【CN109529029A】一种抗体-蒜酶的偶联物及其制备方法和应用【专利】

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CN 109529029 A
说 明 书
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一种抗体-蒜酶的偶联物及其制备方法和应用
技术领域 [0001] 本发明属于肿瘤靶向治疗技术领域，尤其涉及一种抗体-蒜酶偶联物及其制备方 法和应用。
背景技术 [0002] 大蒜(Allium sativumL .)为百合科葱属植物蒜的鳞茎，是一种具有悠久历史的药 食两用植物。蒜氨酸裂解酶(Alliinase，EC4 .4 .1 .4)简称蒜酶，是用来催化大蒜中活性成分 蒜氨酸，使其裂解生成大蒜辣素，大蒜辣素是目前公认的大蒜活性成分，具有多种药理活性 作用。但由于大蒜辣素不稳定，成药困难，大蒜辣素无法实现其应用价值。 [0003] Legumain，又称天冬酰胺内肽酶(Asparaginyl endopeptidase，AEP) ，是半胱氨酸 蛋白 酶C13家族一个新成 员。正常情况下 ，Legumain在哺乳类动物不表达或 仅低水平表达。 Legumain在人乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌及中枢神经系统恶性肿瘤等组织中 均呈高表达，但在相应的正常组织中不表达或表达水平较低，Legumain与肿瘤的转移、侵袭 和扩散等密切相关 ，Legumain在体外几乎检测不到 ，它的表达是高度依赖于肿瘤环境。 Legumain在大多肿瘤细胞系 ，分布在细胞 质、细胞核、溶酶体以 及条件培养基中 ，所以 Legumain在靶向化疗中可以作为重要的靶标。单克隆抗体对抗原有高特异性和亲和力，但 抗体对肿瘤特异性抗原往往缺乏治疗活性。
(51)Int .Cl . A61K 38/51(2006 .01) A61K 47/68(2017 .01) A61P 35/00(2006 .01)
(10)申请公布号 CN 109529029 A (43)申请公布日 2019.03.29
( 54 )发明 名称 一种抗体-蒜酶的偶联物及其制备方法和应
( 19 )中华人民 共和国国家知识产权局
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910020078 .2
(22)申请日 2019 .01 .09
(71)申请人 新疆医科大学 地址 830001 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 市新医路393号
(72)发Байду номын сангаас人 李新霞 李心雨
(74)专利代理机构 北京高沃律师事务所 11569 代理人 代芳
权利要求书1页 说明书5页 附图2页
CN 109529029 A
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权 利 要 求 书
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1 .一种抗体-蒜酶偶联物，其特征在于，所述抗体和蒜酶通过酰胺键偶联；所述抗体为 肿瘤细胞特异性表面抗原的抗体。
2 .根据权利要求1所述的抗体-蒜酶偶联物，其特征在于，所述抗体为天冬酰胺内肽酶 抗体。
3 .权利要求1或2所述的抗体-蒜酶偶联物的制备方法，包括以下步骤： 1)将抗体与碳二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺混合活化，获得羧基活化的抗体溶液； 2)将所述羧基活化的抗体溶液与蒜酶溶液混合进行偶联反应，获得抗体-蒜酶偶联物。 4 .根据权利要求3所述的 制备方法 ，其特征在于 ，步骤1) 中所述活化的时间为30～ 40min。 5 .根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述活化的过程伴随搅拌。 6 .根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述活化后，还包括超滤离 心活化后的料液，收集上层液体为羧基活化的抗体溶液。 7 .根据权利要求6所述的制备方法 ，其特征在于 ，所述超滤离心的截留分子量为9～ 11KD。 8 .根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述偶联反应过程中混合液 的pH为8～9；所述偶联反应的时间为2～4h。 9 .根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述蒜酶溶液的浓度为15～ 25mg/mL；所述蒜酶溶液的溶剂为PBS缓冲液。 10 .权利要求1或2所述的抗体-蒜酶偶联物或权利要求3～9任意一项所述制备方法制 备获得的抗体-蒜酶偶联物在制备靶向抗肿瘤药物中的应用。
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说 明 书
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[0015] 优选的，步骤2)中所述偶联反应过程中混合液的pH为8～9；所述偶联反应的时间 为2～4h。 [0016] 优选的 ，步骤2)中所述蒜酶溶液的浓度为15～25mg/mL；所述蒜酶溶液的溶剂为 PBS缓冲液。 [0017] 本发明提供了所述的抗体-蒜酶偶联物在制备靶向抗肿瘤药物中的应用。 [0018] 本发明的有益效果：本发明提供的抗体-蒜酶偶联物，将肿瘤细胞特异性表面抗原 的抗体与蒜酶偶联，使所述抗体-蒜酶偶联物能够选择性的聚集在肿瘤细胞表面，当在体外 给予蒜氨酸后 ，使蒜氨酸在肿瘤细胞表面原位释放大蒜辣素 ，从而产生特异性杀伤 肿瘤细 胞的作用。 [0019] 根据实施例的记载，本发明提供的天冬酰胺内肽酶抗体-蒜酶偶联物能够特异性 的聚集在食管癌细胞表面，并不能聚集在正常的细胞表面，因此具有肿瘤细胞的靶向性，不 对正常细胞造成任何影响，能够应用于制备靶向肿瘤细胞药物。
发明内容 [0004] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗体-蒜酶偶联物及其制备方法和应用，所 述抗体-蒜酶偶联物能够有选择性地作用于肿瘤细胞表面抗原，在体外给予蒜氨酸，使肿瘤 细胞原位释放大蒜辣素，从而产生杀伤肿瘤细胞的作用。 [0005] 为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案： [0006] 一种抗体-蒜酶偶联物，所述抗体和蒜酶通过酰胺键偶联；所述抗体为肿瘤细胞特 异性表面抗原的抗体。 [0007] 优选的，所述抗体为天冬酰胺内肽酶抗体。 [0008] 本发明提供了所述的抗体-蒜酶偶联物的制备方法，包括以下步骤： [0009] 1)将抗体与碳二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺混合活化，获得羧基活化的抗体溶 液； [0010] 2)将所述羧基活化的抗体溶液与蒜酶溶液混合进行偶联反应，获得抗体-蒜酶偶 联物。 [0011] 优选的，步骤1)中所述活化的时间为30～40min。 [0012] 优选的，步骤1)中所述活化的过程伴随搅拌。 [0013] 优选的，步骤1)中所述活化后，还包括超滤离心活化后的料液，收集上层液体为羧 基活化的抗体溶液。 [0014] 优选的，所述超滤离心的截留分子量为9～11KD。
用 ( 57 )摘要
本发明提供了一种抗体-蒜酶偶联物及其制 备方法 和应 用 ，属于 肿瘤靶向 治疗技术领域 ，所 述抗体-蒜酶偶联物中抗体和蒜酶通过酰胺键偶 联 ；所述抗体为肿瘤细胞特异性表面抗原的抗 体 ；所述抗体-蒜酶 偶联物的 制备方法包括以 下 步骤：1 )将抗体与碳二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰 亚胺混合活化，获得羧基活化的抗体溶液；2 )将 所述羧基活化的抗体溶液与蒜酶溶液混合进行 偶联反应，获得抗体-蒜酶偶联物。本发明提供的 抗体-蒜酶 偶联物具有 肿瘤细胞靶向性 ，不对正 常细胞造成任何影响，能够应用于制备靶向肿瘤 细胞药物。