IV 胶原检测试剂盒性能评价
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
ABSTRACT: Objective To establish magnetic particlesquantitativechemiluminescence immunoassayAnalysis method for IVcollagen. Methods As solid-phase antigen, IVantibody which coated on themagneticparticles.TheIVcollagen in the sample is specifically bound toantibody on themagnetic particles. Results The linear range of the test kit was50 to 1000 ng/mL; LOB was0.671 ng/mL; LOD was 2.49 ng/mL; FS was 4.8 ng/mL. The CV between a day was<4.6%; the CV between days was <5.8%,the total CV was <7.1%. The recovery rate of the samples was from 94.10% to 103.40%.IVcollagen has no cross-reactivity with 25 kinds of clinical therapeutic drugs. Conclusion This method of high sensitivity, fast detection speed, high accuracy and specificity cholylglycine is good for clinical research ,which has great application and promotion prospects. KEY WORDS: Sandwich method; IVcollagen; Chemiluminescence method; Hepatic fibrosis
0 引言
根据胶原在体内的分布和功能特点分为三大类：间质胶原、基 膜胶原和细胞外周胶原。基膜胶原为一类分布在基底膜的非纤维 状而成薄膜状的胶原。IV 胶原是典型的基底膜胶原，是基底膜的 支架结构，是基底膜中的主要胶原蛋白 [1]。其由三条 α(IV) 肽链组 成，为三股螺旋结构。除中央螺旋区外，其氨基端为 7S 区，羧基端 为终端膨大的非胶原 NC1 区。IV 型胶原长约 400nm，直径约 1.5nm 分子量为 549.8~599.8KD。
2.1 校准品曲线 本方法采用四参数 Log-Logit 拟合校准曲线和回归方程（图 1）。
正常肝组组织窦状间隙无基底膜存在，Ⅳ型胶原含量极微，但 是由肝炎向肝硬化的肝纤维化发展过程中，在 Disse 间隙形成基 底膜。与此同时肝组织及血液中的Ⅳ型胶原含量也随之增加。肝 纤维化时肝内 IV 胶原含量增多且分布紊乱 , 并参与肝窦内皮毛 细管化，因此血清 IV 胶原在肝纤维化的诊断中具有重要意义 [2]。 酒精性肝病患者中，Ⅳ型胶原蛋白水平与纤维化分期，尤其是门静 脉周围纤维化存在显著的相关性。血清 IV 型胶原是诊断早期肝 硬化及连续动态观察肝病进展的良好指标之一。
在 20μL 磁微粒混悬液中分别加入 100μL 校准品或待检样品、 100μL 酶结合物，于 37℃温育 30min，反应完毕后，分别加入底物 A 和 B，测定发光值。根据校准品的浓度与发光值对应关系，采用 数学模型四参数 Log-Logit 拟合校准曲线和回归方程，对临床样 本进行浓度回算。
2 结果
1 材料和方法
1.1 材料 IV 胶原包被抗体、酶标抗体、校准品抗原购自郑州伊美诺生
物技术有限公司；仪器为安图生物 Autolumo A2000 全自动化学发 光测定仪。 1.2 IV 胶原校准品的配制
精确称取 IV 胶原，用校准品稀释液稀释为 50、100、250、500、 1000ng/mL 等一系列浓度梯度的校准品。 1.3 反应模式
Performance Evaluation of the Detection of IV Collagen Kit
LI Zhong-xin, XIE Qian, ZHOU Fang-fang, FU Guang-yu*
(Zhengzhou Antu Bioengineering Co., Ltd., Zhengzhou Henan)
世界最新医学信息文摘 2019V 胶原检测试剂盒性能评价
李忠信，谢茜，周方方，付光宇 *
（郑州安图生物工程股份有限公司，河南 郑州）
摘要：目的 建立 IV 胶原磁微粒化学发光免疫检测方法。方法 采用夹心法，IV 包被抗体包被于顺磁微粒上作为固相抗原，样本中的抗原和 磁微粒上的抗体特异性结合，再加入酶标抗体形成夹心复合物。结果 本试剂盒的线性范围为 50-1000ng/mL；空白限（LOB）为 0.671ng/mL， 检出限（LOD）为 2.49ng/mL，功能灵敏度 (FS) 为 4.8ng/mL；分析内精密度 <4.6%，天间精密度 <5.8%；总不精密度 <7.1%；样品的回收率在 94.10~103.40% 之间。与 25 种临床治疗药物对检测结果无干扰。结论 建立的 IV 胶原磁微粒化学发光定量免疫分析方法灵敏度高、测定速度快、 准确度高及特异性强，利于临床研究的开展，应用和推广前景巨大。 关键词：夹心法；IV 胶原；化学发光法；肝纤维化 中图分类号：R256.4 文献标识码：B DOI: 10.19613/ki.1671-3141.2019.08.108 本文引用格式：李忠信 , 谢茜 , 周方方 , 等 . IV 胶原检测试剂盒性能评价 [J]. 世界最新医学信息文摘 ,2019,19(08):217-218.
