一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810224861.6
(22)申请日 2018.03.19
(71)申请人 齐齐哈尔医学院
地址 161000 黑龙江省齐齐哈尔市建华区卜
奎北大街333号
(72)发明人 费洪新　吴树亮　张晓杰　张英博　
(74)专利代理机构 北京科龙寰宇知识产权代理
有限责任公司 11139
代理人 孙皓晨　马鑫
(51)Int.Cl.
A61K 36/8984(2006.01)
A61P 25/28(2006.01)
(54)发明名称
一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物
及其制备方法和应用
(57)摘要
本发明公开了一种用于治疗阿尔茨海默病
的中药组合物及其制备方法和应用。

本发明选择
祖国医药黑芝麻、楮实、枸骨叶、铁皮石斛、蓝布
正、盘龙参、化州橘红、薤白、佛手、苏合香、鬼箭
羽、芸薹子、黄花倒水莲、栝楼、鹿衔草组成中药
组合物，并开展了对阿尔茨海默病小鼠模型的治
疗，结果表明本发明的中药组合物对阿尔茨海默
病的综合治疗效果明显并且无副作用。

本发明的
提出为阿尔茨海默病的治疗提供了一种新的技
术手段，可以产生巨大的经济效益和社会效益，
应用前景非常广阔。

权利要求书1页 说明书17页 附图8页CN 108295194 A 2018.07.20
C N 108295194
A
1.一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物由以下重量份的各原料组成：黑芝麻10-15重量份、楮实10-15重量份、枸骨叶15-25重量份、铁皮石斛20-30重量份、蓝布正15-25重量份、盘龙参10-15重量份、化州橘红3-5重量份、薤白5-10重量份、佛手4-8重量份、苏合香0.5-1重量份、鬼箭羽5-15重量份、芸薹子5-10重量份、黄花倒水莲20-25重量份、栝楼10-15重量份以及鹿衔草20-25重量份。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物由以下重量份的各原料组成：黑芝麻12重量份、楮实12.5重量份、枸骨叶20重量份、铁皮石斛25重量份、蓝布正19.5重量份、盘龙参12重量份、化州橘红4.5重量份、薤白7.5重量份、佛手6重量份、苏合香0.65重量份、鬼箭羽10重量份、芸薹子8.25重量份、黄花倒水莲22.5重量份、栝楼12重量份以及鹿衔草22.5重量份。

3.权利要求1或2所述的中药组合物在制备用于治疗阿尔茨海默病的药物中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，向权利要求1或2所述的中药组合物中加入制剂成型所需的辅料，按照药物制剂常规方法做成临床上适宜的各种药物制剂。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物制剂为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。

6.一种制备用于治疗阿尔茨海默病的水煎剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)按照权利要求1或2所述的重量份称取各原料；
(2)将步骤(1)称取得到的各原料混合后，加入原料总重量10-20倍的蒸馏水，浸泡1.5-
2.5h，之后煎煮1.5-2.5h，过滤，得到第一次中药组合物滤液以及残渣；
(3)向步骤(2)获得的中药组合物残渣中加入与步骤(1)相同体积的蒸馏水，浸泡中药组合物残渣1.5-2.5h，煎煮中药组合物残渣1.5-2.5h，过滤后，得到第二次中药组合物滤液；
(4)将第一次中药组合物滤液和第二次中药组合物滤液合并，混匀，即得到用于治疗阿尔茨海默病的水煎剂。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的过滤是指依次采用5层白色纱布、15层白色纱布分别过滤。

权　利　要　求　书1/1页CN 108295194 A
一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和
应用
技术领域
[0001]本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和应用，特别涉及一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用。

本发明属于中药技术领域。

背景技术
[0002]阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)是临床上常见的老年性疾病，其发病率、患病率及死亡率逐年增加。

近年来，阿尔茨海默病患者对家庭、社会和国家都带来了极大的精神负担和经济负担，其已经成为国外很多国家继心脑血管疾病、肿瘤、脑中风之后死亡率排在第四位的重要疾病，因此，积极有效治疗阿尔茨海默病就显得尤为重要。

