Waters FX液相硬件02HPLC简易操作流程李丹16879

Waters HPLC操作流程
一、准备仪器
1、安装色谱柱
根据方案找对应色谱柱，并安装
2、检查溶剂瓶
确定流动相、10% MeOH、50% MeOH等溶剂瓶中液体是否足够，管子是否均插到溶剂瓶底部。

3、开机，预热检测器。

开电脑，仪器及Empower → 输入帐号和密码→ Run Sample → 选择对应的项目以及HPLC编号→ 右击lamp on → Yes → reset UV/PDA→若未亮，重新尝试，点亮为止
4、Seal wash
Menu → Diag → Prime Seal Wash → Start→ Close. 密封圈清洗溶液为10% MeOH
5、Needle wash
Menu → Diag → Prime Ndl Wash → Start → Close. 洗针液为50% MeOH（或根据需要）
6、Wet Prime
Menu/Status → Status (1) → 在Composition中，将欲Wet Prime的溶剂输入100% → Direct Function → Wet Prime → OK → Wet Prime 的设定值→ OK。

重复上述的步骤直到对所有溶剂的Wet Prime执行完毕。

7、Purge Injector
Menu/Status → Status(1)画面，在设定溶剂的画面中设定适当的溶剂比例→ Direct Function → Purge Injector → OK→ Sample Loop体积清洗的倍数(原定值为6倍)，压缩测试(Compression Check)请先不需要测试→ OK。

8、设定流动相条件来平衡色谱柱
Menu/Status →Status (1) →在Composition中，将溶剂组成比例按照实验要求输入；
在Flow中，输入设定流速（需缓慢升）
在column Temperature中设定柱温。

此时仪器即用设定的溶剂组成比例和流速来平衡色谱柱。

二、建仪器方法
Instrument Method → Edit → W2690/5
→ File → Save as → 输入方法名称，comment处填写new → File → Save as method set → 输入方法组名称，comment处填写new
三、建序列
点击Sample的空白行建序列（或File-New-Empty Sample set），需要填写的地方有：Vail、Inj V ol（μL）、# of injs（进样针数）、Sample name、Function、Method Set/Report method、Run time、Column ID。

一般序列的顺序是Equilibrium →Blank →Working standard →Check standard →samples →BKS →Condition column，序列建好后→File →save/save as →输入name（comment填new）→run（comment填run）
四、查看谱图
Empower →Browse Project →对应项目和HPLC编号→OK →选中序列→Review
五、数据处理
建立数据处理方法（Process Method）
处理方法向导→Peak Width（目标峰峰宽）→Threshold（阈值，选择平稳的基线，至少30s）→目标峰积分的起止时间→NO →输入目标峰的名称name →勾选Calculate Suitability Results →输入V oid V olume Time→Noise value for s/n（选择Baseline noise）→Baseline 最小值为30 s，根据Run Time计算出%Run Time over which to Average（=30/run time (second) *100）→输入Baseline noise的起止时间→输入Method name（comment填new）→OK →关闭谱图
在Sample set name 中右击序列→选择Process…→勾选process，选择第三个use specific processing method，选择建立好的处理方法→勾选clear calibration （comment填new，password处输入密码）→OK →在Sample set name中右击该序列→view as →Result Sets →在Result set 中右击序列→Prewiew/Publisher →选中use the following report method，选择Peak Summary Report →OK →save report →命名，PDF格式保存至桌面。