荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和乙肝病毒标志物检测
的临床价值分析
陈海雁;张桂花;罗锦彬;黄舒婷
【摘要】目的探讨荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测乙肝病毒DNA(HBV-DNA)和乙肝病毒标志物(HBV-M) ELISA法检测的临床价值.方法选取本院收洽的乙肝患者653例,先采用ELISA法对其血液标本进行HBV-M模式定性检测,再采用FQ-PCR 法进行HBV-DNA定量检测,观察不同HBV-M模式检测结果.结果大三阳(1、3、5模式)和1、3模式的HBV-DNA阳性率分别为97.97％和94.74％,显著高于其他模式(P＜0.05).大三阳(1、3、5模式)的HBV-DNA表达水平为
(5.59×106±2.42×105),显著高于其他模式(P＜0.05).结论不同HBV-M模式的HBV-DNA表达水平及阳性率存在显著差异,联合HBV-M定性及HBV-DNA定量检测对临床早期诊断及用药具有重要指导价值.
【期刊名称】《实用临床医药杂志》
【年(卷),期】2014(018)019
【总页数】3页(P108-110)
【关键词】定性;荧光定量PCR法;HBV-M;乙肝病毒
【作者】陈海雁;张桂花;罗锦彬;黄舒婷
【作者单位】广东省惠州市惠阳区人民医院检验科,广东惠州,516211;广东省惠州市惠阳区人民医院检验科,广东惠州,516211;广东省惠州市惠阳区人民医院检验科,广东惠州,516211;广东省惠州市惠阳区人民医院检验科,广东惠州,516211
【正文语种】中文
【中图分类】R512.6
乙型肝炎是中国常见传染性疾病之一，也是较严重的病毒性肝炎之一，严重危害人们的生活健康和生活质量[1]。

乙肝病毒标志物(HBV-M)是目前中国临床判断病情
及传染性的一项重要参考依据，能够反映患者对HBV病毒的免疫应答状态[2]。

近年来随着分子生物学技术的发展，FQ-PCR技术在临床诊断和治疗中发挥着独特的优势，其可直接检测患者的HBV-DNA病毒含量，反映HBV复制及感染活性[3]。

本研究通过HBV-M定性及HBV-DNA定量检测，探讨二者之间的关系及临床价值，现报告如下。

1 资料与方法
选取2013年4—12月在本院检测的乙肝患者653例，诊断标准：肝组织Knodell HAⅠ≥4，或≥G2/S2炎性坏死/纤维化，ALT≥2×ULN, 同时HBV-DNA 呈阳性。

男412例，女243例，年龄5～66岁，平均(36.42±6.45)岁, HBV-DNA检测试剂主要由中山大学达安基因股份有限公司生产，采用ROCHELIGHTCYCLER480型号的基因扩增分析仪; ELISA试剂盒购自上海科华公司。

质控品由临检质控中心提供。

HBV免疫学检测：取受试者肘静脉血5 mL室温静置30 min, 离心5 min(25 cm,
3 000 rpm),采用ELISA法进行HBV-M模式的定性检测。

检测顺序为: ① HBsAg;
② HbsAb; ③ HbeAg; ④ HbeAb; ⑤ HbcAb。

根据上海热电MK3型酶标仪比色进行结果评定，严格按照试剂说明书进行检验操作及评定结果。

HBV-DNA定量测定：采用FQ-PCR法对HBV-DNA病毒含量进行测定。

仪器型号为ROCHELIGHTCYCLER480型号(购自德国罗氏公司),FQ-PCR试剂盒购自中
山大学达安基因股份有限公司，定量测定范围在103～107，严格按照操作说明进行，结果真实可信。

2 结果
2.1 ELISA检测HBV-M模式结果
本研究653例乙肝患者的血液标本中，HBV-M模式定性检测有以下8种模式：
大三阳(1、3、5模式)197例，小三阳(1、4、5模式)252例，1、4模式95例，1、3模式19例，2、4、5模式25例，2、4模式13例，4、5模式19例，5模式33例。

2.2 HBV-DNA定量检测结果
以HBV-DNA表达水平高于1×103 copies/mL为阳性。

本研究653例血清样本中，HBV-DNA检测阳性率为54.82%(358/653)。

2.3 不同HBV-M模式下检测结果比较
大三阳(1、3、5模式)和1、3模式的HBV-DNA阳性率分别为97.97%和
94.74%，显著高于其他模式(P<0.05)。

大三阳(1、3、5模式)的HBV-DNA表达水平为(5.59×106±2.42×105), 显著高于其他模式(P<0.05)，见表1。

2.4 不同HBV-M模式HBV-DNA含量公布
以HBV-DNA表达水平进行分组，阴性组HBV-DNA<103; 低水平复制组HBV-DNA103～<104; 中水平复制组HBV-DNA104～<106: 高水平复制组HBV-
DNA107～<109。

