HPLC法测定化妆品中苯扎氯铵含量的不确定度

HPLC法测定化妆品中苯扎氯铵含量的不确定度
苯扎氯铵（Benzalkonium chloride），此化合物是重要的阳离子季铵盐表面活性剂，具有良好的抗静电，柔顺，防腐作用，也可用于杀菌，印染助剂，织物洗涤等行业。

本文将根据最新化妆品相关标准目录（截至2018年5月发布）测定方法中标准妆品中苯扎氯铵含量的测定方法-高效液相色谱法，参考新版JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》，并结合《化妆品安全技术规范》（2015版）中规定方法讨论苯扎氯铵含量的不确定度。

标签：苯扎氯铵；高效液相色谱法；不确定度；含量测定
苯扎氯铵（Benzalkonium chloride），此化合物是各种偶数烷基链烷基芐氯化物的非匀相混合物。

《化妆品安全技术规范》（2015版）中规定了高效液相色谱法测定化妆品中苯扎氯铵含量的方法，所指苯扎氯铵为十二烷基二甲基苄基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵与十六烷基二甲基苄基氯化铵之和。

而不确定度的含义是指由于测量误差的存在，对被测量值的不能肯定的程度。

所以，附有不确定度的测量结果才是真实有意义的。

1 实验方法
1.1 色谱条件
Agilent Zorbax CN柱（250mm×4.6mm×5μm）；流动相为乙腈和0.1mol·L-1的醋酸铵缓冲溶液（冰醋酸调pH=5.0）（7：3）的混合溶液；流速为1.0mL·min-1；检测波长为260nm；柱温25℃；进样量20μL。

1.2 样品溶液的配制
精密称取试样0.500g（精确至0.001g）于25mL具塞刻度管中，加入20mL 乙腈（色谱纯），涡旋振荡1min，混匀后，400W超声提取30min，取出后冷却至室温，用乙腈定容，上下振荡混匀，后经0.45μm滤膜过滤，所得滤液作为待测液，备用。

1.3 标准品溶液的配制
分别称取十二烷基二甲基苄基氯化铵（纯度大于98%）、十四烷基二甲基苄基氯化铵（纯度大于97%）和十六烷基二甲基苄基氯化铵（纯度大于98%）各0.050g（精确到0.001g），置于50mL棕色容量瓶中，用乙腈（色谱纯）溶解并定容至刻度，摇匀，配成浓度为1.0g/L的标准溶液。

取苯扎氯铵标准溶液，加入对应量的乙腈（色谱纯），分别配制浓度为5.0μg/mL、10.0μg/mL、30.0μg/mL、50.0μg/mL、80.0μg/mL、100.0μg/mL的系列标准溶液。

1.4 定性定量分析
1.4.1 外标法
采用标准物质的保留时间和峰扫描光谱纯度对照两种方式对样品峰进行定性，以外标法定量。

1.4.2 公式法
在该色谱条件下，取标准溶液按照不同浓度分别进样，进行色谱分析，绘制峰面积（A）-系列溶液浓度（C）标准曲线。

并按以下公式计算此样品中苯扎氯铵的浓度。

式中：
w-样品中苯扎氯铵的质量分数；
D-样品稀释倍数；
ρc12-从标准曲线得到十二烷基二甲基苄基氯化铵的浓度，μg/mL；
ρc14-从标准曲线得到十四烷基二甲基苄基氯化铵的浓度，μg/mL；
ρc16-从标准曲线得到十六烷基二甲基苄基氯化铵的浓度，μg/mL；
V-样品定容体积，mL；
m-样品取样量，g。

1.5 实验样品分析
在进样20min内，3种苯扎氯铵同系物可达到完全的基线分离，基质中其他物质的干扰峰也不是很明显。

2 含量的测定方法
苯扎氯铵作为一种常用的防腐剂，在《中国药典》2010年版（ChP2010）、《英国药典》2011年版（BP2011）、《欧洲药典》7.0版（EP7.0）、《美国药典》34版（USP34）和《日本药局方》15版（JP15）中均有收载。

美国药典为使产品应用时的功效与不良反应能保持相对稳定，采用HPLC法测定来控制苯扎氯铵中烷基组成的相对比例。

而中国药典2015年版二部中对该项目未设立明确标准，不能严格控制产品的内在成分与功效。

此外，2015年版《中国药典》（二部）未收载同系物组成比例检查以及平均相对分子量计算两项。

3 不确定度的来源分析
苯扎氯铵测量不确定度的来源主要为分度吸管移液和标准工作曲线拟合，其次是标准物质和样品的称量、定容以及样品均匀性和处理过程一致性。

以下将分析主要的不确定度来源。

（下转第162页）
（上接第160页）
3.1 由于标准物质产生的不确定度
标准物质的质量纯度会引入一定的相對标准不确定度，当我们使用精确度为0.001g的电子天平称量标准品时，天平的分辨力、示差、重复性、最大读数等都会影响含量测定的不确定度，移液管、容量瓶量取溶液时也会对测定结果的不确定度产生影响，如估读误差、温度对玻璃仪器的影响、容量允差等因素。

针对这些影响，我们可以依据JJG196-2006《常用玻璃量器》中的规定，遵循均匀分布的原则估计标准不确定度。

3.2 由于被测样品产生的不确定度
天平仪器的误差影响同上，可以计算相对标准合成不确定度。

对应玻璃仪器也可采用三角分布进行不确定度的计算。

3.3 相关实验操作引起的不确定度
采用同一样品进行重复性试验，实验结果见表2。

可根据标准差计算被测样品平行试验重复性引入的相对标准不确定度。

3.4 高效液相色谱仪产生的不确定度
可查阅仪器附带校准证书，按照均匀分布进行计算。

4 结论
分析不确定度时，除了定义的不确定以外，需要从检测仪器、检测环境、测定人员以及测定所用方法等方面，全面的考虑，特别注意到对检测结果影响较大的不确定来源的不遗漏和不重复。

因此，只有建立健全方便、讯速、敏感性高、准确度高的化妆品中苯扎氯铵含量的检测方法才能符合越来越严格的残留限量要求，更好地保证化妆品的卫生和安全，提高国产化妆品的竞争力。

参考文献：
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李伟亮（1989- ），男，汉族，籍贯：江苏苏州，学历：研究生，职称：中级工程师，研究方向：分析化学。