FS1272滴眼液对体外大鼠白内障晶状体的阻碍

FS－1272滴眼液对体外大鼠白内障晶状体
的阻碍
顾静周大兴陈安平朱晓燕王晶钱艳鑫
【摘要】［目的］研究FS1272滴眼液对硒性白内障的防治作用。

［方式］采纳离体晶状体培育方式，观看FS1272滴眼液对亚硒酸钠性白内障大鼠晶状体混浊程度，晶体中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化酶（GSH PX）、过氧化氢酶（CAT）活性，丙二醛（MDA）、可溶性蛋白（WSP）和不溶性蛋白（WIP）含量的阻碍。

［结果］FS1272滴眼液高、中剂量组晶状体混浊度明显低于模型组，SOD、CAT、GSH Px活性高于模型组，MDA和WIP含量低于模型组。

［结论］FS1272滴眼液可减轻晶体氧化损伤程度，从而起到防治白内障的作用。

【关键词】白内障；亚硒酸钠；大鼠；晶状体；Fs1272滴眼液
Abstract: ［Objective］ To study the preventive and therapeutic effect of FS1272 eye drops on cataract induced by Sodium selenite. ［Methods］ With the crystalline lens culture method in vitro, the influence of FS1272 eye drops on the cataract crystalline lens of rat induced by Sodium selenite was
observed,including the extent of the rat crystalline lens opaque,the activities of superoxide dismutase(SOD)，tathion peroxidase(GSH PX),catalase(CAT)，the quantities of malondialdehyde (MDA ),soluble protein(WSP) and insoluble protein(WIP) in lens.［Results］The extent of the crystalline lens opaque in high and middle dose group of FS1272 eye.
Key words：cataract; Sodium selenite; rats; crystalline
随着人们生活水平的提高和寿龄的延长，白内障(Cataract)已经成为目前世界性的首位致盲因素,同时也是我国第一名的致盲眼病［1］，而老年性白内障(Sinile Cataract, 简称SC)是最多见的白内障，在眼科为常见病、多发病，严峻阻碍老年人的日常生活和质量［2 3］。

目前尚未令人中意的防治白内障药物,因此寻觅经济高效平安的防治白内障的新药仍然是眼科医学研究的重点课题。

咱们采纳亚硒酸钠［47］体外诱发大鼠白内障模型来模拟老年性白内障。

观看大鼠晶状体的混浊程度转变，测定大鼠晶状体SOD、CAT、PSH Px等抗氧化酶活性、氧化产物MDA和WSP和WIP的含量［89］，旨在探讨新药FS1272滴眼液对抗白内障的作用及其机理，为临床预防和医治白内障提供确凿的实验依据。

1 材料
实验动物
Wistar雌性大鼠140只，体重80100克，由浙江中医药大学动物中心提供。

药品
FS1272干粉（属于多肽类物质，上海新药开发中心，批号060427），白内停滴眼液（武汉远大制药集团，批号060408），莎普爱思滴眼液（浙江平湖莎普爱思制药，批号060105）。

要紧试剂
亚硒酸钠（天津市天达净化材料精细化工厂，批号060410）；M199干粉（美国GiBCO公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料，批号060328）；MDA、SOD、GSH PX、CAT、考马斯亮兰试剂（南京建成生物工程研究所，批号060523）；其它试剂均为国产分析纯产品。

2 实验方式
培育液的制备与实验分组
在M199无血清培育液的基础上另加相应成份（胎牛血清除外），配成空白对照组、模型组、FS1272高剂量组、FS1272中剂量组、FS1272低剂量组、白内停组、莎普爱思组7种不同的培育液，完全溶解再过滤除菌，以后，加入已灭活过的胎牛血清使之最终浓度至10％；4℃冰箱分装保留。

新鲜完整晶状体的制备
颈椎脱臼法处死大鼠，迅速掏出眼球，洗净，剔除肌肉等组织，75％乙醇冲洗，青链霉素溶液（80万u/L）冲洗两次,将晶状体放入装有37℃预热过的M199无血清培育液的青霉素小瓶中。

在无菌室中超静台上用抗生素溶液清洗眼球，眼科剪由后路剪开眼球后壁，将巩膜向双侧分开，剥离晶状体，去净玻璃体，用M199无血清培育液冲洗两次，将晶状体后极向下，置入含M199有血清培育液的24孔板中，每孔一枚。

将24孔板置于37℃、5％培育箱中培育8h后，选取透明晶状体备用。

分组、给药、培育
将晶状体随机分为7组，别离放入上述7组含有不同培育液
的培育板中。

于37℃、5%CO2细胞培育箱中培育，每24h改换1次培育液；于培育的24h、48h、72h后观看晶状体混浊度，最后一次观看后检测晶状体相关生化指标。

晶体混浊度观看与记录
培育24h、48h、72h后在倒置显微镜下各观看一次，记录晶体混浊情形，同时用尼康4500数码相机照相。

晶体混浊度参照张家萍等［10］的标准分级，Ⅰ：晶体无混浊；Ⅱ：晶体轻度混浊，周边显现空泡；Ⅲ：晶体中度混浊，周边空泡向中心扩展，中心核显现雾状混浊；Ⅳ:晶体高度混浊，空泡扩展到核区，中心核雾状混浊加重；Ⅴ:晶体核混浊，白内障成熟。

