培养基模拟灌装无菌生产工艺验证规划方案

审批
部门姓名签字日期起草人质量管理部
起草人生产技术部
起草人针剂车间
审察人针剂车间
审察人生产技术部
审察人质检中心
审察人质量管理部
赞同人质量负责人
发散部门：
培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺考据小组
一、归纳
厂区无菌操作生产线，按2010 版 GMP及其附录要求进行设计，是专用于小容量注射剂非最后灭菌产品
生产使用。

某某产品因无法进行F0≥8 分钟湿热灭菌，以达到SAL≤ 10-6，但处方可以经过微生物滞留过滤器过滤，
故采用除菌过滤和无菌工艺相结合的灭菌方法。

无菌生产工艺是制药领域中最难的工艺之一，保证产品无菌是该工艺最大的难点，减少无菌工艺药品污染风险的两项重要措施为：①人员的培训②无菌工艺考据。

按 SFDA化学药品注射剂基本技术要求：培养基灌装考据是对设施、环境以及人员操作的一种系统考据，
是判断无菌保证水平的要点手段。

故在正式生产前必定按某某产品生产工艺进行培养基模拟灌装考据。

1 本次考据要点生产工艺流程图
安瓿的冲刷称量配料工器具冲刷和灭菌
除菌过滤
干热灭菌
灌封
灯检
D级背景 C 级背景 A 级背景一般区
2考据原理
将培养基裸露于设施、容器密封系统的表面和要点环境条件中，并模拟实质生产达成工艺操作。

对装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长并议论结果，确定实质生产中产品污染的可能性。

对于失败的考据进行菌种解析并检查，确认并解决可能造成失败的原因后，重新进行考据。

3考据次数
按 2010 版 GMP附录 1 要求因该生产线为新建厂区设施，为培养基模拟灌装试验的首次考据，故需进行
连续三个批次的考据活动。

二、考据目的
1经过该工艺考据活动证明新设计厂房采用既定的无菌生产工艺能保证产品的无菌要求；
2经过该工艺考据活动证明无菌操作相关人员资格，降低人员带入无菌的风险；
3经过该工艺考据活动保证生产吻合现行GMP法规要求。

三、考据范围和推行时间
1 本考据方案适用于厂区小容量注射剂车间无菌生产线正式投入使用前某某品种小容量注射剂无菌生产工艺培养基模拟灌装考据活动；
2 计划考据明行时间为201
3 年 3 月 ~
4 月连续三个批次。

