临床免疫定性检测的性能验证
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
行验证和确认
临床免疫定性检测的性能验证
第7页
3.几个主要概念
筛查试验: 临床上筛查方法通惯用于检测整个人 群（或者人群中特定部分）中特定指标情况。比
如对需输血患者样本做HIV血清学试验。
普通来说，这些用于筛查定性试验必须含有
高敏感性以确保真阳性结果检出。假如筛查试验
假阳性结果所造成社会及经济后果不是非常严重，
这种低特异性可经过特异性很好确实认试验加以
填补。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床免疫定性检测的性能验证
第8页
3.几个主要概念
诊疗试验: 通惯用于临床怀疑某种特定疾病或 情况是否存在诊疗性定性试验。比如各种微生 物培养就是用于检验感染情况诊疗试验。
临床免疫定性检测的性能验证
第21页
1.准确度验证
1）检测已知值参考物质 室间质评材料 (卫生部或者CAP) 厂商提供已赋值参考材料
分析用参考方法或决定方法定值材料。
2） 方法比较试验: 样本数为10-20个，两种方法同 时测定一样样品，用KAPPA检验方法分析两种方 法检测结果一致性.(比如HBV酶免法和发光法比 对)
临床上对治疗要求，诊疗试验应含有很
好敏感性和特异性。假如诊疗试验后还进行确
认试验，那么诊疗试验特异性要求能够稍微降
低。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床免疫定性检测的性能验证
第32页
(1) CUT-OFF重复性验证
CUT-OFF重复性（同时包含测定下限 验证）
批内变异验证
批间变异验证
临床免疫定性检测的性能验证
第33页
验证步骤
制备足够40次重复检测3份样本：分别为 处于临界浓度、高于临界浓度20%和低于 临界浓度20%样本。
重复检测样本40次，确定每一份样本结果 为阳性和阴性百分比。
20
10 50%
30%-70%
40
20 50%
35%-65%
100 50 50%
40%-60%
样本实际浓度
C30-C70
临床免疫定性检测的性能验证
第36页
临界点（CUT-OFF）重复性指是什么？
是为正在评价检测试剂或系统建立分析 物临界浓度(C50), 而且确保临界浓度 ±20%范围处于95%区间内。
第15页
二.定性检测系统性能验证
验证内容: 1.正确度（准确度） 2.精密度 3.敏感性 4.特异性 5.CUTOFF值验证 6.其它（需要时）
临床免疫定性检测的性能验证
第16页
包括免疫定性检测评价方法标准
EP15A2 EP17A EP12
医学试验室精密度和准确度确实认 检出限与定量限评价 定性检测评价
临床免疫定性检测 性能验证
临床免疫定性检测的性能验证
第1页
高速列车性能验证
空气动力学 速度 车体转向架运行 固定、悬挂零部件强度 稳定性 舒适感 故障率 ……
临床免疫定性检测的性能验证
第2页
测定系统关键要素
方法学
试剂
操作程序
临床免疫定性检测的性能验证
测定系统
仪器
第3页
校准品
第3页
试剂盒说明书 国际和／或国际标准
临床免疫定性检测的性能验证
第19页
性能验证前样本准备
质控品: 使用商品化质控物进行，包含阴性 和阳性。
样本采集和保留: 采集时间、保留方式等必 须确保一致性。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床试验室标准化协会
Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI)
临床免疫定性检测的性能验证
第17页
性能验证前准备
应熟悉待验证试剂或系统
进行必要培训, 包含样本处理和储存、试剂 处理和储存、合理检测方案、对结果合理解 释以及系统质量控制等。
医学检验为何需要“性能验证”？
评价检测系统是否满足临床检测和认 可组织要求（ISO15189）；
验证厂家提供试剂参数能否在本试验 室得到重现。
临床免疫定性检测的性能验证
第4页
什么时候进行性能验证
使用新检测试剂或系统时； 更换检测试剂或系统时。 更换新试剂或系统意义: 更易于操作 更高检测性能 更经济 更能满足试验室测定要求
临床免疫定性检测的性能验证
第30页
临界点定义
一样一份样本, 在屡次重复试验中各有 50%几率取得阳性或阴性结果时该分析 物浓度。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
感染率
检出 (+) 未检出 (－)
9,500
500
4,500
85,500
95%
1%感染率
