微生物限度检查法方法验证结果报告模板(1)

微生物限度检查法方法验证结果报告
一、验证用样品：********片（批号：********）
二、验证用菌种
（1）枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) [CMCC(B)63501]
（2）金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )[CMCC(B) 26003]
（3）大肠杆菌（Escherichia coli）[CMCC(F) 44102]
（4）白色念珠菌(Candida a lbicans )[CMCC(F )98001]
（5）黑曲霉菌(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003]
均为第3代，由山东省药品检验所提供
三、方法中国药典2005年版二部附录XⅠ J。

四、培养基制备：
(1)营养琼脂培养基
批号********称取 32 g，加入 1000 ml蒸馏水
(2)改良马丁琼脂培养基
批号********称取 42 g，加入 1000 ml蒸馏水
(3)MUG培养基
批号********称取 23.37 g，加入 1000 ml蒸馏水
(4)玫瑰红钠培养基
批号********称取 31.5 g，加入 1000 ml蒸馏水
(5)胆盐乳糖培养基
批号********称取 38.5 g，加入 1000 ml蒸馏水
五、菌数、霉菌数、酵母菌数计数方法学验证
1、菌液制备：
（1）取经30～35℃培养18～24小时，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养琼脂培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，做活菌计数备用。

（2）取经23～28℃培养24～48小时的白色念珠菌改良马丁琼脂培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，做活菌计数备用。

（3）取经23～28℃培养1周的黑曲霉菌斜面培养物，加3～5ml盐水洗下霉
菌孢子，吸出孢子悬液，（用管口带有薄的无菌棉花能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，做活菌计数备用。

2、供试液制备：
称取供试品10 g，加pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 ml，混匀，为1:10供试液，分别人工污染上述5种试验菌株。

3、验证试验（1）试验组：取1:10供试液1 ml和50～100cfu/ ml 试验菌株同时加入平皿中，立即倾注不超过45℃的溶化的琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24～72小时观察结果。

（2）菌液组：测定每一菌株加的试验菌数
（3）供试品对照组：测定供试品本底菌数
（4）试验组回收率三次测定结果见表1。

注：回收率结果计算公式
各菌种回收率＝试验组平均菌落数－供试品对照组平均菌落数
×100％菌液组平均菌落数
表1 试验组回收率测定结果（钙）
阳性菌实验
次数
菌液组
菌落数
试验组
菌落数
供试品对
照组菌落数
回收率
（％）
回收率
（％）
大肠埃希菌1 2 3
枯草芽孢杆菌1 2 3
金黄色葡萄球菌1 2 3
白色念珠菌1 2 3
黑曲霉菌1 2 3
4、结果判断：
在3次独立的平行试验中，供试品的回收率均大于70％，说明供试品无抑菌性；可采用常规法进行试验。

5、结论：方法学验证试验证明，可用常规法检查本品的细菌、霉菌及酵母菌数。

六、控制菌检查方法的验证：
1、验证方法：
1）试验组取供试液10ml及10～100cfu试验菌加入100ml胆盐乳糖培养基中，在35～37℃培养18～24小时，取述培养物0.2ml接种至含5mlMUG培养基的试管内，培养，于5小时、24小时在366nm紫外线下观察，同时用未接种的MUG培养基作本底对照。

观察后，沿培管的管壁加入数滴靛基质试液。

2）对照组取金黄色葡萄球菌10～100cfu为对照，同法操作。

表4 控制菌检查方法验证结果表
验证菌方法培养时间
（h）
试验组
阴性菌
对照组
备注
大肠埃希菌常规
法
24 ＋－
阴性对照菌为金
黄色葡萄球菌
2、结论：本品按中国药典2005年版微生物限度检查，经方法学验证试验，结果可用常规法进行控制菌检验。

三批样品微生物限度检查结果见表10-4。

表10-4********片微生物限度检查结果
批号************************
细菌（个/g）＜10 ＜10 ＜10 霉菌和酵母菌（个/g）＜10 ＜10 ＜10 大肠埃希菌未检出未检出未检出检验结果：三批样品微生物限度均符合规定。