四、考据小组和职责
1 考据小组
依照考据的内容和考据管理文件要求，建立考据小组，考据小组成员见下表，小组人员应在最后考据报告中签字确认。

在考据明行前，方案起草人对付所有相关参加人员进行考据方案的培训，做好培训记录，并将记录附于考据报告后。

姓名职务
生产技术部经理
技术管理员
车间主任
车间技术副主任
配料岗位人员
洗瓶岗位人员职责
考据小组组长，负责考据文件的审察和工作整体安排和推行，组织检查和办理考据过程中出现的异常情况
负责考据文件的起草，供应考据过程中相关技术支持，参加考据异常情况检查工作
安排车间岗位人员配合考据工作的推行，对考据过程的异常情况进行协助检查，负责考据文件的审察
负责考据文件的起草，供应考据过程中相关技术支持，参加考据异常情况检查工作
负责配料操作和除菌过滤以及灭菌操作并记录
负责洗瓶和安瓿灭菌操作并记录
灌封岗位人员负责灌封操作并记录
灯检岗位人员负责灯检操作和产品7 天和 14 天的观察与统计
维修员负责考据过程中设施的维修工作，参加考据模拟维修活动
QC负责考据相关检验工作和检验数据收集统计工作，参加考据过程异常情况检查工作，负责考据结束后培养基的灭活办理工作QC经理负责考据文件的审察，协调考据相关检验工作，参加考据异常情况检查办理
QA负责考据文件的审察和文件的归档，协调各部门相关工作详尽安排
QA保证考据活动按方案执行，保证考据活动吻合GMP要求，负责相关
取样工作
QA负责考据文件的起草，组织考据方案相关培训，参加考据异常情况检查工作
质量负责人负责考据文件的赞同，考据证书的签发
2各部门职责
质量管理部
协助考据活动的执行
参加考据异常情况的检查和办理
参加考据文件的起草工作
负责考据过程的取样
负责生产督查，保证所有数据的真实性和完满性
负责考据文件的审批和归档
质检中心
协助考据活动的执行，供应必要的取样工具
参加考据异常情况的检查和办理
负责相关检验工作，供应相关检验数据
负责最后培养基的办理
生产技术部
负责考据活动的执行
负责考据数据的收集和相关文件的起草
负责组织考据过程中异常情况的检查和办理
生产车间
负责考据相关操作活动
参加异常情况的检查和办理
参加考据文件的起草和审察
工程部
协助考据活动保证其顺利达成
维修人员参加考据活动的推行
物料管理部
协助供应考据活动过程中所需物料
五、风险评估解析表
经过风险评估，确认本次考据活动需要考据的项目
可严可
风险
风险描述能重测风险控制措施考据项目
指数
性性性
环境达不到相建立厂房干净消毒规程，定培养基灌装全程对环境进中高高高
关生产要求期环境监测并趋势解析行动向监测
人员培训并换衣核查上岗，所有相关人员，模拟生产实人员造成污染中高高高每批对进入无菌区人员取际活动后取样，对最多赞同
样监控人数进行挑战
考据灭菌后储蓄方式和有相关考据操作与正常生产
灭菌后的衣服，效期，操作人员培训核查上一致，生产结束后对要点表器具等发生二低高高高岗，生产过程中进行严格监面取样，储蓄方式和有效期次污染控，生产结束后与产品接触在相关干净灭菌考据中完
表面取样成
所有灭菌装载和参数须经
灭菌效果未达
低高中中过考据，按经考据的操作方在设施考据中达成
到
式灭菌
配液 / 灌封高出
依照工艺规定工序最大时低中低中工艺规程中明确规准时限
规准时限要求间挑战进行考据
灌封设备故障人员培训，使用前经过试模拟维修操作进行挑战验中中低中
并维修机，并如期设施保护保养证
过滤后对除菌过滤器进行在无菌过滤系统工艺考据
过滤系统有效
低高高高起泡点测试，使用前进行清中达成，并取过滤后的药液性和污染
洁和灭菌办理进行无菌检查
所有相关工具，记录等进入
取样工具，记录无菌区随厂房消毒，临时需
中低高高在消毒收效考据中达成
等传入污染要的经酒精消毒和紫外加
消毒从传达窗进入
清洁工具和清干净工具需灭菌，干净消毒
在无菌过滤收效和设施验
洁消毒剂使用低高高高剂需除菌过滤后进入无菌
证中达成
带来的污染区
在洗烘线考据中达成灭菌
灌封所用安瓿工艺规程规定安瓿的灭菌收效和单向流保护，动向监低高高高
造成污染参数和暂存时间测灌封前地域，对灭菌后的
安瓿进行取样
压缩空气带来低中高高压缩空气加终端过滤器，并压缩空气系统考据中达成
的污染如期确认过滤器的完满性，
周期性进行压缩空气系统
考据和监测
生产过程中，异
常操作造成的中低中中
严格异常操作的要求，可
能污染的药品报废办理对于
模拟中控，倒瓶，倒液，破
瓶等情况进行挑战考据
风险
产品暴露过长挑战工艺规程中赞同的最中低高低严格控制赞同的灌封速度
带来的风险慢速度进行灌封
六、考据项目的合格标准与详尽活动
1保证已达成以下考据和确认工作：
WFI 和 PW系统考据
HVAC系统的考据
压缩空气系统的考据
过滤系统的考据
无菌区人员换衣确认
灭菌系统灭菌收效和储蓄期确认
洗烘灌联动线确认
无菌区干净消毒方法考据
恒温恒湿箱确认
配制罐的确认
无菌解析方法学考据
2保证以下文件已有草案或见效
某某品种的生产工艺规程某
某品种的批生产记录
配料岗位SOP
工器具办理岗位SOP
洗烘瓶岗位SOP
灌封岗位SOP
各相关设施的干净、操作和保护保养SOP
3考据可接受标准
依照《药品生产考据指南2003 版》相关规定：无菌性的可置信限度为95%，产品赞同污染概率不得大于 %（即无菌分装药品的无菌保证水平SAL不得低于10-3）。