检出(+) 未检出(－)
950
50
4,950 94,050
95%
95%
95%
950/[950+4950]=16% 9500/[9500+4500]=67.9%
85500/[85500+500]=99.4 94050/[94050+50]=99.9% %
临床免疫定性检测的性能验证
第5页
一.定性临床应用与分类 1.定性测定临床应用
免疫学测定：感染性疾病、肿瘤标志 物 核酸和基因检测 微生物检验 细胞学检验 寄生虫检验
临床免疫定性检测的性能验证
第6页
2.定性试验临床分类 筛查试验：如便潜血、TP 诊疗试验：如微生物学培养与细菌判
定 确认试验：对以上已做出检验结果进
临床免疫定性检测的性能验证
第9页
3.几个主要概念
确认试验: 确认试验用于验证筛查试验或者诊 疗试验结果。假如确诊试验证实了之前检测结 果，临床医生即可作出诊疗。确认试验经过设 计使其含有较高特异性（有时甚至以牺牲敏感 性为代价）以及高阳性预测值。免疫印迹试验 就是一个用于HIV血清学试验等筛查试验之后 确实认试验。
评价临界浓度是否准确？ 评价+20至20%浓度范围是否包含于、位于或者超出 这种方法95%区间？
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床免疫定性检测的性能验证
临床免疫定性检测的性能验证
第10页
3.几个主要概念
敏感性或阳性测定能力指数（DI（＋））: 可定义为一试验对阳性标本测定后给出阳性 结果能力。
DI（＋）=[真阳性/（真阳性+假阴 性）]×100%
特异性或阴性测定能力指数（DI（－））: 则为对阴性样本测定给出阴性结果能力
DI（－）= [真阴性/（真阴性+假阳 性）]×100%
临床免疫定性检测的性能验证
第11页
3.几个主要概念
阳性预示值: 即测定为阳性标本实际上为阳性 可能性。
=[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100%
阴性预示值:则为一份给出阴性结果样本实际 上为阴性可靠性。
= [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%
临床免疫定性检测的性能验证
第12页
临床诊疗（金标准）
制订质量确保计划
确定患者样本数量及强弱（评价重复性）
确定比较方法
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床免疫定性检测的性能验证
第18页
性能验证合格标准从何而来？
临床免疫定性检测的性能验证
第22页
选取40份（20份）样本,最好阴阳性各半
↓
随机盲法重新分号
↓
检测样本 ↓
将全部检测结果汇总填表 ↓
计算评价性能指标
临床免疫定性检测的性能验证
第23页
2.精密度验证
1）批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检 测10次.然后计算均值,SD和CV.
2）批间精密度:同一份样本连续检测10天,天天平行 检测双孔.然后计算均值,SD和CV.
阳性
阴性
阳性
A
B
验证方法
阴性
C
D
总计
A+C
B+D
临床免疫定性检测的性能验证
总计
A+B C+D
N
第13页
敏感度 = 100%×[A/（A+C）] 特异性 = 100%×[D/（B+D）] 相关样本患病率 = 100%×[（A+C）/N] 阳性预测值（PVP） = 100%×[A/（A+B）] 阴性预测值 （PVN）= 100%×[D/（C+D）] 方法效率（正确率） = 100%×[（A+D）/N]
2）样本起源:体检样本,体检者确认符合 要求后即可.
NOTE:部分项目在健康体检人群中阳 性率也很高,这类项目特异性验证极难 执行,提议引用厂家说明书.
临床免疫定性检测的性能验比证 如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等第28页
特异性验证（干扰）
特定病原体以外感染性疾病患者样本。 含有干扰性物质样本: 类风湿因子（RF）阳
性、含异嗜性抗体、溶血、脂血、高胆红素 样本。 结果判断: 非特定病原体感染患者样本均应为 阴性。含一定浓度干扰物质样本检测应为阴 性。
临床免疫定性检测的性能验证
第29页
5.CUT-OFF重复性和测定下限验证
CUT-OFF重复性验证: 样本浓度应靠近临界 值。不宜用阴性或强阳性样本。
批内和批间变异验证: 高、中和低三个浓度 （与试剂盒说明书中所述相适应）
Note: 用S/CO比值进行统计计算.
最好选择临界值,或弱阳性样本.
判断标准:批内CV小于15%,批间CV小于25%.
