专题5课题3 血红蛋白的提取和分离-高二生物同步课件讲解(人教版选修1 )
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3 ． 凝胶 色 谱柱 的 装填 ：洗在脱装次填序凝胶 柱 时 ， 不 能有 ______ 存
在。因其能搅乱洗脱液中蛋红白色质区的带__均__匀__一__，致降地低移分动离效果。
4．蛋白质的分离：如果_______，说明色谱柱制作成功。
凝胶色谱柱的填充：
注意：
1、液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在 柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。
2、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。
对分离效果的判断 ①若血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整地随洗脱液 缓慢流出，则装填成功，分离操作正确。 ②若血红蛋白的红色区带歪曲、散乱、变宽，则说明分 离效果不好，装填不成功。
缓冲溶液
作用：在一定范围内，缓冲溶液能抵制外界的酸和碱对溶液 PH的影响，维持PH基本不变，生物体内进行的各种 生物化学反应都是在一定的PH下进行的，为了能够在 实验室条件下准确模拟生物体内过程，就必须保持体 外溶液PH与体内一致。
配制：缓冲溶液通常由1-2种缓冲剂溶于水配制而成的，调 节缓冲剂的使用比例就可以制得不同PH使用的缓冲液。
实验操作 血红蛋白：血红蛋白由四条肽链组成，包括两条ɑ-肽链
和两条β-肽链，每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，此 基团可携带一份子氧或一份子二氧化碳，血红蛋白因含 有血红素呈红色。 蛋白质的提取和分离一般分为四步:
样品处理-----------------粗分离---------纯化-----------纯度鉴定
操作提示中注意事项
1 ． 红 细 胞 的 _洗_ _ _涤_ _次_ 、数_ _ _离_ _心_ _ _速_ _度_ 、 _ _ _离_ _ _心_ _时_ 十间分 重 要 。 洗 涤___次_2_．_数过_色_过会长谱少使柱_，填__无_料白__法的等细处除一胞理同去：沉__商淀沸__品，_水_凝达；浴血胶不离浆加使到心蛋热分用白速离前效度需果直__。接_洗__放_脱_在过_液和_高__时__间__ 中膨胀，可以将加入其中的湿凝胶用____________气，泡加速膨胀。
电泳 概念：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程
原理：许多重要的大分子如多肽、核酸等具有可解离的基团，在一
定PH下，这些基团会带正电或负电。在电场作用下，这些 带电分子会向着与其所带电极相反的电极移动。 电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质差异以及本身分 子大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从 而实现分离。
课题3 血红蛋白的提取和分离
凝胶色谱法
概念：凝胶色谱法称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分
离蛋白质的方法
原理：大多数凝胶是由多糖类化合物构成的小球体，内部有许多贯
穿的通道，当相对分子质量不同的蛋白质通过时，相对分子 质量小的蛋白质容易进入凝胶内部通道，路程较长，移动速 度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部通 道，只能在凝胶外部移动，路程较短，速度较快。因此得以 分离。
（3）分离血红蛋白溶液(经过离心使血红蛋白与其他杂
质分离）
（5）凝胶色谱柱的制作
（4）透析（除去样品中（相对6）分凝子胶质量色较谱小柱的的杂装质填）
（1）红细胞的洗涤（去除杂蛋白如（血7浆）蛋样白品）的加入和洗脱
（2）血红蛋白的释放
（除去相对分子质量较大的杂质）
（使红细胞破裂，释放血红蛋白，以进行提取和分离）
ห้องสมุดไป่ตู้
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
目的分析： ①蒸馏水的作用是__使__红___细__胞__大__量__吸___水__胀__裂________。 ②加入甲苯的作用是____溶__解__红__细__胞___的__细__胞__膜_______。 ③充分搅拌的目的是__加__速__红__细___胞__的__破__裂___________。
在。因其能搅乱洗脱液中蛋红白色质区的带__均__匀__一__，致降地低移分动离效果。
4．蛋白质的分离：如果_______，说明色谱柱制作成功。
凝胶色谱柱的填充：
注意：
1、液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在 柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。
2、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。
对分离效果的判断 ①若血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整地随洗脱液 缓慢流出，则装填成功，分离操作正确。 ②若血红蛋白的红色区带歪曲、散乱、变宽，则说明分 离效果不好，装填不成功。
缓冲溶液
作用：在一定范围内，缓冲溶液能抵制外界的酸和碱对溶液 PH的影响，维持PH基本不变，生物体内进行的各种 生物化学反应都是在一定的PH下进行的，为了能够在 实验室条件下准确模拟生物体内过程，就必须保持体 外溶液PH与体内一致。
配制：缓冲溶液通常由1-2种缓冲剂溶于水配制而成的，调 节缓冲剂的使用比例就可以制得不同PH使用的缓冲液。
实验操作 血红蛋白：血红蛋白由四条肽链组成，包括两条ɑ-肽链
和两条β-肽链，每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，此 基团可携带一份子氧或一份子二氧化碳，血红蛋白因含 有血红素呈红色。 蛋白质的提取和分离一般分为四步:
样品处理-----------------粗分离---------纯化-----------纯度鉴定
操作提示中注意事项
1 ． 红 细 胞 的 _洗_ _ _涤_ _次_ 、数_ _ _离_ _心_ _ _速_ _度_ 、 _ _ _离_ _ _心_ _时_ 十间分 重 要 。 洗 涤___次_2_．_数过_色_过会长谱少使柱_，填__无_料白__法的等细处除一胞理同去：沉__商淀沸__品，_水_凝达；浴血胶不离浆加使到心蛋热分用白速离前效度需果直__。接_洗__放_脱_在过_液和_高__时__间__ 中膨胀，可以将加入其中的湿凝胶用____________气，泡加速膨胀。
电泳 概念：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程
原理：许多重要的大分子如多肽、核酸等具有可解离的基团，在一
定PH下，这些基团会带正电或负电。在电场作用下，这些 带电分子会向着与其所带电极相反的电极移动。 电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质差异以及本身分 子大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从 而实现分离。
课题3 血红蛋白的提取和分离
凝胶色谱法
概念：凝胶色谱法称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分
离蛋白质的方法
原理：大多数凝胶是由多糖类化合物构成的小球体，内部有许多贯
穿的通道，当相对分子质量不同的蛋白质通过时，相对分子 质量小的蛋白质容易进入凝胶内部通道，路程较长，移动速 度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部通 道，只能在凝胶外部移动，路程较短，速度较快。因此得以 分离。
（3）分离血红蛋白溶液(经过离心使血红蛋白与其他杂
质分离）
（5）凝胶色谱柱的制作
（4）透析（除去样品中（相对6）分凝子胶质量色较谱小柱的的杂装质填）
（1）红细胞的洗涤（去除杂蛋白如（血7浆）蛋样白品）的加入和洗脱
（2）血红蛋白的释放
（除去相对分子质量较大的杂质）
（使红细胞破裂，释放血红蛋白，以进行提取和分离）
ห้องสมุดไป่ตู้
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
目的分析： ①蒸馏水的作用是__使__红___细__胞__大__量__吸___水__胀__裂________。 ②加入甲苯的作用是____溶__解__红__细__胞___的__细__胞__膜_______。 ③充分搅拌的目的是__加__速__红__细___胞__的__破__裂___________。