不同HBV-M模式HBV-DNA表达水平分布见表2。

表1 不同HBV-M模式下检测结果比较HBV-M模式例数HBV-DNA例数阳性率/%含量/(copies/mL)1(+)、3(+)、5(+)模式
19719397.975.59×106±2.42×1051(+)、4(+)、5(+)模式
2528834.924.18×105±1.53×1041(+)、4(+)模式
955760.03.33×104±1.75×1031(+)、3(+)模式
191894.743.72×106±1.58×1052(+)、4(+)、5(+)模式
2528.04.75×103±1.39×1022(+)、4(+)模式1300-4(+)、5(+)模式1900-5(+)模式3300-
表2 HBV-M模式HBV-DNA含量分布比较HBV-M模式例数HBV-DNA含量分
布<103103～<104104～<106107～<109HBV-DNA阳性1(+)、3(+)、5(+)模式19741578100193(97.97)1(+)、4(+)、5(+)模式2521645031788(34.92)1(+)、4(+)模式9538411657(60)1(+)、3(+)模式19165718(94.74)2(+)、4(+)、5(+)
模式252322(8)--2(+)、4(+)模式1313----4(+)、5(+)模式1919----5(+)模式3333----
3 讨论
中国流学病学调查表明，一般人群HBsAg阳性率约为9.1%，感染慢性乙肝病毒
患者发生原发性肝癌危险性增加约3 000倍[4]。

由于HBV感染具有极强的传染力，临床发病率较高，且部分患者易转变为慢性肝炎，在疾病进展过程中易继发肝硬化、肝癌等疾病，已成为世界性的一个严重公共卫生问题 [5]。

因此，寻找一种快速、准确的检测方法对于HBV感染的早期诊断、切断传播及予以及早治疗具有重要意义。

目前临床主要的检测方法有ELISA法、放射免疫法、FQ-PCR法以及化学发光法
等[6]。

ELISA法检测只能反映患者对HBV病毒的免疫应答状态，是HBV病毒感
染的间接参考依据，对机体HBV感染复制情况及传染危险性反映不准确[7]。

而
FQ-PCR法对HBV-DNA表达水平的检测是HBV感染情况的最直接参考指标，其检测灵敏度、特异性较高，且能直接、动态地反映HBV病毒的复制状态及传染危险性[8]。

但FQ-PCR法HBV-DNA定量检测对非复制状态下的感染情况反映不明确[9]，故临床上常联合检测。

大三阳是指乙肝表面抗原、核心抗体及e抗原检测同时阳性，即1(+)、3(+)、5(+)
模式。

本研究结果显示，从不同HBV-M模式HBV-DNA阳性检测率，大三阳(1、3、5模式)和1、3模式的HBV-DNA阳性率分别为97.97%和94.74%, 显著高于其他模式(P<0.05)。

大三阳(1、3、5模式)的HBV-DNA表达水平最高
(5.59×106±2.42×105)，明显高于其他模式(P<0.05), 与林琳等[10]研究报道一致，说明了当1、3同时阳性时，患者体内HBV-DNA复制活跃，病毒传染性增加。

因此，大三阳患者的病毒传染性强。

本研究小三阳患者[1(+)、4(+)、5(+)模
式]HBV-DNA阳性率为34.92%，显著低于大三阳97.97%阳性率(P<0.05); 但是HBV-DNA表达水平(4.18×105±1.53×104)仍较高。

说明小三阳HBeAg已经转阴，HBV-DNA复制活跃性亦略低于大三阳组，但是机体内病毒复制并未停止，
仍有传染性[11]。

1(+)、3(+)模式的HBV-DNA阳性率为60%, 介于大、小三阳之间，有研究报道解释其可能是因HBV病毒基因第1 896位核普酸出现突变，使得前C区序列转录以及翻译受阻，因而HBeAg分泌减少，但患者HBV-DNA复制
情况仍存在，临床也应加以重视[12]。

2(+)、4(+)模式，4(+)、5(+)模式，5(+)模式的阳性率为0%。

HBsAg、HBeAg转阴，HBsAb的产生说明了患者体内HBV
病毒已经清除，HBsAb在HBV病毒清除时作用较大。

2(+)、4(+)、5(+)模式下，机体已经产生了具有保护性作用的HBsAb, 或宿主免疫力低，既不表达抗原，也不产生抗体应答，因此阳性率亦较低[13]。

以上4种模式，乙肝病毒基本不复制，传染性低。

检测中常以HBV-DNA表达水平进行分组，阴性组(HBV-DNA<103)、
低水平复制组(HBV-DNA103～<104)、中水平复制组(HBV-DNA104～<106)、
高水平复制组(HBV-DNA107～<109), 进一步以HBV-DNA表达水平进行分组结果分析，不同HBV-M模式下阴性组、低水平复制组、中水平复制组、高水平复制组检测出的阳性率各不相同，但结论与HBV-M不同模式下阳性检测率完全一致。

综上所述，不同HBV-M模式的HBV-DNA表达水平及阳性率存在显著差异性，
联合HBV-M定性及HBV-DNA定量检测对临床早期诊断及用药具有重要指导价
值。

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