其合格标准见下表
模拟灌装数量/ 瓶污染控制数量/瓶
2996～4742≤ 0
4743～6294≤ 1
6295～7751≤ 2
≥7752≤ 3
依照《药品生产质量管理规范2010 版》附录无菌药品第47 条相关规定：养基灌装容器的数量应当足以
保证议论的有效性。

批量较小的产品，培养基灌装的数量应当最少等于产品的批量。

培养基模拟灌装试验的目标是零污染，应当依照以下要求：
（一）灌装数量少于5000 支时，不得检出污染品。

（二）灌装数量在5000 至 10000 支时：
有 1 支污染，需检查，可考虑重复试验；有 2 支污染，需检查后，进行再考据。

（三）灌装数量高出10000 支时：
有1 支污染，需检查；有 2 支污染，需检查后，进行再考据。

（四）发生任何微生物污染时，均应当进行检查。

综合上述标准，本次考据数量定在 5000~6294 瓶之间，灌装量为2ml ，且其污染数不得高出 1 瓶。

4 考据活动前其他准备工作
经确认合格的胰酶酪胨大豆肉汤培养基(TSB)250g× 2 瓶，经湿热灭菌并用橡胶塞封口的无菌取样试管20 支，接触碟60 个，沉降菌培养皿15 个，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、黑曲
霉、生孢梭菌，枯草芽孢杆菌和白色念珠菌等各样菌种，个， 8000 支 5ml 规格的无色安瓿瓶，能控制23~28℃和
API 鉴别菌种试纸，经灭菌的具塞三角瓶
30~35℃的培养地域以及便于观察和运输的中转
10
箱若干。

5 工器具灭菌和准备
将模拟灌装活动中需要用到的生产工器具、干净服和设施提前一天进行灭菌，需要使用的消毒剂提前一天进行无菌过滤准备，将无菌操作区提前一天按干净按相关 SOP要求储蓄，将SOP要求进行干净消毒，
按生产工艺流程提前一天领取TSB和相关包材存放在车间内。

6 配料
配料前取该岗位所需注射用水进行内毒素检查，保证内毒素检验合格后，取胰酶酪胨大豆肉汤培养基
(TSB)360g 按《配料岗位操作SOP》加入已干净灭菌的配料罐中，慢慢加入60℃以上注射用水12L，搅
拌10 分钟使溶成平均溶液（注：此处按实质生产工艺操作，将其中的原辅料换成 TSB）。

QA用灭菌的具塞三角瓶在配料间取样 50ml，在瓶身注明取样地址、取样数量、取样时间和样品名称后送质检中心测
定溶液中微生物负载。

其合格标准应≤1cfu/ml 。

7 除菌过滤
用经提前一天灭菌（可否使用前进行完满性测试按新工艺规程定）的μ m聚醚砜除菌过滤器，过滤上述
培养基溶液。

QA
取
50ml× 2瓶过滤完的培养基，在瓶身注明取样地址、取样数量、取样时间和样品名
称后送质检中心进行14 天培养的无菌性检查（若有菌生长需对样品进行菌种判断），其他量分装于已清
洁灭菌的中转储蓄罐中。

滤芯在过滤完后进行气泡点测试，以确认滤芯的完满性。

另取经除菌过滤的培
养基 180ml 分装于 18 支 10ml 的试管中，送质检中心进行培养基的微生物生长实验。

培养基无菌性检查
方法：其中一只三角瓶样品在23~28℃培养 14 天；另一支三角瓶在30～ 35℃培养 14 天。

可接受标准：两只三角瓶中的培养基在14 天内应无任何微生物生长。

培养基的微生物生长试验：
方法：质检中心QC人员将 QA所取的 18 支样品，在 2 支 10ml 试管中接种枯草芽孢杆菌，接种量＜100cfu/管，另取一支作为空白比较；在 2 支 10ml 试管中接种白色念珠菌，接种量＜100cfu/管，另取一支作为
空白比较。