[0003]已经证实，阿尔茨海默病往往会出现脑内β-淀粉样蛋白(β-amyloid，Aβ)大量沉积并在神经元外侧形成老年斑(Senile plaques，SP)，还会出现小胶质细胞(Microglia)、星形胶质细胞(Astrocytes)大量活化而诱发神经性炎症反应，更会出现在神经元内部神经原纤维不规则排列形成神经原纤维缠结(Neurofibrillary tangles，NFTs)，最终会引起脑海马神经毒性反应、炎症反应、氧化应激反应等，由此，很多研究者提出阿尔茨海默病的Aβ蛋白学说、炎症介质学说、神经血管假说、自由基损伤学说等。

一般而言，Aβ蛋白学说、炎症介质学说、神经血管假说是阿尔茨海默病发病机制的重要学说，且彼此之间密切相关。

脑内Aβ是由β-分泌酶与γ-分泌酶加工、水解β-淀粉样蛋白前体蛋白(Amyloid-βprecursor protein，APP)所产生，Aβ包括Aβ1-40和Aβ1-42，Aβ1-42参与构成SP核心成分，可以形成可溶性、扩散性Aβ寡聚体，进而促进阿尔茨海默病的发生及发展，最终损害脑海马神经元，导致学习记忆水平下降、海马结构异常(例如神经元和毛细血管结构异常)、激活脑小胶质细胞及星形胶质细胞分泌功能[例如白介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6，IL-6)等产生增加]，还可以引起脑内产生大量自由基且常伴有抗氧化水平低下(例如总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶含量降低，丙二醛含量增加)。

依据神经血管假说，脑内Aβ的清除和转运依赖血脑屏障(Blood brain barrier，BBB)的完整性。

一旦BBB的完整性遭到破坏，会引起BBB通透性增加，导致Aβ的清除减少进而加重阿尔茨海默病的病情。

资料显示，BBB的核心结构是血管内皮细胞，而血管内皮细胞上存在可以转运Aβ的蛋白复合体，晚期糖基化终末产物受体(Receptor for advanced glycation end-prod ucts，RAGE)与配体Aβ结合，会促进NF-κB通路活化，引起下游信号载脂蛋白J (Apolipoprotein J，Apo J)、载脂蛋白E(Apolipoprotein E，Apo E)、血管内皮细胞粘附因子-1(Vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(Intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1)表达异常，还会引起肿瘤坏死因子-α(Treating tumor necrosis factor-α，TNF-α)和IL-1β等炎症介质含量增加，更会引起脑线粒体细胞凋亡途径相关的Bcl-2和Bax表达异常，最终将会促进阿尔茨海默病的发生及发展。

[0004]目前，国内外诸多药物均可以治疗阿尔茨海默病，如乙酰胆碱酯酶(Acetylcholin esterase，AChE)抑制剂、抗氧化剂、抗神经元细胞凋亡药物、雌激素、神经营养因子、抗精神
病药物、抗Aβ药物等，但是很多药物具有一定程度的不良反应，会给阿尔茨海默病患者健康带来危害，为此，积极探寻不良反应小且非常有效的治疗阿尔茨海默病药物就显得非常重要。

[0005]资料显示，中药具有协同效应强、不良反应小、靶点多和整体调节的特点，在延缓阿尔茨海默病进程、减弱炎症反应、保护神经元等方面具有独特优势，这为临床上治疗阿尔茨海默病带来了希望。

由此，寻找极为有效的中药组合物开展阿尔茨海默病的治疗工作就显得尤为重要。

发明内容
[0006]本发明的目的在于提供一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法。

[0007]为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：
[0008]本发明的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物，所述的中药组合物由以下重量份的各原料组成：黑芝麻10-15重量份、楮实10-15重量份、枸骨叶15-25重量份、铁皮石斛20-30重量份、蓝布正15-25重量份、盘龙参10-15重量份、化州橘红3-5重量份、薤白5-10重量份、佛手4-8重量份、苏合香0.5-1重量份、鬼箭羽5-15重量份、芸薹子5-10重量份、黄花倒水莲20-25重量份、栝楼10-15重量份以及鹿衔草20-25重量份。

[0009]其中，优选的，所述的中药组合物由以下重量份的各原料组成：黑芝麻12重量份、楮实12.5重量份、枸骨叶20重量份、铁皮石斛25重量份、蓝布正19.5重量份、盘龙参12重量份、化州橘红4.5重量份、薤白7.5重量份、佛手6重量份、苏合香0.65重量份、鬼箭羽10重量份、芸薹子8.25重量份、黄花倒水莲22.5重量份、栝楼12重量份以及鹿衔草22.5重量份。

