【最新】血浆分离步骤-推荐word版 (14页)

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血浆分离步骤
篇一：血浆分离方法
血浆分离方法
一·采血管采血
1. 取一支采血管，在采血管壁上标注被采血者姓名（不可松动采血管帽）。

2. 肘静脉局部消毒。

3. 取一支采血针，拔下静脉针护套，将针刺入静脉，可见有血流入软管中。

4. 将另一侧采血针连同软护套一起刺入采血管中，血液会自动流入采血管中。

5. 等血液不再流入采血管后，拔出采血管（若需多支采血管，则可换一支采血管，将采血针刺入即可）
6. 拔出静脉针，并将采血管垂直放置，检查采血管是否柱注姓名。

二·血浆分离
1. 采血管垂直放置，让其自然沉淀2小时。

2. 自然沉淀2小时后，将其对称放入离心机的采血管护套中(若单一支采血管，则用一支注水的采血管替代平衡)
3. 将离心机速度调至3000或3500转，离心10分钟。

4. 10分钟后，将离心机速度调至0，等离心机停止后，取出采血管（不可颠倒）。

5. 佩带一次性手套，口罩及帽套。

6. 取一支样品管，旋下管帽，并将其放置在架架上。

7. 左手持采血管，右手拇指，食指，中指抓紧采血管帽，旋转上拔，取下管帽，将其放在采血管架上。

8. 取一支巴氏吸管（手不可碰管长臂），将采血管中血浆(约1.8L，分两次)
转移至样品管中。

9. 旋紧样品管盖，在样品管壁上做好标记、将其放入冰箱中冷冻。

(运输过程中，可将其放在一小瓶中，防止压坏)
注意事项：
防止唾液，汗液，皮屑，及头发等杂质进入血浆中。

静脉采血方法：
采血管开盖方法：/technic.asp
篇二：血液分离技术
第十八章血细胞分离技术
（Separation technique of the blood cell）
一、原理
在体外进行细胞免疫检测时，首先必须进行淋巴细胞的分离。

分离淋巴细胞的
方法很多，但不管采用哪种方法，均要求分离的淋巴细胞纯度高、产量多，而
且不丧失活性，同时也要求分离技术简单、操作方便。

外周血液中红细胞和白细胞的比例在几百甚至上千比一，两类细胞的大小和密
度不同，其沉降速度也就不同。

红细胞的自然沉降率较快，加入高分子量的聚
合物，如明胶、右旋糖酐等还可以加速其凝聚。

利用自然沉降法、密度梯度离
心法或二者结合，可以将淋巴细胞从血液中分离出来。

这种分离出的淋巴细胞
一般包括单核细胞。

除去单核细胞，可以利用单核细胞的吸附功能，如铁颗粒、玻璃面或尼龙网等，除去（或分离）单核细胞，从而提纯淋巴细胞。

二、采血
（一）材料与试剂
1．抗凝剂
（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻止血液凝固。

常用
的肝素溶液浓度为1 000U/ml，市售肝素多为100U~126U／mg。

（2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是一种螯合剂。

用生理盐水配制成4％的溶液备用。

· 1 ·
（3）阿氏液（Alsever液），配方如下：
枸橼酸钠（Na3C6H5O7·5H2O）0.80g
枸橼酸 0.0325g
葡萄糖 2.05g
氯化钠 0.42g
H2O 加至100.00ml
混匀溶解后，114.3℃高压蒸汽灭菌10min备用。

阿氏液中既含有枸橼酸钠抗凝剂，又含有细胞生存(来自:WwW. : 血浆分离步骤 )的营养，所以它既可做抗凝剂，又可做血细胞的保存液。

2．针头根据不同动物和采血部位，采用不同型号的针头，用前必须灭菌或消毒。

3．采血容器注射器或三角瓶等。

4．采血动物。

（二）操作方法
1．采血法各种动物采血方法不一。

马、牛、羊等大动物一般从颈静脉采血，猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血，家禽由翼下静脉或心脏采血，兔由心脏或耳静脉采血，犬由颈静脉或四肢静脉采血，豚鼠由心脏采血，小白鼠则可断尾或剪断腋下血管或剪断眼球采血。

2．抗凝采集血液最关键的问题是抗凝，采用什么方法进行抗凝，则根据实验的要求和条件而定。

最常用的方法如下：
（1）肝素抗凝：采血时，使每ml血液含15U~20U肝素即可。

计算采集的血液量，按1 000U/ml的量加入肝素，直接放入采血容器中，采血时，边采血边轻轻摇动，使抗凝剂和血液混匀。

对于采少量的血液或小动物采血，可直接用注射器抽取一定量的肝素液，再采血直接抗凝。

（2）EDTA抗凝：采血前，用灭菌生理盐水将EDTA配制成4％溶液，然后按预
采血液的量，以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液体量于采血容器内。

采血，并不断摇动采血容器，使之混匀。

（3）玻璃珠法：预先将适量的玻璃珠（根据采血量多少而定）清洗后，装入采血容器中，灭菌后备用。

采血过程中，边采边摇采血瓶，以使小玻璃珠在血液
中滚动，以机械地除去纤维蛋白，使血液不能凝固。

本法虽较麻烦，但对淋巴
细胞的活性影响最小，且可减少血小板的混杂。

（4）阿氏液采血：以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液，边采边轻轻摇动
采血瓶，使之混匀。

用阿氏液采血，除了抗凝外，多用于红细胞的保存。

一般
在4℃条件下，阿氏液中保存的红细胞2周其活性和特性不变。

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三、红细胞的分离技术
（一）材料与试剂
1．肝素等抗凝剂
2．3％明胶液取明胶3g，溶于0.9％灭菌盐水100ml中，114.3℃灭菌10min，冷却后4℃冰箱保存。

临用时，37℃预热10min。

3．阿氏液
（二）操作方法
1．采血抗凝，即为红细胞。

由于红细胞与白细胞的比例相差悬殊，一般白细胞混杂在其中，忽略不计。

2．根据红细胞的用途，可做进一步的处理。

如计算红细胞，可直接稀释计数。

如需做补体结合反应，或其它溶红细胞反应，则需将红细胞进行充分的清洗，
以除去附着在红细胞膜表面的血浆。

一般用等渗的稀释液连续清洗，2
000r/min离心10min，重复3~4次。

3．如需储藏备用，则以阿氏液做抗凝剂采血，混匀后置4℃冰箱保存，可保存
2周，其活性尚可。

四、淋巴细胞的分离技术
（一）材料与试剂
1．淋巴细胞分层液有两种：。