其他每 2 支接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、黑曲霉、生孢梭菌，接种量＜100cfu/ 管，分别另取 4 支作为空白比较。

接种后盖塞、封口并分别在30～ 35℃（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、
枯草芽孢杆菌、生孢梭菌）和23～28℃（白色念珠菌、黑曲霉）培养7天。

可接受标准： 7 天内接种的各试管的TSB培养基中应出现明显的所接种的微生物的生长，且空白比较管
应无菌生长则判断该培养基微生物性能生长试验吻合要求规定。

8 洗烘瓶
生产操作人员将提前一天领取的安瓿8000只，按《洗烘瓶岗位操作SOP》和相关工艺要务及时进行清
洗灭菌。

若洗烘瓶或灌封过程中耗费过大，应及时补充冲刷安瓿保证灭菌合格安瓿高出6294 瓶。

9 灌装加塞：将经地道烘箱灭菌合格的安瓿送入灌装线，开启灌装机，在与实质生产环境相同的条件下，
将过滤后的培养基溶液灌入安瓿内，并封口，调治装量为2ml ∕瓶，用干净区无菌空气代替惰性气体。

无菌灌装时限5~6 小时（由生产工艺规程定）。

全过程，设施慢速运行（灌装速度120 支 / 分钟）。

控制灌装模式，设置灌装前中后三个阶段，每个阶段约灌装2000 支，其他时间设施正常运行( 不走瓶 ) ，每灌封一盘及时记录好灌封时间和盘号放在装中间产品的盘内。

灌封完的样品及时传出无菌区。

最差灌装条件的模拟：
设施模拟维修：在灌封正常运行过程中，停灌30分钟，进行设施模拟维修，保持现有人员在操作间内，
维修结束按相应的干净SOP消毒后后标记设施再次运行后一盘样品（约230支），并在记录上做好备注。

模拟现场人员最大控制数
在灌装正常运行过程中，模拟现场最多人员赞同数，如7 人，标记该过程中生产出的一盘样品（约230支），并在记录上做好备注。

模拟灌装针 / 管调整、更换
在灌装正常运行过程中，进行紧急停机，模拟调整、更换灌装针/ 管 2 支或以上，标记更换针/ 管后灌装的一盘样品（约230 支），并在记录上做好备注。

模拟空瓶倒瓶、破瓶
在灌装正常运行过程中，模拟倒瓶，破瓶情况，停灌办理，办理结束后连续灌装，标记此后灌装的一盘
样品（约230 支），并在记录上做好备注。

模拟药液瓶破瓶
在灌装正常运行过程中，模拟有药液瓶破碎，停灌办理，办理结束后连续灌装，标记此后灌装的一盘样
品（约 230 支），并在记录上做好备注。

模拟中控抽样办理的过程
在灌装正常运行过程中，模拟三次抽样测定可见异物、含氧量和装量的过程，抽样过程中进行灌封，标记对应的三盘，并在记录中做好备注。

灌装过程的中间控制
接触碟和沉降菌的取样应做好空白比较。

人员表面微生物取样：对进入灌装地域的所有人员走开无菌区前进行很多于 5 个地址的用接触碟进行表面微生物取样，可采用样部位包括：手套、眼镜、手臂、额头、口罩和前胸以及取样人员认为可能污染
的地域。

合格标准为每个进入 A 级区操作人员每人平均数＜1cfu/ 碟（Φ 55mm），且每个碟子不得高出1cfu ；B 级区人员为≤ 5cfu/碟（Φ 55mm）。

沉降菌的动向监测：对灌装全过程中对付灌装 A 级地域进行全程动向沉降菌监测，每过 2h 更换取样碟，取样地址设为灌装针头处，出瓶口，和封口处以及取样人员认为可能污染的地域。

A 级区经时间折算后平均值＜ 1cfu/4 小时 / 皿（Φ 90mm），且每皿不得高出 1cfu/4小时。

对灌装地域悬浮粒子的全程动向监测：设施上自带监控系统必定满足所监控悬浮粒子数（≥μ m）≤ 3520/立方米的要求；若为外用悬浮粒子计数器取样，取样部位选定为尽可能凑近灌装处，合格标准为所监控悬浮粒子数（≥μm）≤ 3520/ 立方米。