[0010]中药黑芝麻，性平，味甘，归肝经、肾经、大肠经，其具有补肝益精、补肾益血、润肠通便的功效；楮实，性寒，味甘，归肝经、肾经，其具有补肝消肿、滋肾明目的功效；枸骨叶，性凉，味苦，归足厥阴肝经、足少阴肾经，其具有补肝养血、益肾养气、祛风除湿的功效；铁皮石斛，性微寒，味甘，归肺经、肾经，其具有滋阴清热、润肺益肾、明目强腰的功效；蓝布正，性凉，味甘、微苦，归肝经、脾经、肺经，其具有滋阴益气、健脾补血、润肺化痰的功效。

盘龙参，性温，味甘、苦，归肝经、肺经、心经、肾经，其具有滋阴益气、清热解毒、补气壮阳的功效；化州橘红，性平，味苦、微辛，归肺经、脾经，其具有理气燥湿、散寒消痰的功效；薤白，性温，味辛、苦，归心经、肺经、胃经、大肠经，其具有理气散结、温中通阳的功效；佛手，性温，味辛、苦、甘，归肝经、脾经、胃经，其具有理气化痰、健脾舒肝、和胃止痛的功效；苏合香，性温，味辛、甘，归肺经、肝经、脾经、胃经，其具有开郁化痰、行气止痛、辟秽醒神的功效；鬼箭羽，性寒，味苦，归足厥阴肝经，其具有活血化瘀、消肿通经、杀虫解毒的功效；芸薹子，性温，味辛，归肝经、肾经，其具有活血化瘀、消肿散结、润肠通便的功效；黄花倒水莲，性平，味甘、微苦，归肝经、肾经、脾经，其具有活血调经、化瘀补气、健脾利湿的功效；栝楼，性寒，味甘、微苦，归肺经、胃经、大肠经，其具有消痰散结、清热宽胸、润燥滑肠的功效；鹿衔草，性温，味甘、苦，归肺经、胃经、肝经、肾经，其具有除湿祛风、补虚益肾、活血调经、强骨止血的功效。

[0011]中医理论认为，肝主疏泄，其疏泄功能与神志活动密切相关。

若肝疏泄功能正常，气机调畅、五脏调和，则人神志活动正常。

当人到老年时，肝气始衰，七情失调，会引起肝气郁滞、气郁痰凝、气滞湿阻、气滞血瘀、郁久化火，导致上扰清空、神机失用，出现诸多痰、湿、火、瘀等病理产物，壅于五脏，损及心神，蒙蔽心包，神明无所主，最终脑失所养，而诱发阿尔
茨海默病。

可见，治疗阿尔茨海默病需要坚持从肝论治的基本原则，故而选择中药黑芝麻、楮实、枸骨叶进行补肝。

一般而言，阿尔茨海默病多因为年高肝肾精血亏虚，髓海失充，神明无主，会引起头晕耳鸣、神情呆滞、健忘、语言蹇涩、步履不稳、食欲缺失，因此，针对阿尔茨海默病患者需要坚持滋阴填精，故而选择中药铁皮石斛、蓝布正、盘龙参进行滋阴。

同时，因于肝失疏泄或肝不藏血，日久气病及血而成瘀血，瘀血阻窍，髓海浑浊，脑神失养，伴有气郁痰凝、气滞湿阻、神机受损而发病，故而选择中药化州橘红、薤白、佛手、苏合香进行理气开郁，选择中药鬼箭羽、芸薹子、黄花倒水莲进行活血化瘀，选择中药栝楼、鹿衔草进行消痰除湿。

[0012]基于以上综合分析，本发明选择15种中药：黑芝麻、楮实、枸骨叶、铁皮石斛、蓝布正、盘龙参、化州橘红、薤白、佛手、苏合香、鬼箭羽、芸薹子、黄花倒水莲、栝楼以及鹿衔草组成中药组合物。

