玉米干种子DNA 快速提取技术研究

68.02
1.85
235.24
1.94
241.84
1.89
219.91
1.90
317.19
1.87
129.98
2.08
OD260nm/OD230nm 1.62 0.22 2.87 2.14 2.24 2.11 2.40
液，振荡混匀。⑤用磁分离架分离磁珠并弃上清。⑥加 入 900 μL 漂洗液洗涤 3 次，分离磁珠弃上清，吹干 磁珠后加入 100 μL 洗脱液，充分混匀，65 ℃水浴 10 min。⑦转移至磁力架上吸附 2 min，待磁珠完全吸
基金项目：吉林农业科技学院大学生科技创新科研项目（编号：吉农院合字 [2019] 第 037 号）。 作者简介：王宇龙（2000—），男，本科在读；研究方向为分子生物学。 通讯作者：楚海娇（1984—），女，硕士，实验师；研究方向为分子检测新方法研究。
验配制 7 种提取裂解液对玉米干种子进行 DNA 提取， 经超微量紫外分光光度计测量浓度和纯度，结果见表 1。裂解液Ⅰ的浓度最低，裂解液Ⅱ而单独使用 2%CTAB
提取时浓度最高；加入不同摩尔浓度的盐酸胍后 DNA 浓度没有提高。采用 7 种裂解液提取的 DNA 纯度均较 好，除使用 SDS 裂解液的 OD260/OD280 为 2.08，存在少 量 RNA 污染外，其他比值均在 1.8 ～ 2.0。纯净 DNA 样本的 OD260/OD230 应该大于 2，采用盐酸胍和异硫氰 酸胍作为裂解液的比值分别为 1.62 和 0.22，可能存在 盐离子或胍盐残留。结合电泳图 1 可见 3 ～ 6 号泳道 DNA 条带明亮清晰，无拖尾弥散现象，完整性好。因 此，认为 2%CTAB 为最佳裂解液。
裂解液
Ⅰ（盐酸胍） Ⅱ（异硫氰酸胍） Ⅲ（2%CTAB+1 mol·L-1 盐酸胍） Ⅳ（2%CTAB+3 mol·L-1 盐酸胍） Ⅴ（2%CTAB+6 mol·L-1 盐酸胍）
Ⅵ（2%CTAB） Ⅶ（2%SDS）
表 1 裂解液对 DNA 提取效果的影响表
质量浓 /ng·μL-1 55.99
OD260nm/OD280nm 1.94
92 / 现代食品 XIANDAISHIPIN
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Process Technology 工艺技术
附后，将溶液转移至新的离心管中，置于 -20 ℃保存。
2 结果与分析
2.1 裂解液对 DNA 提取效果的影响 细胞的充分裂解是获得高质量 DNA 的前提。本试
工艺技术 Process Technology
doi:10.16736/41-1434/ts.2020.07.033
玉米干种子 DNA 快速提取技术研究
Study on Rapid Extraction of DNA from Maize Seeds
◎ 王宇龙，尚千铅，张 帆，杨海燕，楚海娇 （吉林农业科技学院生物与制药工程学院，吉林 吉林 132101）
关键词：玉米；DNA；提取
Abstract：Using maize seeds as materials, extracted the genomic DNA by magnetic nanospheres.The results showed that when the lysate was 2%CTAB, the pyrolysis temperature was 65 ℃ , the time was 10 min and the dosage of magnetic beads was 15 µL, the genomic DNA extraction concentration was high, the purity was good, and it was suitable for subsequent experiments.
Wang Yulong, Shang Qianqian, Zhang Fan, Yang Haiyan, Chu Haijiao (Jilin Agriculture Science and Technology College, Jilin 132101, China)
摘 要：以玉米干种子为提取材料，采用磁性纳米微球作为吸附介质进行基因组 DNA 的提取，分别探讨不 同裂解液、裂解温度、时间和磁珠用量对基因组 DNA 提取效率的影响。结果表明裂解液 2%CTAB、裂解温度 65 ℃、 裂解时间 10 min、磁珠用量 15 µL 时基因组 DNA 提取浓度高、纯度好、适宜后续实验。
Key words：Maize; DNA; Extraction
中图分类号：S513
玉米转基因成分的检测主要是基于基因水平的检 测，PCR 技术是常用的检测手段，而高质量的 DNA 是后续 PCR 检测成功与否的前提条件 [1]。针对玉米的 DNA 提取最常用的方法是 CTAB 法，而传统的提取方 法存在操作过程繁琐、耗时耗力、使用有毒溶剂及不 能自动化提取等缺点 [2]。为克服以上缺点，本试验采用 近年来在核酸分离纯化领域备受瞩目的磁珠分离技术， 以玉米干种子为提取材料进行 DNA 提取，同时对提取 条件进行优化，建立了一种玉米干种子 DNA 提取的磁 性分离方法，旨为玉米转基因快速检测提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料 玉米干种子，由吉林农业科技学院农学院提供；
磁珠，由吉林化工学院提供。 1.2 方法
1.2.1 样品处理 取玉米干种子若干粒，于粉碎机中粉碎成粉末。
1.2.2 提取步骤 ①称取 0.04 g 玉米粉末转移至预先装有 400 μL
裂 解 液 的 无 菌 离 心 管 中， 迅 速 颠 倒 混 匀。 ② 水 浴 10 min，每隔 5 min 颠倒混匀。③ 12 000 r·min-1 离心 5 min 后将上清液移至新的 1.5 mL 无菌离心管中。④加 入与上清液等体积的异丙醇及一定体积的磁珠工作