对灌装地域的动向浮游菌取样：灌封过程中选定灌装针头处，出瓶口，和封口处以及取样人员认为可
能污染的地域进行浮游菌取样，每个部位取样 1 立方米，要求其折算后平均值＜1cfu/ 立方米。

操作达成后对要点设施表面取样：相关操作程序结束后，对要点设施表面进行取样，以消除设施污染，
取样部位包括：灌装针头，出瓶后转盘，暂存药液的储罐， A 级区的过滤器、呼吸器等，要求平均数＜
1cfu/ 碟（Φ 55mm），且每个碟子不得高出1cfu 。

对安瓿的取样：在考据过程的前、中、后期分别取 3 支已灭菌的安瓿瓶放置在装有足量已灭菌的无菌培
养基的三角瓶内，并做好标记，先后在23~28℃和 30~35℃环境内各培养七天，要求无菌生长。

所有进入无菌区人员均应登记进出时间。

10 灯检检查
剔除破瓶，将其他产品将已灌封达成的产品传入灯检地域，翻转三次保证培养基与包材内壁充足接触，按原灌
装盘号分别装盘送培养地域，每盘内放入原灌封物料标签和灯检合格数量。

11 培养
将灯检完的产品先放置在23~28℃环境内培养7 天，期间在第三天将所有产品翻转一次，在第七天观察
污染数；此后转入30~35℃环境中内培养7 天，在第七天培养结束后统计污染数。

接受标准：依照实质观察数，依照本文件和项目要求，5000~6294 之间，污染总数应≤ 1 支，若高出1支，除非有明确证明是破瓶所致，否则该考据失败。

发现被污染的样品应进行菌种解析。

12培养基阳性比较试验
因培养基灌装过程中，所有样品无菌过滤后进行了时限储蓄和高温灌封操作，为保证这些操作不影响培
养基的促生长性，故从灯检完产品抽取60 支进行样品阳性比较，分为 3 组，每组 20 支，其中一组西林
瓶中接种枯草芽孢杆菌（30～ 35℃培养），一组西林瓶中接种白色念珠菌（23~28℃培养），一组接种生
产现场已发现的菌种（若无则取消该组试验），接种浓度均小于100cfu/ 瓶，分别在相应温度下培养5
天。

5 天内最少 50%以上接种的各安瓿瓶中的经出现明显微生物生长的西林瓶，各组各取
TSB培养基中应出现明显的所接种的微生物的生长；对已 1 瓶进行镜检、 API 等已确定是增加的菌。

七、可能的偏差或漏项的办理
议论无菌模拟灌装试验结果的主要指标之一是微生物污染水平，若是试验结果证明其污染水平高出规定
的合格限度，则应马上停止生产，检查并记录污染产生的原因。

在检查结束并采用相应的措施后应重复
进行培养基无菌模拟灌装试验。

原因检查最少应包括以下项：
a、生产环境微生物监测数据；
b、生产环境悬浮粒子监测数据；
c、人员和设施污染的监测数据；
d、生产环境浮游菌监测数据；
e、操作间的空气流向、压差；
f、操作人员的操作方法、培训情况；
g、模拟灌装试验过程中的异常情况；
h、无菌室生产工具及其他用品的储蓄情况；
i、鉴别污染微生物的种、属，以搜寻污染源的线索；
j、无菌室的干净、干净堆规程的培训及执行情况；
k、无菌生产用设施的控制系统和监测系统的校正；
l、生产后过滤器的完满性检测结果；
m、相关产品、相关生产过程存在的问题等。