进一步的，本发明通过实验全面观察了中药组合物对阿尔茨海默病小鼠的影响及相关分子作用机制，包括考察阿尔茨海默病模型小鼠行为学、炎症介质、APP相关蛋白、抗氧化能力、血脑屏障通透性、海马超微结构、凋亡相关蛋白表达、脾指数、脑指数、胸腺指数，还要考察阿尔茨海默病模型小鼠海马RAGE、NF-κBp65、VCAM-1及ICAM-1等蛋白和基因表达以及其对阿尔茨海默病模型小鼠心、肺、肾、肝和体重的影响，结果表明，本发明的中药组合物高、中剂量(50.68g/kg、25.34g/kg)可明显改善阿尔茨海默病模型小鼠行为学、炎症介质、APP相关蛋白、抗氧化能力，还可明显改善阿尔茨海默病模型小鼠脑血脑屏障通透性、海马超微结构、凋亡相关蛋白表达、脾指数、脑指数和胸腺指数，更可明显改善阿尔茨海默病模型小鼠海马RAGE、NF-κBp65、VCAM-1及ICAM-1等蛋白和基因表达，同时，其对阿尔茨海默病模型小鼠心、肺、肾、肝和体重无影响，说明本发明的中药组合物对治疗阿尔茨海默病有效，并且无副作用。

[0013]因此，在上述研究的基础上，本发明还提出了所述的中药组合物在制备用于治疗阿尔茨海默病的药物中的应用。

[0014]其中，优选的，向所述的中药组合物中加入制剂成型所需的辅料，按照药物制剂常规方法做成临床上适宜的各种药物制剂。

[0015]其中，优选的，所述的药物制剂为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。

[0016]在本发明的一个具体实施例中提供了一种制备用于治疗阿尔茨海默病的水煎剂的方法，包括以下步骤：
[0017](1)按照权利要求1或2所述的重量份称取各原料；
[0018](2)将步骤(1)称取得到的各原料混合后，加入原料总重量10-20倍的蒸馏水，浸泡1.5-2.5h，之后煎煮1.5-2.5h，过滤，得到第一次中药组合物滤液以及残渣；
[0019](3)向步骤(2)获得的中药组合物残渣中加入与步骤(1)相同体积的蒸馏水，浸泡中药组合物残渣1.5-2.5h，煎煮中药组合物残渣1.5-2.5h，过滤后，得到第二次中药组合物滤液；
[0020](4)将第一次中药组合物滤液和第二次中药组合物滤液合并，混匀，即得到用于治疗阿尔茨海默病的水煎剂。

[0021]其中，优选的，所述的过滤是指依次采用5层白色纱布、15层白色纱布分别过滤。

[0022]综上，本发明选择祖国医药黑芝麻、楮实、枸骨叶、铁皮石斛、蓝布正、盘龙参、化州橘红、薤白、佛手、苏合香、鬼箭羽、芸薹子、黄花倒水莲、栝楼、鹿衔草组成的中药组合物，并
开展了对阿尔茨海默病小鼠模型的治疗，结果表明本发明的中药组合物对阿尔茨海默病的综合治疗效果明显并且无副作用。

