实验五细菌的革兰氏染色PPT文档16页

9.混合涂片染色
注意事项：
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色 过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性 菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被 染成革兰氏阳性菌。
2.菌龄也有影响。若菌龄太老，由于菌体死亡 或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。
3.不要涂片太厚，会造成假阴性或假阳性。
五、实验结果：
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
6．脱色 斜置载玻片，滴加95％乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为
止，大约需时20~30s，随即水洗。
7．复染 将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红染液复染
1min，水洗，ห้องสมุดไป่ตู้去残水晾干。
8、镜检 待标本片置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物
后用油镜观察，注意细菌细胞的颜色。绘出细菌的形态 图并说明革兰氏染色的结果。
3．固定 固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒
精灯火焰外层尽快的来回通过2~3次，共约2~3秒钟，并不时以 载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60℃）,放置 待冷后，进行染色。
4．初染 用草酸铵结晶紫染色1-2min后倾去染液，水洗至流出水无色。
5、媒染 先用碘液冲去残留水迹，再加碘液覆盖媒染1min后水洗。
实验五细菌的革兰氏染色
实验五 细菌的革兰氏染色法
三、实验仪器及材料
1.仪器：显微镜、酒精灯等 2.实验材料：
菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 染色剂：草酸铵结晶紫染液、碘液、
番红、95%乙醇
四、实验内容与步骤
革兰氏染色流程图
涂片 干燥 固结定晶紫染色 碘液媒染 水洗 95%酒精脱色 水洗 番红染色 水洗 晾干 镜检
红色菌：革兰氏阴性菌 紫色菌：革兰氏阳性菌
菌名
大肠杆菌 金黄色葡
萄球菌
菌体形态
菌体颜色
G+或 G﹣
六、思考题
1、造成革兰氏染色结果不正确（假阴 性或假阳性）的主要原因有哪些？
2、你认为革兰氏染色法中那个步骤可 以省略？在什么情况下？
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
水洗
1．涂片
取干净的载玻片于实验台上，在载玻片的中央滴一滴无 菌蒸馏水，将接种环在火焰上烧红，待冷却后从斜面挑取少 量菌种与玻片上的水滴混匀后，在载玻片上涂布成一均匀的 薄层，涂布面不宜过大。
2．干燥
涂片最好在室温下使其自然干燥，有时为了使之干得更 快些，可将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在 酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加 热时间过长，以防标本烤枯而变形。