原因检查结束后，应依照检查所确定的或可能发生的原因拟定纠正或改进方案并予以推行。

当改进方案推行此后应重复模拟灌装试验。

八、再考据周期
1 当空气净化系统、灌封和过滤设施、除菌过滤和灌封工艺以及灌封操作人员重要改正后，应当重复进行培养基模拟灌装无菌生产工艺考据。

2 当空气净化系统连续停机高出 1 个月，重新开启生产前
3未出现异常情况时也需每半年最少进行一个批次培养基模拟灌装无菌生产工艺考据。

九、附件
《培训记录》 ,《表面微生物监测记录》，《悬浮粒子监测记录》，《沉降菌监测记录》，《浮游菌监测记录》，《菌种鉴别记录》，《细菌内毒素检测记录》，《确认相关考据和确认工作》，《确认相关文件》，《培养基信息确认表》，《 TSB培养基过滤前微生物限度检查》，《 TSB培养基无菌性检查记录》，《培养基微生物生长试验》，《安瓿瓶无菌检查记录》，《人员进出无菌区登记台账》，《培养基灌封试验产品培养过程温湿度记
录》，《模拟灌封样品培养最后结果记录》，《培养基微生物阳性比较培养结果》和《TSB（小容量注射剂多少规格）批生产记录》。

附件 1
确认相关考据和确认工作
项目考据报告文件号考据有效期至检查结论
WFI 系统考据吻合□不吻合□PW系统考据吻合□不吻合□HVAC系统考据吻合□不吻合□压缩空气系统考据吻合□不吻合□过滤系统考据吻合□不吻合□灭菌设施确认吻合□不吻合□灭菌储蓄和效期考据吻合□不吻合□洗瓶机确认吻合□不吻合□地道烘箱确认吻合□不吻合□灌装机确认吻合□不吻合□无菌区干净消毒考据吻合□不吻合□恒温恒湿箱确认吻合□不吻合□配制罐确认吻合□不吻合□无菌解析方法学考据吻合□不吻合□
备注
确认人 / 日期复核人 / 日期
附件 2
确认相关文件
文件名称检查结论文件名称检查结论
工艺规程吻合□不吻合□配料岗位 SOP吻合□不吻合□批生产记录吻合□不吻合□灌封岗位 SOP吻合□不吻合□工器具办理岗位 SOP吻合□不吻合□洗烘瓶岗位 SOP吻合□不吻合□
配制罐干净、操作和
吻合□不吻合□灭菌柜干净、操作和
吻合□不吻合□
保护保养 SOP保护保养 SOP
洗瓶机干净、操作和
吻合□不吻合□地道烘箱干净、操作
吻合□不吻合□
保护保养 SOP和保护保养 SOP 备注
确认人 / 日期复核人/日期
培养基信息确认表
培养基灌封考据的批号：
TSB培养基进厂批号供应商上海中科昆虫生物科技开发有限公司TSB培养基有效期至
培养基全称胰酪胨大豆肉汤培养基
说明书中的培养基的配取本品 30g, 加 1L 蒸馏水，加热溶解；分装， 121℃高压灭菌15min 。

若本品出制方法现结块，请勿使用。

备注：
确认人 / 日期：复核人/日期：
附件 4
TSB培养基过滤前微生物限度检查
培养基灌封考据批号
培养条件
试验方法将ml的TSB先在23~28℃培养48h，再在30~35℃培养48h，统计菌落数。

培养时间24h48h72h96h 菌落数 (cfu/ml)
结论□合格（≤ 1cfu/ml ）□不合格
确认人 / 日期：复核人 / 日期：
附件 5
TSB培养基无菌性检查记录
培养基灌封考据批号
培养日期
培养天数1234567891011121314 23~28℃培养
30~35℃培养
备注( 打“ - ”表示不长菌，打“ +”表示长菌 )
结论□合格（培养 14 天后均无任何微生物生长）□不合格
确认人 / 日期：复核人/日期：
培养基微生物生长试验
培养基灌封考据批号
试验日期
菌种名称菌种信息培养条件试管1试管2空白结论
枯草芽孢杆
菌
白色念珠菌
金黄色葡萄
球菌
铜绿假单胞
菌
黑曲霉
生孢梭菌
备注“+”表示阳性，“ - ”表示阴性
结论：□合格（所有接种管出现明显的所接种的微生物的生长，空白管显阴性）
□不合格
确认人 / 日期：复核人/日期：
附件 7
安瓿瓶无菌检查记录
培养基灌封考据批号
培养日期
取样时间先期中期后期
培养结果
备注( 打“ - ”表示不长菌，打“ +”表示长菌)
结论□合格（培养 14 天后均无任何微生物生长）□不合格
确认人 / 日期：复核人 / 日期：。