临床免疫定性检测的性能验证
第24页
批内重复性验证
高、中、低三个浓度样本，在一批检测内， 重复检测20次（孔），计算所得S/CO值 均值和SD，计算批内CV%。
判断结论: 应≤试剂说明书所标明批内变异。 ELISA批内变异CV%应≤10%。
临床免疫定性检测的性能验证
第20页
方法比较用样本数量
取决于评价者目标。作为最低要求, 检测要 连续到最少用比较方法取得50个阳性样本。
而且最少用比较方法取得50例阴性样本以 确定此种检测方法特异性。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床免疫定性检测的性能验证
第14页
“预示值”对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性试 剂检测结果影响（100,000人）
结果
+ － 敏感性 (TP/[TP+FN]) 特异性 (TN/[TN+FP]) 阳性预示值 TP/[TP+FP] 阴性预示值 TN/[TN+FN]
临床免疫定性检测的性能验证
临床免疫定性检测的性能验证
第31页
临界点（CUT-OFF)与试剂盒判断值 （CUT-OFF值）区分
这里临界点指是一个处于试剂检测临界点样 本浓度, 其一旦确定, 是不变。
试剂盒CUT-OFF值指是一个判断某一次测定 结果由阴性和阳性对照信号值按一定公式计 算出来信号值, 每次测定都会有所差异。
临床免疫定性检测的性能验证
第25页
批间重复性验证
高、中、低三个浓度样本，在10天以上时间内 单次（孔或管）重复进行20批检测，计算所得 S/CO值均值和SD，计算批间CV%。
判断结论: 应≤试剂说明书所标明批间变异。 ELISA批间变异CV%应≤15%。
临床免疫定性检测的性能验证
第26页
3.敏感性
1）验证方法:
取10-20份已知真阳性样本，用常规检测方法检 测，计算检测阳性样本占样本总数百分比。
2）样本起源:
临床诊疗阳性病人血清；
厂家提供阳性对照；
决定性参考方法检测阳性样本；
以上阳性样本起源担心时，能够进行稀释（如2: 3 ，3: 4这么稀释）
临床免疫定性检测的性能验证
第27页
4.特异性
1）验证方法: 选取20份正常健康人血清 （普通取自健康体检者），计算其检测 阴性结果所占百分率。
第34页
C50是否准确？
40次测试
C50
1 阳性结果 =<13/40(32.5%)
不正确
>=27/40(67.5%) 2 阳性结果 （14-26）/40（35%-65%） 正确
临床免疫定性检测的性能验证
第35页
不一样C50重复检测次数与检出 阳性数关系
阳性结果
重复性 检测总
次数
次数
百分比
真正百分比
临床免疫定性检测的性能验证
第7页
3.几个主要概念
筛查试验: 临床上筛查方法通惯用于检测整个人 群（或者人群中特定部分）中特定指标情况。比
如对需输血患者样本做HIV血清学试验。
普通来说，这些用于筛查定性试验必须含有
高敏感性以确保真阳性结果检出。假如筛查试验
假阳性结果所造成社会及经济后果不是非常严重，
这种低特异性可经过特异性很好确实认试验加以
填补。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床免疫定性检测的性能验证
第8页
3.几个主要概念
诊疗试验: 通惯用于临床怀疑某种特定疾病或 情况是否存在诊疗性定性试验。比如各种微生 物培养就是用于检验感染情况诊疗试验。
临床免疫定性检测的性能验证
第21页
1.准确度验证
1）检测已知值参考物质 室间质评材料 (卫生部或者CAP) 厂商提供已赋值参考材料
分析用参考方法或决定方法定值材料。
2） 方法比较试验: 样本数为10-20个，两种方法同 时测定一样样品，用KAPPA检验方法分析两种方 法检测结果一致性.(比如HBV酶免法和发光法比 对)
临床上对治疗要求，诊疗试验应含有很
好敏感性和特异性。假如诊疗试验后还进行确
认试验，那么诊疗试验特异性要求能够稍微降
低。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床免疫定性检测的性能验证
第32页
(1) CUT-OFF重复性验证
CUT-OFF重复性（同时包含测定下限 验证）
批内变异验证
批间变异验证
临床免疫定性检测的性能验证
第33页
验证步骤
制备足够40次重复检测3份样本：分别为 处于临界浓度、高于临界浓度20%和低于 临界浓度20%样本。
重复检测样本40次，确定每一份样本结果 为阳性和阴性百分比。
20
10 50%
30%-70%
40
20 50%
35%-65%
100 50 50%
40%-60%
样本实际浓度
C30-C70
临床免疫定性检测的性能验证
第36页
临界点（CUT-OFF）重复性指是什么？
是为正在评价检测试剂或系统建立分析 物临界浓度(C50), 而且确保临界浓度 ±20%范围处于95%区间内。
第15页
二.定性检测系统性能验证
验证内容: 1.正确度（准确度） 2.精密度 3.敏感性 4.特异性 5.CUTOFF值验证 6.其它（需要时）