本发明的提出为阿尔茨海默病的治疗提供了一种新的技术手段，可以产生巨大的经济效益和社会效益，应用前景非常广阔。

附图说明
[0023]图1为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠学习能力的影响；
[0024]注：相较于对照组：*P＜0.05；相较于模型组：#P＜0.05，**P＞0.05；
[0025]图2为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠记忆能力的影响；
[0026]注：相较于对照组：*P＜0.05；相较于模型组：#P＜0.05，**P＞0.05；
[0027]图3为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠学习记忆保持能力的影响；
[0028]注：相较于对照组：*P＜0.05；相较于模型组：#P＜0.05，**P＞0.05；
[0029]图4为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠海马炎症介质的影响；
[0030]注：相较于对照组：*P＜0.05；相较于模型组：#P＜0.05，**P＞0.05；
[0031]图5为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠海马APP相关蛋白的影响；
[0032]注：相较于对照组：*P＜0.05；相较于模型组：#P＜0.05，**P＞0.05；
[0033]图6为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠海马乙酰胆碱代谢酶的影响；
[0034]注：相较于对照组：*P＜0.05；相较于模型组：#P＜0.05，**P＞0.05；
[0035]图7为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠海马凋亡相关蛋白表达的影响；[0036]注：相较于对照组：*P＜0.05；相较于模型组：#P＜0.05，**P＞0.05；
[0037]图8为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠海马抗氧化能力的影响；
[0038]注：相较于对照组：*P＜0.05；相较于模型组：#P＜0.05，**P＞0.05；
[0039]图9为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脑BBB通透性的影响；
[0040]注：相较于对照组：*P＜0.05；相较于模型组：#P＜0.05，**P＞0.05；
[0041]图10为小鼠海马CA1区神经元超微结构(透射电子显微镜，×2550)；
[0042]图11为小鼠海马CA1区神经元细胞质超微结构(透射电子显微镜，×6500)；[0043]图12为小鼠海马CA1区神经元细胞质超微结构(透射电子显微镜，×16500)；[0044]图13为小鼠海马CA1区毛细血管超微结构(透射电镜，×2550)；
[0045]图14为小鼠海马CA1区毛细血管内皮细胞质超微结构(透射电镜，×6500)；[0046]图15为小鼠海马CA1区毛细血管内皮细胞质超微结构(透射电镜，×16500)；[0047]图16为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠海马RAGE、NF-κBp65、ICAM-1、VCAM-1表达的影响；
[0048]注：相较于对照组：*P＜0.05；相较于模型组：#P＜0.05，**P＞0.05；
[0049]图17为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠海马RAGE、NF-κBp65、ICAM-1、VCAM-1基因的影响；
[0050]注：相较于对照组：*P＜0.05；相较于模型组：#P＜0.05，**P＞0.05；
[0051]图18为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠脾指数、胸腺指数和脑指数的影响；[0052]注：相较于对照组：*P＜0.05；相较于模型组：#P＜0.05，**P＞0.05；
[0053]图19为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠心、肝、肾和肺指数的影响；
[0054]注：相较于对照组：*P＞0.05；相较于模型组：#P＞0.05；
[0055]图20为中药组合物对阿尔茨海默病小鼠体重的影响。

[0056]注：相较于对照组：*P＞0.05；相较于模型组：#P＞0.05。

具体实施方式
[0057]下面结合具体实施例和附图来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将更为明显。

但实施例仅用于说明本发明，并不对本发明的保护范围构成任何限制。

本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

[0058]实施例1中药组合物的制备
[0059]所述的中药组合物由以下重量的各原料组成：黑芝麻12g、楮实12.5g、枸骨叶20g、铁皮石斛25g、蓝布正19.5g、盘龙参12g、化州橘红4.5g、薤白7.5g、佛手6g、苏合香0.65g、鬼箭羽10g、芸薹子8.25g、黄花倒水莲22.5g、栝楼12g、鹿衔草22.5g。

[0060]实施例2中药组合物的制备
[0061]所述的中药组合物由以下重量份的各原料组成：黑芝麻10g、楮实15g、枸骨叶16g、铁皮石斛25g、蓝布正15g、盘龙参15g、化州橘红5g、薤白6g、佛手5g、苏合香1g、鬼箭羽8g、芸薹子8g、黄花倒水莲20g、栝楼12g以及鹿衔草20g。

[0062]实施例3中药组合物的制备
[0063]所述的中药组合物由以下重量份的各原料组成：黑芝麻15g、楮实10g、枸骨叶25g、铁皮石斛20g、蓝布正25g、盘龙参10g、化州橘红3g、薤白10g、佛手8g、苏合香0.5g、鬼箭羽5g、芸薹子5g、黄花倒水莲25g、栝楼10g以及鹿衔草25g。

[0064]实施例4用于治疗阿尔茨海默病的水煎剂的制备
[0065](1)按照以下重量称取各原料：
[0066]黑芝麻36g、楮实37.5g、枸骨叶60g、铁皮石斛75g、蓝布正58.5g、盘龙参36g、化州橘红13.5g、薤白22.5g、佛手18g、苏合香1.95g、鬼箭羽30g、芸薹子24.75g、黄花倒水莲67.5g、栝楼36g、鹿衔草67.5g。

[0067](2)第一次煎煮
[0068]将步骤(1)称取得到的各原料混合后，放入20000mL实验用高颈圆底烧瓶中，加入蒸馏水8200mL，将584.7g中药组合物浸泡2h，之后煎煮中药组合物2h，经过5层白色纱布、15层白色纱布分别过滤，得到第一次中药组合物滤液和残渣；
[0069](3)第二次煎煮
[0070]将获得的中药组合物残渣放到20000mL实验用高颈圆底烧瓶中，加入蒸馏水8200mL，浸泡中药组合物残渣2h，煎煮中药组合物残渣2h，经过5层白色纱布、15层白色纱布分别过滤后，得到第二次中药组合物滤液；
[0071](4)将第一次中药组合物滤液和第二次中药组合物滤液合并，混匀，即得到用于治疗阿尔茨海默病的水煎剂。

