中药显微鉴定-上3

1.视场光阑的调节
视场光阑位于镜座之中,其作用： 视场光阑位于镜座之中,其作用： 控制照明光束的大小， (1) 控制照明光束的大小，根据物 镜的倍率给予不同直径的光束 面积, 面积 , 使所观察的视域能受到均 匀的照明。 匀的照明。 (2) 控制杂散光在成像光路系统中 的影响， 的影响 ， 特别是免除杂散光对 照相系统的干扰 ， 在显微摄影 时起着增减影象反差的作用。 时起着增减影象反差的作用。
显微照相机 自动曝光机构 光程转换拉杆

显微摄影步骤
1.安装显微摄影装置 1.安装显微摄影装置 将相机，显微镜和照明设备连一起，并能在观察镜 中看到所要拍摄的标本。 2.调整好显微镜 聚光器和光源灯的调中， 2.调整好显微镜 聚光器和光源灯的调中，孔径光阑和视场光阑的调节。 3.底片选择 彩色底片、黑白底片，正片或负片， 3.底片选择 彩色底片、黑白底片，正片或负片，底片感光度的选择 4.曝光的确定 经验法，试摄法，测光表法。 4.曝光的确定 经验法，试摄法，测光表法。 5.取景对焦和拍摄 5.取景对焦和拍摄 屈光度的调节，取景，聚焦拍摄 6.冲洗 冲洗、 6.冲洗、放大 冲洗底片，洗印放大照片
孔径光阑 调节杆 聚光镜主体 前端透镜 转动杆 前端透镜
通常聚光镜的 NA=0.32 前端透镜的 NA=0.63～1.4 ～ 显微镜物镜 4X NA=0.10 10X NA=0.25 40X NA=0.65 100X NA=1.25
不应该用聚光 镜的孔径光阑 来调节视野中 的亮度！ 的亮度！
更不应该用调 节聚光镜位置 高低的方法来 调节视野中的 亮度！ 亮度！
2、显微描绘
在显微鉴定工作中，显微特征图是重要的表达形式。 在显微鉴定工作中，显微特征图是重要的表达形式。 绘制显微特征图， 徒手或利用显微描绘器描绘显微镜下所见 绘制显微特征图，可徒手或利用显微描绘器描绘显微镜下所见 或利用显微描绘器 物体的图像，现在随着计算机多媒体技术的发展， 物体的图像，现在随着计算机多媒体技术的发展，直接将显微镜中 的图像通过计算机采录，使显微图像更真实、生动。 的图像通过计算机采录，使显微图像更真实、生动。 生药绘图的特点与要求 特点：显微绘图着重从研究问题的事实出发， 特点：显微绘图着重从研究问题的事实出发，强调真实性与科学 着重从研究问题的事实出发 在此基础上适当的注意艺术性的表现手法。 性，在此基础上适当的注意艺术性的表现手法。 要求：高度的科学性，如实反映物体的特征，绘图要精确， 要求：高度的科学性，如实反映物体的特征，绘图要精确，比例 要匀称、布局要协调，主次要分明；描绘时注意线条均匀清晰， 要匀称、布局要协调，主次要分明；描绘时注意线条均匀清晰，倍 数要正确，注字要工整，应从图的右方用平行线引出， 数要正确，注字要工整，应从图的右方用平行线引出，在线的尽头 注明图各部分的名称，全图的名称应写在图的正下方。 注明图各部分的名称，全图的名称应写在图的正下方。
色阶(levels) 在数字图像中，颜色的总数称“色域” ， 在数字图像中，颜色的总数称“色域” 色阶 色域中每一个具体值叫色阶。 色域中每一个具体值叫色阶。红(R)、绿(G)、蓝(B)３ 、 、 ３ 中基色从 255分成256个等级即色阶， 分成256 中基色从0～255分成256个等级即色阶，色阶其实就是 色彩的层次感，也可以理解为颜色的浓淡， 色彩的层次感，也可以理解为颜色的浓淡，对于数字图 像的质量评价，色阶的丰富与分辨率同样重要。 像的质量评价，色阶的丰富与分辨率同样重要。 Bit(位 色彩位数又称色彩深度， 又称色彩深度 Bit(位) 色彩位数又称色彩深度，数码摄像头的色彩 深度指标反映了摄像头能正确记录色调有多少， 深度指标反映了摄像头能正确记录色调有多少，色彩位 数的值越高， 数的值越高，就越可能更真实地还原图像亮部及暗部的 细节。目前数码摄像头的色彩位数都达到了3×8＝24位 细节。目前数码摄像头的色彩位数都达到了3 24位 种颜色) (256×256× 共计1.67 亿种颜色)，即可以生成真彩 (256×256×256 共计 色的图像。总之色彩位数是反映数码相机的色彩分辨能 色的图像。总之色彩位数是反映数码相机的色彩分辨能 色彩深度值越高 就越能真实地还原色彩。 深度值越高， 力，色彩深度值越高，就越能真实地还原色彩。
数码显微摄影的优势： 数码显微摄影的优势：
