AE灭活疫苗ELISA抗体与攻毒保护效果试验

Poultry Science
护W试-/
罗文仁&，李忠晓2,李富金+;
(1.北京市华都峪口禽业有限责任公司，北京101206;
2.山东鲁丰集团有限公司，山东安丘262100;
3.齐鲁动物保健品有限公司，山东济南250100)
摘要：用禽脑脊髓炎灭活疫苗免疫28日龄S P F鸡10只，5只对照不免疫，免疫后21d采血分离血清，E L IS A抗体效价检测，采血后马上进行攻毒，攻毒后观察统计发病情况，在试验鸡出现典型症状及攻毒后21d试验结束日，存活鸡全部采血测抗体，对比抗体与攻毒保护效果之间的关系。

结果表明：攻毒前免疫鸡E L IS A抗体阳性率为80%，攻毒保护效果>80%，对ELISA 抗体阳性鸡攻毒均有保护。

关键词：禽脑脊髓炎灭活疫苗；E L IS A抗体；攻毒保护；正相关
中图分类号:S858.312.4文献标识码：B
禽脑脊髓炎（AE)是一种主要侵害幼鸡的病毒病，以运动失调和头颈部震颤为特征，产蛋鸡可出现一时性产蛋急剧下降，种蛋孵化率降低，死 雏、弱雏增多等%1]。

国内1980年开始有疑似病例报道，1983年确诊该病存在，此后国内多个省份都有该疫病流行的报道%2]，国内对该病的相关研究也比较多，并研制了有效疫苗用于该病防控，通过疫苗免疫该病得到了有效控制。

近几年发病又开始增多，呈区域流行趋势。

禽脑脊髓炎病毒感染无抗体雏鸡有明显临床症状，但青年鸡、产蛋鸡无明显临
收稿日期：2018-07-19
!通讯作者：李富金（1971.11-),男，汉族，兽医临床硕士，高级兽医师，从业20年，主要从事猪、禽、毛皮动物的兽医临床诊断及技术服务工作。

（-m ail: lifojin92@。

文章编号：1673-1085(2018)08-0051-04
床症状，也无特征性肉眼病理变化，给该病临床诊断带来一定困难，常通过采集发病鸡脑组织进行SPF鸡胚连续传代分离病原、人工感染试验、PCR、琼脂扩散试验（AGP)、ELISA检测血清中抗体等进行鉴定、诊断和控制该疫病，其中ELISA检测方法是一种快速的检测系统，可以准确、及时了解鸡群抗体阳性率及数值高低%3]，但抗体值与攻毒保护之的相 关性 ，的是
的关。

1材料和方法
1.1材料
1.1.1试验用鸡28日龄S PF鸡15只，购自济。

1.1.2试剂盒ELISA试剂盒，IDEXX公司生产。

1.1.3疫苗及强毒禽脑脊髓炎灭活疫苗，齐鲁
成就未
来
家畲#$ 2018.08
动物保健品有限公司生产（批号：1612006);禽脑 脊髓炎强毒，山东省农业科学院家禽研究所提供。

1.1.4试验器具及设备负压隔离器、酶标仪、离 心机、一次性注射器、离心管等。

1.2 方法
1.2.1 试验分组选取体况相同的28日龄SPF 鸡15只，随机分为试验组和对照组2组，其中试 验组10只，每只肌肉注射禽脑脊髓炎灭活疫苗 0.5m h 对照组5只，每只注射生理盐水0.5m 1。

1.2.2 试验方法试验鸡与对照组鸡都进行编 号，饲养在同一个负压隔离器内，为了容易辨认， 对照鸡头部染为绿色。

试验组免疫疫苗后212,全 部鸡只采血，1m 1/只，分离血清，ELISA 抗体效价检 测，采血后全部试验鸡采用脑内接种方式攻毒(按 照禽脑脊髓炎灭活疫苗效力检测规程操作），每日
毒鸡
况，
毒鸡
和
攻毒后21d 试验结束，采集存活鸡血，分离血清， 检测抗体，统计攻毒鸡 况，与检测抗体进行
对。

1.2.3 血清抗体检测方法 ELISA 抗体检测按照 酶联免疫吸附试验规程进行。

2
试验结果
2.1 临床观察结果
2.1.1免疫副反应试验组与对照组鸡只临床表现均未见异常，采食、精神与免疫前无差异。

2.1.2发病鸡临床症状攻毒后11d ，试验组鸡只出现明显临床症状，严重的表现为精神不振、腹 泻及瘫痪（见图1)、头颈震颤等，最后衰竭死亡 (见图2);轻微的出现精神不振、不愿意运动、驱 行
等。

试验鸡均未发现有视力问题及眼。

图1
发病鸡精神不振、瘫痪
图2
瘫痪鸡衰竭死亡
2丄3 发病及存活结果攻毒后21d ，试验组有1只发病（发病率10<)，10只存活（存活率100<); 对照组5只全部发病（发病率100<)，有1只存活 (存活率20<)。

