vero细胞制备狂犬疫苗

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材料
Vero细胞 微载体 Phamacia Cytodex-1
培养基 Vero细胞培养使用MEM培养基(Gibco),加入10%新生牛血 清;病毒培养液为M199(Gibco),加入1%人血白蛋白, 100U/ml双抗
病毒种子 aG株
实验动物 鼠。鼠龄21 d,体质量11~13 g。 生物反应器 7 L搅拌生物反应器，工作体积为5 L
灭活
浓度为1∶4 000β-丙内脂溶液灭活,于4℃连续搅拌24 h。 将灭活后的疫苗加入适当的Al(OH)3佐剂制备成试验疫苗。
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纯化
半成品
成品
保存、 运输及 有效期
灭活后的液体采用柱色谱或其他适宜的方法纯化，纯化 后可加入适量人血白蛋白或其它适宜的稳定剂即为原液
配制 用疫苗稀释液将原液按同一蛋白质含量及抗原量进行配制，配 置后总蛋白质含量应不高于80ug/剂，可加入适量硫柳汞作为防腐剂， 即成半成品
外观应为澄明液体无异物
3.化学检定
PH值
应为7.2—8.0
效价测定
细胞内毒素检查
应不低于2.5IU/剂
应不高于50EU/剂
牛血清蛋白残留量
应不高于50ng/剂
VERO细胞DNA残留量 应不高于100pg/剂
VERO细胞宿主蛋白残留量测定 采用酶联免疫法测定，应不高于4ug/ml,并不得超过总蛋白质含 量的5%
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工艺流程
发酵罐 细胞培
养
发酵罐 病毒培
养
温度37℃, pH 7. 2,溶氧50%空气饱和度,搅拌速度 50 r/min
温度35℃, pH 7. 4,溶氧20%空气饱和度,搅拌速度 50 r/min。
病毒 滴定
含2%牛血清的蒸馏水作10倍比稀释。分别接种6只 小鼠,每只脑内接种0. 03 ml
第七页，共为什么要使残余β-丙内脂水解？（师） 2.为什么疫苗需要防腐剂？ 3.纯化的方式有哪些？ 4. ELISA可用于测定抗原，是否也可用于 测定抗体？（其中需要什么试剂和用什么 方法）
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规格 每瓶1.0ml 每一次人用剂量为1.0ml 狂犬病疫苗 效价应不低于2.5IU
于2~8度避光保存和运输。自生产之日起，按批准的执行
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检定
1.单次病毒收获液
病毒滴定 应不低于6.0LgLD50/ml
2.成品检定
鉴别试验 采用酶联免疫法(ELISA法)检查，应证明含有狂犬病病毒抗原
目录
工艺
流程
简介
材料
检定
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简介
什么是狂犬病
• 狂犬病是一种由狂犬病毒引起的人兽共患急性传 染病，潜伏期可以从几天长至数年，患者表现出 特有的怕水症状(因此又称“恐水症”)。
• 病死率高达100%。
• 全球有100多个国家和地区有狂犬病发生，但主要 分布在亚洲、非洲和拉丁美洲等发展中国家，其 中98％在亚洲，而中国的发病数仅次于印度，居 世界第二位，流行严重。