3,5-二硝基水盐酸测定还原糖

3，5—二硝基水杨酸法
一、实验原理
在NaOH和丙三醇存在下，还原糖能将3，5—二硝基水杨酸（DNS）还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比，棕红色物质在540nm波长处有最大吸收，，其吸光值与还原糖含量呈线性关系。

查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量
COOH
OH
NO2
O2N
3,5-二硝基水杨酸（黄色）
还原糖
COOH
OH
NH2
O2N
加 热
碱 性
糖 酸
3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色）
++
此法具有准确度高，重现性好，操作简便、快速等特点，样品多时采用此法为最好。

二、实验方法
（一）配制3，5—二硝基水杨酸试剂
1、准确称取无水的3,5-二硝基水杨酸1.625g溶解待用。

2、无水氢氧化钠8g溶解后移入100 ml容量瓶,冷却后定容。

3、将水杨酸溶解液移入250ml容量瓶并加入81.25ml的氢氧化钠溶液，再加入3.75ml丙三醇溶解定容至250ml贮存于棕色试剂瓶中。

（以上试剂均为分析纯，水为蒸馏水）
（二）制作葡萄糖标准曲线及样品还原糖的测定
1、样品处理：液体食品根据还原糖含量确定稀释倍数；含二氧
化碳的软饮料先水浴除去二氧化碳；浑浊饮料先过滤。

2、准确称取0.5g已在98～100℃条件下干燥至恒重的无水葡萄糖，用蒸馏水定容至50ml，此时葡萄糖溶液的浓度是10mg/ml，取葡萄糖溶液0、1、2、
3、
4、
5、
6、7ml，分别加蒸馏水至10ml，配置0、1、2、3、4、5、6、7mg/ml的葡萄糖标准溶液。

3、取0、1、2、3、
4、
5、
6、7mg/ml的葡萄糖标准溶液各1ml，样液1ml分别置于25ml容量瓶中，各加入3,5-二硝基水杨酸溶液2ml，置沸水浴中煮2分钟进行显色，然后以流水迅速冷却，用水定容到25ml，摇匀。

4、以空白调零，在540nm处测定吸光度，绘制标准曲线，并计算样品中还原糖的含量。

表1 葡萄糖标准曲线制作
管号葡萄糖标准
液
（mL）
DNS
（mL）
蒸馏水定容
（mL）
葡萄糖浓度
（mg/ml）
光密度值
（OD540nm）
0 0 2 25 0
1 1
2 25 0.04
2 1 2 25
3 1 2 25
4 1 2 25
5 1 2 25
6 1 2 25
7 1 2 25
样液1 1 2 25
样液2 1 2 25
样液3 1 2 25
5、电脑绘制标曲
Excel→插入图表→散点图→系列→添加XY轴数据区域→添加标题→完成→右击任一点→添加趋势线→选择线性→选项→显示公式和显示R2→确定。