2.2抗体结果结果显示：免疫后21d ，试验组抗 体阳性率为80<，均值为1042.17;对照组抗体阳 性率为0,均值为28.68;攻毒后11d ，发病鸡表现 明显临床症状，试验组抗体阳性率90%，均值为 2789.36;对照组抗体阳性率为0,均值为84.44;攻 毒后21d ，试验结束，试验组抗体阳性率100<，均 值为2254.15;对照组抗体阳性率为20<，均值为 570.85。

试验组、对照组抗体值及攻毒结果见小表1。

3
小结与分析
3.1 禽脑脊髓炎灭活 疫苗 疫
， 疫
21d ，攻毒保护效果高达90<。

攻毒前后的抗体阳 性
3。

120%
100% 、私'
80%60%40%20%0%
100%
-^66%—
■。

m
產
试验组对照组
文
：
♦
爷
♦图3攻毒前后抗体阳性率、发病率及成活率结果
3.2 对 毒 ELISA 体 与 毒
结果，可以看出试验鸡免疫抗体阳性（！396)鸡攻 毒
100%
; 对照 组 ELISA
体 为 性，
100% ，
ELISA 体 性与 毒 保
正相关的，因此，临床上可以通过抽检免疫鸡群的
ELISA 抗体阳性率，来了解鸡群对该病的保护效
果，抗体阳性率越、值越高，保护效果越好。

<§>
科学养
禽
表1试验组、对照组抗体值及攻毒结果
分组编号攻毒前抗体攻毒11d抗体攻毒 21d抗体攻毒后21d发病情况22812200.872051.45982.87健活
2282964.712449.945112.43健活
22882259.85231.711457.38健活
2284679.232958.242059.92健活试验组
2286185.372937.343487.03健活
22870174.461311.37发病（瘸腿）
22891555.964437.212407.08健活
2290558.352234.642059.92健活
3811495.843157.37572.27健活
382521.572265.33091.24健活均值1042.172789.362254.15
阳性率80,90,100,发病率 10, 384 2.69113.56-瘫痪、死亡
3850229.012854.26瘸腿、头颤对照组3860 2.69-瘫痪、死亡387074.28-瘫痪、死亡
388140.74 2.69-瘫痪、死亡均值28.6884.44570.85
阳性率0020,发病率100,注：禽脑脊髓炎Elisa抗体S/P!0.20,即抗体！-%
3.3编号为2286的免疫鸡，攻毒时抗体为阴性
(185.37<396)，对照鸡发病时，其抗体值已经达到
2937.34,未见发病，怀疑是检测误差造成的。

3.4编号为2287#385的两只鸡，攻毒后发病，最
终耐过存活，攻毒后21d F ELISA抗体值均远大
于阳性值，但临床上有区别，2287为免疫鸡，临床
症状轻微，385虽然存活，但有明显后遗症（出现
点头症状）。

3.5对比免疫试验鸡在攻毒前后ELISA抗体均
值，先升后降，推测是疫苗免疫抗体继续增长达到
值的过，后 到 毒攻 后抗体 ，有
下降，攻毒前后不同阶段抗体见图4。

3000 2500 2000 1500 1000 500
______________________7?^^^______
试验组
_对照组
570.35 L
23.68'84.44
攻毒前抗体均值攻毒l i d抗体均值攻毒21d抗体均值
图4攻毒前后不同阶段抗体均值
判为阳性，S/P<0.20阴性及<396为阴性。

3.6非免疫对照鸡攻毒前的ELISA抗体均值为
28.68,攻毒后ELISA抗体均值为84.44,抗体虽有
产生，但值不高，很难达到有效抵抗病毒攻击（即
ELISA抗体达到阳性的程度）的值（图4)，鸡仍然
发病。

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Avian Encephalomyelitis inactivated vaccine immunization SPF chicken
ELISA antibody and poison attack protection effect after test
LUO Wenren1，LI Zhongxiao2，LI Fujin 3
(1 .Beijing huadu Yukou Poultry co.,LTD Beijing 1O 12O 6&
2.Shandong Loften Group co.，LTD Anqiu 2621OO &
3.Qilu animal health products co.，LTD Jinan 25O 1OO )
Abstract:Asvian Encephalomyelitis inactivated vaccine immue 10 SPF chickens age of 28，
5 contrast is not immune ，21 days after the immune serum blood separation，antibody ELISA
detection，to attack immediately after blood poison，observation statistics after work poison ， experimental chicken typical symptoms and poison attack after 21 days end of the test ， live chickens in pursuance of antibody ， compare the antibody and poison the relationship between the protective effect.Results show :that the attack before the poison immune chicken ELISA antibody positive rate was 8O Z ，poison protection effect >80%，it can protect ELISA antibody positive chickens against poison .
Key words: Avian Encephalomyelitis inactivated vaccine & ELISA antibody & poison protection
work & positive correlation .
!
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科学养
禽。