显微图像分辨率高，拍摄的显微图像清晰。 显微图像分辨率高，拍摄的显微图像清晰。(OLYMPUSDP50 显微照相系统 580万像素；DP70达1250万像素) 万像素； 万像素 万像素 达 万像 显微镜下的图像实现同步显示，快速聚焦、快速拍摄。 显微镜下的图像实现同步显示，快速聚焦、快速拍摄。 显微图像色彩真实，原物原色显示在屏幕上。 显微图像色彩真实，原物原色显示在屏幕上。 显微图像可即时以数字形式保存、编辑。 显微图像可即时以数字形式保存、编辑。 获得的显微图像还可利用图像分析软件进行定性、 获得的显微图像还可利用图像分析软件进行定性、定量 分析。 分析。
视场光阑位于镜座 前端的主光轴上
在视野中可见视场 光阑经聚光镜所形 成的多边形状
2.聚光镜系统(孔径光阑)的调节 聚光镜系统(孔径光阑)
聚光镜系统:包括聚光镜主体、前端透镜及孔径光阑。 聚光镜系统:包括聚光镜主体、前端透镜及孔径光阑。 孔径光阑
聚光镜的重要参数之一是数值孔径 聚光镜的重要参数之一是 数值孔径 (NA)， 控制聚光镜的数值孔径是通 ， 过调节聚光镜的孔径光阑 （ 过调节聚光镜的 孔径光阑（ 即一个 孔径光阑 可变光圈）来实现的。 可变光圈）来实现的。 数值孔径的作用： 数值孔径的作用 ： 影响显微镜的分 辨率， 控制显微图像的反差和景深。 辨率 ， 控制显微图像的反差和景深 。 通过调整孔径光阑， 通过调整孔径光阑 ， 使 聚光镜的数 值孔径等于物镜数值孔径的三分之 二时，显微镜的分辨率最佳。 ，显微镜的分辨率最佳。
藿香 (Agastache rugosa) 茎横切面
显微组织简 图常用代表 符号图
3、显微摄影
3.1 仪器与设备
显微镜， 显微镜 ， 显微镜摄影仪 （ 照
相机、数码摄像头CCD等 相机、数码摄像头CCD等） CCD
3.2 正确使用显微镜-获取最佳图像 正确使用显微镜要获得好的显微图像，用好显微镜是关键。 要获得好的显微图像，用好显微镜是关键。显微镜分辨能 物镜与聚光镜的性能 力的高低取决于显微镜光学系统中物镜与聚光镜的性能， 力的高低取决于显微镜光学系统中物镜与聚光镜的性能， 而物镜与聚光镜的性能又取决于两者的数值孔径 数值孔径( 而物镜与聚光镜的性能又取决于两者的数值孔径(NA)。 。 数值孔径与显微镜的各种性能有密切的关系，其与显微镜 数值孔径与显微镜的各种性能有密切的关系， 与显微镜的各种性能有密切的关系 的分辨力成正比，与焦深成反比；即数值孔径越大，分辨 分辨力成正比，与焦深成反比；即数值孔径越大， 力越大，焦深就越小，则反之。 力越大，焦深就越小，则反之。 正确调节使用显微镜视场光阑与孔径光阑（ 正确调节使用显微镜视场光阑与孔径光阑（聚光镜的数值 视场光阑 孔径是通过孔径光阑调节） 孔径是通过孔径光阑调节）的是获得高清晰图像的关键所 在。
第二部分 显微描绘与摄影
显微测量 显微描绘
利用显微量尺(目镜量尺、载台量尺 测量计 利用显微量尺 目镜量尺、载台量尺)测量计 目镜量尺 组织细胞及细胞后含物的大小 算组织细胞及细胞后含物的大小
徒手或利用显微描绘器描绘显 微镜下所见物体的图像
显微摄影
利用显微摄像装置拍摄显微镜下所见物体 的图像
1、显微测量
3.5 在数码显微摄影中几个重要参数
白平衡(White Balance) 白平衡是与图像色彩相关的一个 白平衡 重要概念。在不同光源下，因色温不同， 重要概念。在不同光源下，因色温不同，拍摄出来的相片 会偏色。如以钨丝灯（电灯泡） 会偏色。如以钨丝灯（电灯泡）照明的环境拍出的照片可 能偏黄。基于CCD工作原理，必须通过白平衡的修正， 工作原理， 能偏黄。基于 工作原理 必须通过白平衡的修正， 调整图像中红绿蓝三色的强度， 调整图像中红绿蓝三色的强度，修正外部光线所造成的误 使图像中最大光位达到纯白，以得到色彩准确的图像。 差，使图像中最大光位达到纯白，以得到色彩准确的图像。 分辨率(resolution) 分辨率是与图像质量相关的一个重要 分辨率 概念，是衡量图像细节表现力的技术参数，它以图像横向 概念，是衡量图像细节表现力的技术参数，它以图像横向 和纵向点的总数量来衡量图像的细节 的总数量来衡量图像的细节， 和纵向点的总数量来衡量图像的细节，这些点我们称之为 像素(pixel)。现在数码相机的分辨率指标中常常给出多个 像素 。 分辨率，例如640X480(30万)，1024X768(80万)等。 640X480(30万 1024X768(80万 640X480(30