临床免疫定性检测的性能验证
第16页
包括免疫定性检测评价方法标准
EP15A2 EP17A EP12
医学试验室精密度和准确度确实认 检出限与定量限评价 定性检测评价
临床免疫定性检测 性能验证
临床免疫定性检测的性能验证
第1页
高速列车性能验证
空气动力学 速度 车体转向架运行 固定、悬挂零部件强度 稳定性 舒适感 故障率 ……
临床免疫定性检测的性能验证
第2页
测定系统关键要素
方法学
试剂
操作程序
临床免疫定性检测的性能验证
测定系统
仪器
第3页
校准品
第3页
试剂盒说明书 国际和／或国际标准
临床免疫定性检测的性能验证
第19页
性能验证前样本准备
质控品: 使用商品化质控物进行，包含阴性 和阳性。
样本采集和保留: 采集时间、保留方式等必 须确保一致性。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床试验室标准化协会
Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI)
临床免疫定性检测的性能验证
第17页
性能验证前准备
应熟悉待验证试剂或系统
进行必要培训, 包含样本处理和储存、试剂 处理和储存、合理检测方案、对结果合理解 释以及系统质量控制等。
医学检验为何需要“性能验证”？
评价检测系统是否满足临床检测和认 可组织要求（ISO15189）；
验证厂家提供试剂参数能否在本试验 室得到重现。
临床免疫定性检测的性能验证
第4页
什么时候进行性能验证
使用新检测试剂或系统时； 更换检测试剂或系统时。 更换新试剂或系统意义: 更易于操作 更高检测性能 更经济 更能满足试验室测定要求
临床免疫定性检测的性能验证
第30页
临界点定义
一样一份样本, 在屡次重复试验中各有 50%几率取得阳性或阴性结果时该分析 物浓度。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
感染率
检出 (+) 未检出 (－)
9,500
500
4,500
85,500
95%
1%感染率
检出(+) 未检出(－)
950
50
4,950 94,050
95%
95%
95%
950/[950+4950]=16% 9500/[9500+4500]=67.9%
85500/[85500+500]=99.4 94050/[94050+50]=99.9% %
临床免疫定性检测的性能验证
第5页
一.定性临床应用与分类 1.定性测定临床应用
免疫学测定：感染性疾病、肿瘤标志 物 核酸和基因检测 微生物检验 细胞学检验 寄生虫检验
临床免疫定性检测的性能验证
第6页
2.定性试验临床分类 筛查试验：如便潜血、TP 诊疗试验：如微生物学培养与细菌判
定 确认试验：对以上已做出检验结果进
临床免疫定性检测的性能验证
第9页
3.几个主要概念
确认试验: 确认试验用于验证筛查试验或者诊 疗试验结果。假如确诊试验证实了之前检测结 果，临床医生即可作出诊疗。确认试验经过设 计使其含有较高特异性（有时甚至以牺牲敏感 性为代价）以及高阳性预测值。免疫印迹试验 就是一个用于HIV血清学试验等筛查试验之后 确实认试验。
评价临界浓度是否准确？ 评价+20至20%浓度范围是否包含于、位于或者超出 这种方法95%区间？
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床免疫定性检测的性能验证
临床免疫定性检测的性能验证
第10页
3.几个主要概念
敏感性或阳性测定能力指数（DI（＋））: 可定义为一试验对阳性标本测定后给出阳性 结果能力。
DI（＋）=[真阳性/（真阳性+假阴 性）]×100%
特异性或阴性测定能力指数（DI（－））: 则为对阴性样本测定给出阴性结果能力
DI（－）= [真阴性/（真阴性+假阳 性）]×100%
临床免疫定性检测的性能验证
第11页
3.几个主要概念
阳性预示值: 即测定为阳性标本实际上为阳性 可能性。
=[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100%
阴性预示值:则为一份给出阴性结果样本实际 上为阴性可靠性。
= [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%
临床免疫定性检测的性能验证
第12页
临床诊疗（金标准）
制订质量确保计划
确定患者样本数量及强弱（评价重复性）
确定比较方法
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床免疫定性检测的性能验证
第18页
性能验证合格标准从何而来？
临床免疫定性检测的性能验证
第22页
选取40份（20份）样本,最好阴阳性各半
↓
随机盲法重新分号
↓
检测样本 ↓
将全部检测结果汇总填表 ↓
计算评价性能指标
临床免疫定性检测的性能验证
第23页
2.精密度验证
1）批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检 测10次.然后计算均值,SD和CV.
