微生物实验设计 产蛋白酶菌株的筛选

产蛋白酶菌株的筛选级分离
一、实验原理
自能够产生胞外蛋白酶的菌株在牛奶平板上生长后，其菌落周围可形成明显的蛋白水解圈，水解圈与菌落直径的比值，常被作为判断该菌株蛋白酶产生能力的初筛依据。

将腐烂的大豆浸泡液中的细菌接种在含有酪素的培养基上进行培养。

由于产蛋白酶菌株能在干酪素的培养基上形成无色透明圈，因此能将产蛋白菌株分离出来，分离出来的菌株经再次培养，就可获得纯种产蛋白酶的菌株。

二、实验器材
1.菌种：从大豆浸泡液中获得
2.培养基:(1)PDA斜面培养基：马铃薯200g，蔗糖20g,琼脂20g,水1000ml.马铃薯去皮，切成块，煮沸半小时后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补水至1000ml，121℃灭菌30min备用。

（2）干酪素琼脂培养基：干酪素4.0g，用20ml 0.1mol/L NaOH溶液溶解后再加20g琼脂，加蒸馏水煮沸加水至1000ml 121℃灭菌30min备用。

3.试剂：无菌水。

4.仪器：天平，电磁炉，烧杯，无菌试管，无菌培养皿，高压灭菌锅，锥形瓶，接种环，涂布棒，酒精灯，恒温培养箱。

三、实验步骤
1.将腐烂的大豆放入无菌水中浸泡，制成细菌悬浮液。

2.用涂布棒蘸取菌液接种于PAD培养基中，26℃培养48h。

3.倒置于酪素琼脂培养基平板上，37℃培养24h。

4.挑取培养好的菌落接种于平板上，28℃培养48h。

5.观察各菌落周围形成的透明圈的情况。

6.选取透明圈较大的三个菌落分别接种在干酪素琼脂培养基上，28℃培养48h。

7.观察受否为单菌落，若为单菌落且有透明圈，则为纯种产蛋白酶菌株。

若有杂菌，则需要重复步骤6，直到培养出纯菌为止。

参考文献
[1]代玉梅.蛋白酶高产菌株的筛选鉴定及酶学性质研究[D].青岛:青岛大学,2008.
[2]黄志强,林白雪,谢联辉.产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选与鉴定[J].福建农林大学学报:自然科学版,2006,35(4):416-420.。