[0072]实验例1本发明中药组合物治疗阿尔茨海默病的药效学试验
[0073]1实验材料
[0074] 1.1实验动物
[0075]雄性7月龄APP/PS1双转基因小鼠(APPswe/PS1dE9双转基因小鼠，世界公认阿尔茨
海默病小鼠动物模型)由哈尔滨医科大学基础医学院解剖教研室吴树亮教授购买；野生型C57BL/6小鼠由黑龙江中医药大学中医药研究院周忠光教授购买于北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK(京)2012-0001。

所有动物常温常湿饲养于黑龙江中医药大学实验动物中心，并由黑龙江中医药大学实验动物中心李宝龙副主任负责APP/PS1双转基因小鼠及野生型C57BL/6小鼠的常规给药、饲养。

[0076] 1.2实验试剂
[0077]本发明阳性对照药物多奈哌齐购买于中国重庆植恩药业有限公司；中药组合物黑芝麻12g、楮实12.5g、枸骨叶20g、铁皮石斛25g、蓝布正19.5g、盘龙参12g、化州橘红4.5g、薤白7.5g、佛手6g、苏合香0.65g、鬼箭羽10g、芸薹子8.25g、黄花倒水莲22.5g、栝楼12g、鹿衔草22.5g，每份中药组合物的原药材重量为194.90g，均由黑龙江中医药大学周忠光教授购买于黑龙江中医药大学第一附属医院，由黑龙江中医药大学第一附属医院内分泌科栗明副主任医师鉴定该中药组合物可配伍组合使用，最后由黑龙江中医药大学田明教授将中药组合物制备成水煎剂、干粉、-80℃冰箱保存备用；APP、Aβ1-40、Aβ1-42、IL-1β、TNF-α和IL-6等酶联免疫试剂盒购买于南京建成生物工程研究所；RAGE、NF-κBp65购买于Boster公司；总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛试剂盒等购买于南京建成生物工程研究所；β-actin、VCAM-1及ICAM-1购买于Santa Cruz Biotechnology公司；RNeasy Mini试剂盒购自QIAGEN；PrimeScript RT试剂盒购自中国大连TaKaRa Biotechnology；PrimeScript RT试剂盒购自中国大连TaKaRa Biotechnology，其他所需试剂均为国产分析纯。

[0078] 1.3实验仪器
[0079]组织脱水机购自于德国Leica公司；TGL-16G台式离心机购自于上海安亭科学仪器厂；6100型RT-雷杜酶标仪购自于美国RT公司；组织展片机购自于德国Leica公司；Morris水迷宫购自于安徽淮北正华生物仪器设备有限公司；电热恒温鼓风干燥箱购自于天津市泰斯特仪器有限公司；SIMF124制冰机购自于日本SANYO公司；HMIAS高清晰度彩色医学图文分析系统购自于武汉千屏影像技术有限公司；TECNAIG2型透射电子显微镜购自于FEI/Philips 公司；PLZOZ-S电子天平购自于梅特勒-托利多仪器有限公司；HP型凝胶成像分析系统购买于美国ProteinSimple公司等。

[0080]2方法
[0081] 2.1中药组合物提取
[0082]中药组合物包括黑芝麻12g、楮实12.5g、枸骨叶20g、铁皮石斛25g、蓝布正19.5g、盘龙参12g、化州橘红4.5g、薤白7.5g、佛手6g、苏合香0.65g、鬼箭羽10g、芸薹子8.25g、黄花倒水莲22.5g、栝楼12g、鹿衔草22.5g，共15种原药材，每份中药组合物的原药材重量为194.90g。

[0083]实验需要配制3倍的中药组合物原药材(584.70g中药组合物)，将584.70g中药组合物放入20000mL实验用高颈圆底烧瓶中，加入蒸馏水8200mL，将584.7g中药组合物浸泡2h，之后煎煮中药组合物2h，经过5层白色纱布、15层白色纱布分别过滤，将会得到第一次中药组合物滤液和残渣。

[0084]实验需要将获得的中药组合物残渣放到20000mL实验用高颈圆底烧瓶中，加入蒸馏水8200mL，浸泡中药组合物残渣2h，煎煮中药组合物残渣2h，经过5层白色纱布、15层白色
纱布分别过滤后，将会得到第二次中药组合物滤液。

