实验九土壤微生物的分离与计数

培养
菌落计数
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样品充分混匀；
同一稀释度三个以上重复， 取平均值； 每个平板上的菌落数目合适， 便于准确计数。
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一般用菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示 原样品中的细胞数。
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三、实验材料
1、土样：选择某一生境土壤，去表层土，挖5~20cm 深度 的土壤数10g，装入已灭菌的牛皮纸袋。
重复
1 2 3平1 2 3平1 2 3平
均
均
均
稀释度
10-4
10-5
10-6
平平板板细计菌数
中的 稀释度
10-2
10-3
10-4
CFU
数
放线菌
稀释度
10-2
10-3
10-4
真菌
每克含菌样品中细菌/放线菌/真菌 活细胞数＝ （同一稀释度平板上菌落平均数× 10×稀释倍数）
含菌样品克数
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将培养后长出的单菌落数量、形态、培养特征进行 观察，分别挑取单菌落于相应平板上划线、分离， 培养， 检查菌落是否一致、单纯（也可以用显微镜涂片染色镜 检是否是单一的微生物），如有杂菌需进一步纯化、分 离。
每毫升菌落形成单位＝同一稀释度的三次重复平均数×稀释倍数 ×5
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五、思考题
1、记录利用稀释涂布法对土壤样品进行活菌计数的结果。
2、培养基: • 牛肉膏蛋白胨培养基：细菌 • 淀粉琼脂培养基（高氏1号）：放线菌——每 300ml培养基加入1ml3%的重铬酸钾抑制细菌和 霉菌生长 • 马丁氏培养基：真菌——孟加拉红抑制细菌和放线 菌
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四、实验方法
1、倒平板
2、土壤菌悬液的制备
10g土样 + 90ml无菌水
振荡20min
二、实验原理
• 土壤是微生物生活的大本营
根据某微生物的生长条件（营养，酸碱度，温度，
氧气等）而供给它适宜的培养条件，或加入生长；用稀释涂布
平板法获得单菌落（并不能绝对保证是纯培养，需要结
合观察其菌落特征、个体特征，进一步分离纯化）。
稀释到适量浓度
倾注或涂布平板
3、梯度稀释 取1ml土壤菌悬液移入含9ml无菌水的试管中，吹吸均匀，
为稀释10倍的样品，依次进行梯度稀释10-1~10-6
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4、涂布：取适当浓度的稀释液涂布于相应平板，每个 稀释度做3个平行，每种菌需要做9块平板，及时 标记，涂布后静置10分钟。
分离对象 稀释度
分离方法
细菌 放线菌
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10-6 、10-7、 10-8 10-4 、10-5、 10-6
0.1ml菌悬液，涂布法分离 0.1ml菌悬液，涂布法分离
霉菌
10-2、 10-3、 10-4
0.1ml菌悬液，涂布法分离
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5、培养 将细菌、真菌、放线菌培养基倒置于30℃培养箱中
培养3-5d。 6、计数 7、挑菌（纯化）