2）批间精密度:同一份样本连续检测10天,天天平行 检测双孔.然后计算均值,SD和CV.
阳性
阴性
阳性
A
B
验证方法
阴性
C
D
总计
A+C
B+D
临床免疫定性检测的性能验证
总计
A+B C+D
N
第13页
敏感度 = 100%×[A/（A+C）] 特异性 = 100%×[D/（B+D）] 相关样本患病率 = 100%×[（A+C）/N] 阳性预测值（PVP） = 100%×[A/（A+B）] 阴性预测值 （PVN）= 100%×[D/（C+D）] 方法效率（正确率） = 100%×[（A+D）/N]
2）样本起源:体检样本,体检者确认符合 要求后即可.
NOTE:部分项目在健康体检人群中阳 性率也很高,这类项目特异性验证极难 执行,提议引用厂家说明书.
临床免疫定性检测的性能验比证 如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等第28页
特异性验证（干扰）
特定病原体以外感染性疾病患者样本。 含有干扰性物质样本: 类风湿因子（RF）阳
性、含异嗜性抗体、溶血、脂血、高胆红素 样本。 结果判断: 非特定病原体感染患者样本均应为 阴性。含一定浓度干扰物质样本检测应为阴 性。
临床免疫定性检测的性能验证
第29页
5.CUT-OFF重复性和测定下限验证
CUT-OFF重复性验证: 样本浓度应靠近临界 值。不宜用阴性或强阳性样本。
批内和批间变异验证: 高、中和低三个浓度 （与试剂盒说明书中所述相适应）
Note: 用S/CO比值进行统计计算.
最好选择临界值,或弱阳性样本.
判断标准:批内CV小于15%,批间CV小于25%.
临床免疫定性检测的性能验证
第24页
批内重复性验证
高、中、低三个浓度样本，在一批检测内， 重复检测20次（孔），计算所得S/CO值 均值和SD，计算批内CV%。
判断结论: 应≤试剂说明书所标明批内变异。 ELISA批内变异CV%应≤10%。
临床免疫定性检测的性能验证
第20页
方法比较用样本数量
取决于评价者目标。作为最低要求, 检测要 连续到最少用比较方法取得50个阳性样本。
而且最少用比较方法取得50例阴性样本以 确定此种检测方法特异性。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床免疫定性检测的性能验证
第14页
“预示值”对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性试 剂检测结果影响（100,000人）
结果
+ － 敏感性 (TP/[TP+FN]) 特异性 (TN/[TN+FP]) 阳性预示值 TP/[TP+FP] 阴性预示值 TN/[TN+FN]
临床免疫定性检测的性能验证
临床免疫定性检测的性能验证
第31页
临界点（CUT-OFF)与试剂盒判断值 （CUT-OFF值）区分
这里临界点指是一个处于试剂检测临界点样 本浓度, 其一旦确定, 是不变。
试剂盒CUT-OFF值指是一个判断某一次测定 结果由阴性和阳性对照信号值按一定公式计 算出来信号值, 每次测定都会有所差异。
临床免疫定性检测的性能验证
第25页
批间重复性验证
高、中、低三个浓度样本，在10天以上时间内 单次（孔或管）重复进行20批检测，计算所得 S/CO值均值和SD，计算批间CV%。
判断结论: 应≤试剂说明书所标明批间变异。 ELISA批间变异CV%应≤15%。
临床免疫定性检测的性能验证
第26页
3.敏感性
1）验证方法:
取10-20份已知真阳性样本，用常规检测方法检 测，计算检测阳性样本占样本总数百分比。
2）样本起源:
临床诊疗阳性病人血清；
厂家提供阳性对照；
决定性参考方法检测阳性样本；
以上阳性样本起源担心时，能够进行稀释（如2: 3 ，3: 4这么稀释）
临床免疫定性检测的性能验证
第27页
4.特异性
1）验证方法: 选取20份正常健康人血清 （普通取自健康体检者），计算其检测 阴性结果所占百分率。
第34页
C50是否准确？
40次测试
C50
1 阳性结果 =<13/40(32.5%)
不正确
>=27/40(67.5%) 2 阳性结果 （14-26）/40（35%-65%） 正确
临床免疫定性检测的性能验证
第35页
不一样C50重复检测次数与检出 阳性数关系
阳性结果
重复性 检测总
次数
次数
百分比
真正百分比