晶体生化指标测定
掏出培育3d后的各组晶状体,将每一个晶体吸干水分，称重，当即将各晶体放入匀浆管内，加入适量生理盐水，冰浴下充分研磨5min制成10%的晶体匀浆，备用。

测按时将每组晶体分成两部份，一部份测定SOD、CAT、MDA；另一部份测定GSH PX、WSP、WIP。

严格依照试剂盒所示方式测定其含量。

统计学处置
数据以x±s表示，对离体晶体混浊度观看结果用Ridit分析
进行查验；生化测定结果用SPSS统计软件进行方差分析，P<、P<为不同显著性标志。

3 结果
FS1272滴眼液对离体晶体混浊度的阻碍
在实验中咱们发觉，大鼠晶状体混浊第一从周边显现空泡开始，继而空泡向中心进展显现雾状混浊，最后核混浊，白内障成熟。

培育24小时后，对照组晶状体全数透明，模型组晶状体多数处于Ⅱ、Ⅲ级混浊乃至进展到Ⅳ级混浊；FS1272滴眼液高剂量组多为Ⅰ、Ⅱ级混浊；中剂量组以Ⅱ级混浊为主，部份Ⅰ、Ⅲ级混浊；低剂量组以Ⅲ级混浊为主，小部份Ⅱ级混浊。

培育4八、72小时后，各组晶状体混浊继续向前进展，以模型组混浊最严峻，均达Ⅳ级乃至Ⅴ级，FS 1272滴眼液高、中、低剂量组混浊程度较模型组轻。

由表1可见，FS1272滴眼液具有医治大鼠白内障的作用，且高剂量组抗白内障作用优于中低剂量组。

莎普爱斯、白内停也能医治白内障。

表1 FS1272滴眼液对大鼠晶状体混浊度的阻碍（略）
FS1272滴眼液对大鼠晶体SOD、CAT、GSH PX和MDA 含量的的阻碍
由表2可见，FS1272滴眼液高、中、低剂量组晶体内SOD、CAT、GSH PX活性明显高于模型组，而脂质过氧化产物MDA含量那么明显低于模型组，说明FS1272滴眼液可提高大鼠晶体内抗氧化酶的活性，减少晶体氧化损伤。

表2 FS1272滴眼液对大鼠晶体SOD、CAT、GSH PX和MDA含量的阻碍（略）
FS1272滴眼液对大鼠晶体可溶性蛋白、不溶性蛋白含量的阻碍
由表3可见，FS1272滴眼液高、中、低剂量组晶体内可溶性蛋白明显高于模型组，而不溶性蛋白含量那么明显低于模型组，说明FS1272滴眼液能延缓大鼠晶体内可溶性蛋白向不溶性蛋白的转化，从而达到医治白内障的目的。

表3 FS1272滴眼液对大鼠晶体可溶性蛋白、不溶性蛋白含量的阻碍（略）
4 讨论
老年性白内障(SC)形成的要紧因素是氧化损伤。

晶状体的抗氧化防御系统要紧包括酶促防御系统和非酶促防御系统。

酶促防御系统要紧包括SOD、CAT和GSH Px等。

晶状体中这些酶活性下降的同时，其抗氧化能力下降，自由基产生增加。

Zarina等［11］以为各类因素致使眼内自由基增加后,WSP被氧化形成高分子聚合物（HMW）等，随
之显现WIS，晶状体混浊，白内障形成。

提高抗氧化酶的活性，减少自由基的产生，关于预防和医治白内障具有极为重要的意义。

本实验研究说明亚硒酸钠诱发离体大鼠晶状体形成白内障，其机制与氧化损伤有关，其病变进程与老年性白内障大体相似。

本实验采纳倒置显微镜观看离体晶状体混浊度，结果显示FS1272滴眼液高、中、低剂量组均能明显降低离体晶状体混浊度。

晶体生化测定显示，FS1272滴眼液能提高大鼠晶状体内SOD、GSH PX、CAT等抗氧化酶的活性,减少氧化产物MDA的产生,减轻晶体氧化损伤程度；FS 1272滴眼液能减少可溶性蛋白氧化损伤，减少不溶性蛋白的产生，有效阻止可溶性蛋白向不溶性蛋白转变有关。

以上研究说明，FS1272滴眼液对实验大鼠亚硒酸钠白内障模型有明显的预防和医治作用。

【参考文献】
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［10］张家萍，侯伟敏.亚硒酸钠诱发大鼠白内障的研究［J］.生物化学杂志，1985，1(5，6)：1521.
［11］Zarina S Zhao HRAbraham glycation end products in human senile and diabetic cataractous lenses［J］.Mol Cell Biochem,2000,210:29.。