的选择
流速对灵敏度的影响 底衬的作用 不同膜厂家的产品差异
喷点溶液 Dispensing
3) 结果判读
阴性（-）：C线显色，T线显色强于C线，表 示水产样本中孔雀石绿浓度低于检测限。 阳性（+）：C线显色，T线明显弱于C线或T 不显色，表示水产样本中孔雀石绿浓度等于 或高于检测限。 无 效：未出现C线，表明不正确的操作过 程或试纸条已变质失效。
读卡仪配套：C线读值大于等于T线读值判阴性，C线读值小于T线 读值判阳性。
6) 结果判定
阴性：C 线显色，T线显色，无 论颜色深浅，均表示尿液样本中 莱克多巴胺浓度低于检测限。
阳性：C 线显色，T线不显色， 表示尿液样本中莱克多巴胺浓度 等于或高于检测限。
无 效：未出现C线，表明不正确 的操作过程或试纸卡已失效。
2. 以鱼肉中检测孔雀石绿残留为例 1) 样本前处理
（1）用均质器均质组织样本
收集活体猪尿液 工具须一次性使用，防止交叉污染。 关键点： （1）尿液需恢复到室温才能进行检测； （2）如尿液较浑浊，需3000rpm以上、室温离心5min，取上清用于检测； （3）尿液在4℃可保存48小时，如需长期保存，可置于-20℃冷冻保存。
2) 尿液编号
对收集好的尿液进行编号，并做好实验记录。
吸水纸
• 吸水效率 • 进口与国产纸的差异
干燥方法 Dry
• 干燥方法的比较
冷冻干燥法;烘箱;烘房
• 温湿度的控制
1.温度对蛋白的影响 2.湿度的控制办法
溶液体系分析
• 各环节缓冲溶液的选择与统一 • 盐的作用 • 表面活性剂的作用 • 糖的作用 • 大分子蛋白的作用 • 其他作用物质
装配\切条\包装Lamination • 装配 • 切条 • 包装