1.1 目镜量尺与载台量尺
目镜量尺：是放在目镜内的一标尺， 目镜量尺：是放在目镜内的一标尺，为一块圆形的玻 璃片直径18 22mm，上面刻有直线， 18～ 璃片直径18～22mm，上面刻有直线，中央亦有精细的 刻度，通常长为5mm，精确等分为 或100小格 小格。 刻度，通常长为 ，精确等分为50或 小格 载台量尺：是一种特制的玻片中央有一个刻度的标尺， 载台量尺：是一种特制的玻片中央有一个刻度的标尺， 刻度的标尺 全长为1mm，精确等分为 小格， 全长为 ，精确等分为100 小格，每小格长 0.01mm ，即10µm。 m
具体方法是： 具体方法是：使两种量尺的刻度平 左边的“ 刻度对齐 刻度对齐， 行，左边的“0”刻度对齐，再找出 第二条重合刻度。如图： 10X物 第二条重合刻度。如图：在10X物 镜下目镜量尺 100小格(0～ 目镜量尺的 小格(0 镜下目镜量尺的100小格(0～100) 载台量尺的43小格 (0～43)的长 与载台量尺的43小格 (0～43)的长 度相等，则目镜量尺的每一小格为： 度相等，则目镜量尺的每一小格为： 4.3µm 。（10µm×43÷100≈4.3µm） × ÷ ） 同样的方法可以标化出各种放大倍 数下目镜量尺每小格的长度。 数下目镜量尺每小格的长度。
1.3 用显微量尺测量的方法
将欲测定物体的标本片放在载物台上， 将欲测定物体的标本片放在载物台上，用目镜量尺 测量目的物的小格数， 测量目的物的小格数，乘以标化出的目镜量尺在该 组合下每小格相当的微米数即得。 组合下每小格相当的微米数即得。 测量实物时，通常使用高倍物镜。当测量一个物体 测量实物时，通常使用高倍物镜。 时，要分别测量其最小值与最大值，得出该物体的 要分别测量其最小值与最大值， 长度范围。每个测量值应取15～20个数的平均值。 长度范围。每个测量值应取15～20个数的平均值。 15 个数的平均值
3.3 传统的显微摄影技术
显微摄影 传统的显微摄 影是指用胶片照相机进行 显微摄影的方法。 显微摄影的方法。是将显 微镜下观察到的图像用显 微照相设备摄录下来的一 项技术。 项技术。 显微镜、 显微摄影装置 显微镜、 照相（摄影）机系统、 照相（摄影）机系统、曝 光控制装置三部分。 光控制装置三部分。
在此过程中，显微镜的正确使用、取景聚焦、 在此过程中，显微镜的正确使用、取景聚焦、曝光控 冲洗放大是获得优质图像的关键 是获得优质图像的关键。 制及冲洗放大是获得优质图像的关键。
3.4 数码显微摄影介绍
显微镜数码照相技术是与数码相机的工作原理 是一致的，只是将CCD（charge couple device 是一致的，只是将 （ 电荷藕合器）直接安装在显微镜上。 电荷藕合器）直接安装在显微镜上。显微镜上 方的CCD将显微镜下看到的图像 光信号) 将显微镜下看到的图像( 方的CCD将显微镜下看到的图像(光信号)， 转变为数字信号输出， 转变为数字信号输出，通过相关的图像采集软 件直接显示在计算机显示器上， 件直接显示在计算机显示器上，使显微镜中观 察的图像即时生成，方便存储、编辑， 察的图像即时生成，方便存储、编辑，较之传 统的显微摄影具有明显的优势 具有明显的优势。 统的显微摄影具有明显的优势。
在进行显微观察时， 在进行显微观察时，有时需测定微细结构的 大小，如长度、宽度（直径） 大小，如长度、宽度（直径）等，作为显微鉴定 的依据之一。因显微结构一般均很小， 的依据之一。因显微结构一般均很小，通常用微 1000µm 米（µm）作为测量单位，超过1000 m，则可以用 m 作为测量单位，超过1000 毫米为单位。进行显微测量必须用专门的量尺即： 毫米为单位。进行显微测量必须用专门的量尺即： 目镜量尺(目镜测微尺)和载台量尺( 目镜量尺(目镜测微尺)和载台量尺(载台测微 尺) 。
1.2 目镜量尺的标化
目镜量尺中每一小格的长度，是随显微镜的镜筒长度、目 目镜量尺中每一小格的长度，是随显微镜的镜筒长度、 镜筒长度 的改变而变化的。 镜与物镜的放大倍数的改变而变化的 因此， 镜与物镜的放大倍数的改变而变化的。因此，必须标化目 镜量尺每一小格相当的长度； 镜量尺每一小格相当的长度；即一台显微镜在不同目镜与 物镜组合下，每一格的长度。 物镜组合下，每一格的长度。