0 引言
根据胶原在体内的分布和功能特点分为三大类：间质胶原、基 膜胶原和细胞外周胶原。基膜胶原为一类分布在基底膜的非纤维 状而成薄膜状的胶原。IV 胶原是典型的基底膜胶原，是基底膜的 支架结构，是基底膜中的主要胶原蛋白 [1]。其由三条 α(IV) 肽链组 成，为三股螺旋结构。除中央螺旋区外，其氨基端为 7S 区，羧基端 为终端膨大的非胶原 NC1 区。IV 型胶原长约 400nm，直径约 1.5nm 分子量为 549.8~599.8KD。
2.1 校准品曲线 本方法采用四参数 Log-Logit 拟合校准曲线和回归方程（图 1）。
正常肝组组织窦状间隙无基底膜存在，Ⅳ型胶原含量极微，但 是由肝炎向肝硬化的肝纤维化发展过程中，在 Disse 间隙形成基 底膜。与此同时肝组织及血液中的Ⅳ型胶原含量也随之增加。肝 纤维化时肝内 IV 胶原含量增多且分布紊乱 , 并参与肝窦内皮毛 细管化，因此血清 IV 胶原在肝纤维化的诊断中具有重要意义 [2]。 酒精性肝病患者中，Ⅳ型胶原蛋白水平与纤维化分期，尤其是门静 脉周围纤维化存在显著的相关性。血清 IV 型胶原是诊断早期肝 硬化及连续动态观察肝病进展的良好指标之一。
在 20μL 磁微粒混悬液中分别加入 100μL 校准品或待检样品、 100μL 酶结合物，于 37℃温育 30min，反应完毕后，分别加入底物 A 和 B，测定发光值。根据校准品的浓度与发光值对应关系，采用 数学模型四参数 Log-Logit 拟合校准曲线和回归方程，对临床样 本进行浓度回算。
2 结果
1 材料和方法
1.1 材料 IV 胶原包被抗体、酶标抗体、校准品抗原购自郑州伊美诺生
物技术有限公司；仪器为安图生物 Autolumo A2000 全自动化学发 光测定仪。 1.2 IV 胶原校准品的配制
精确称取 IV 胶原，用校准品稀释液稀释为 50、100、250、500、 1000ng/mL 等一系列浓度梯度的校准品。 1.3 反应模式
Performance Evaluation of the Detection of IV Collagen Kit
LI Zhong-xin, XIE Qian, ZHOU Fang-fang, FU Guang-yu*
(Zhengzhou Antu Bioengineering Co., Ltd., Zhengzhou Henan)
世界最新医学信息文摘 2019V 胶原检测试剂盒性能评价
李忠信，谢茜，周方方，付光宇 *
（郑州安图生物工程股份有限公司，河南 郑州）
摘要：目的 建立 IV 胶原磁微粒化学发光免疫检测方法。方法 采用夹心法，IV 包被抗体包被于顺磁微粒上作为固相抗原，样本中的抗原和 磁微粒上的抗体特异性结合，再加入酶标抗体形成夹心复合物。结果 本试剂盒的线性范围为 50-1000ng/mL；空白限（LOB）为 0.671ng/mL， 检出限（LOD）为 2.49ng/mL，功能灵敏度 (FS) 为 4.8ng/mL；分析内精密度 <4.6%，天间精密度 <5.8%；总不精密度 <7.1%；样品的回收率在 94.10~103.40% 之间。与 25 种临床治疗药物对检测结果无干扰。结论 建立的 IV 胶原磁微粒化学发光定量免疫分析方法灵敏度高、测定速度快、 准确度高及特异性强，利于临床研究的开展，应用和推广前景巨大。 关键词：夹心法；IV 胶原；化学发光法；肝纤维化 中图分类号：R256.4 文献标识码：B DOI: 10.19613/ki.1671-3141.2019.08.108 本文引用格式：李忠信 , 谢茜 , 周方方 , 等 . IV 胶原检测试剂盒性能评价 [J]. 世界最新医学信息文摘 ,2019,19(08):217-218.