[0085]实验需要合并第一次中药组合物滤液和第二次中药组合物滤液，混匀后，将所有滤液放于蒸发容器内，将蒸发容器放于实验室干燥箱内进行干燥6d(温度为70℃)，每天6次(每次间隔4h)查看干燥箱内的液体蒸发情况，最终将会得到中药组合物干膏172.65g，此中药组合物出膏率＝[中药组合物干膏(g)/中药组合物原药材(g)]×100％，按照公式经过计算得到(172.65g/584.70g)×100％＝29.53％，可见，中药组合物出膏率为29.53％。

[0086]实验需要使用粉碎机将中药组合物干膏进行粉碎，304不锈钢筛网(60目)过滤1次，304不锈钢筛网(100目)过滤1次，最终得到中药组合物干粉169.81g，中药组合物出粉率＝[中药组合物干粉(g)/中药组合物原药材(g)]×100％，经过计算得到(169.81g/ 584.70g)×100％＝29.04％，可见，中药组合物出粉率为29.04％。

[0087]实验配制中药组合物原药材重量为584.70g，最终得到中药组合物干粉169.81g，即粉碎机粉碎及筛网过滤损失2.84g，中药组合物损失率＝[中药组合物干膏(g)－中药组合物干粉(g)]/中药组合物干粉(g)×100％，经过计算得到[(172.65g-169.81g)/172.65g]×100％＝1.64％，可见，中药组合物损失率为1.64％。

[0088]最终，3份中药组合物584.70g经过水煮后可以获得中药组合物干粉169.81g，即1g 中药组合物干粉相当于中药组合物原药材3.44g。

将中药组合物干粉169.81g进行分装，20g/袋，最后1袋9.81g，同时标记每袋中药组合物干粉重量，-80℃冰箱内保存备用。

[0089] 2.2中药组合物剂量的设定
[0090]中药组合物包括黑芝麻12g、楮实12.5g、枸骨叶20g、铁皮石斛25g、蓝布正19.5g、盘龙参12g、化州橘红4.5g、薤白7.5g、佛手6g、苏合香0.65g、鬼箭羽10g、芸薹子8.25g、黄花倒水莲22.5g、栝楼12g、鹿衔草22.5g，共15种原药材，每份中药组合物的原药材重量为194.90g/成人标准体重。

194.90g/成人标准体重是经过黑龙江中医药大学附属第一医院内分泌科栗明副主任医师鉴定后的常规患者剂量。

按照小鼠和人的体表面积比值(0.0026：1)进行计算，可以获得标准体重小鼠中药组合物剂量是[(194.90g×0.0026)/0.02kg]×50＝25.34g/kg，此即中药组合物中剂量为25.34g/kg。

按照中药组合物高剂量是中药组合物中剂量的2倍，而中药组合物低剂量是中药组合物中剂量的1/2，因此，实验设定中药组合物高剂量为(25.34g/kg)×2＝50.68g/kg，中药组合物低剂量为(25.34g/kg)/2＝12.67g/kg。

最终，本发明中药组合物高、中、低剂量将分别设定为50.68g/kg、25.34g/kg、12.67g/kg。

[0091] 2.3阳性药物剂量的设定
[0092]多奈哌齐是一种长效阿尔茨海默病治疗药物，其能够可逆性地抑制乙酰胆碱酯酶，增加受体部位乙酰胆碱含量，进而改善阿尔茨海默病患者的病情。

多奈哌齐常规剂量为5～10mg，依据小鼠和人的体表面积比值为(0.0026：1)进行计算，将会获得多奈哌齐常规剂量最小值为(5×0.0026×50)mg/kg＝0.65mg/kg且最大值为(10×0.0026×50)mg/kg＝1.3mg/kg，换算成分子是单位g后，获得多奈哌齐常规剂量最小值为0.00065g/kg且最大值为0.0013g/kg，经过黑龙江中医药大学周忠光教授评定，本实验选择0.001g/kg多奈哌齐作为常规剂量开展治疗阿尔茨海默病模型小鼠的实验工作。

[0093] 2.4模型筛选及实验分组
[0094]实验选择雄性7月龄APP/PS1双转基因小鼠60只为筛选对象，剪取APP/PS1双转基因小鼠鼠尾0.6cm进行基因鉴定，设计引物β-actin(446bp)：上游引物：5’-GAG ACC TTC。