新生儿溶血病血清学检查标准操作规程

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新生儿溶血病检测标准操作规程

新生儿溶血病检测标准操作规程1.检验原理：本试验为将排阻层析和抗人球蛋白试验（COonIbS试验）相结合，即在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应的不完全抗体在抗人球蛋白的作用下发生凝集反应，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应的不完全抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。

2.主要组成部分：本品系在聚丙烯塑料透明卡片上的六支微柱型管中填充葡聚糖凝胶和抗人球蛋白（多抗），制成抗人球蛋白检测卡，凝胶微管分为反应腔和凝胶分离柱两部分。

3.样本要求：3.1红细胞样本：采集被检对象静脉血，用EDTA抗凝，配制成红细胞悬液（直接抗人球蛋白试验配制成红细胞生理盐水悬液，间接抗人球蛋白试验配制成红细胞低离子溶液悬液（只适用于交叉配血和不规则抗体筛检）），红细胞最终浓度0.5%-0.8%o3.2血清样本：采集被检对象静脉血，放入含有兔脑粉或者其他促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或者37℃放置2小时后离心，20OrPmlO分钟，取上清该上清不得有絮状物或沉淀。

血清标本必须充分去蛋白，否则标本中析出的或红细胞悬液中残余的纤维蛋白可阻碍红细胞沉降，使非凝集细胞离心后在胶表面形成一条红线，呈假阳性反应。

4.检验方法4.1.准备工作1）微柱凝胶检测卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡平衡至室温（18—25℃）,再用专用离心机离心5分钟。

2）标本采集：用EDTA抗凝管采集被检对象脐带血或静脉血，制备成红细胞标本和血浆标本。

3）红细胞悬液的制备：将被检者红细胞标本至少洗涤4次，取被检者压积红细胞10微升，加入1毫升红细胞稀释液或生理盐水，外观应为均匀淡红色,无絮状物和血块。

4）血浆标本的处理:将被检者血浆标本进行离心,采用3000r∕min离心3min或3500r∕min离心2min（不得有絮状物或沉淀）。

新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程

HDN换血治疗中血液及血型选择标准
❖ 二、ABO、Rh（D）血型鉴定
❖⒈ 选用经国家批准且批批检测合格的单克隆抗-A、抗-B、抗-D(IgM)和A、B 型标准试剂红细胞。
❖⒉ ABO血型鉴定：母亲血样做正反定型；患儿血样只做正定型。推荐使用试管法和微柱凝胶血型卡，不推荐使用纸片或玻片法。
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
HDN产前免疫血液学试验检测标准
❖ （1）第一次检测，一般可在妊娠第1216周进行，以此作为抗体基础水平。如果检测到ABO以外抗体，或高效价的IgG 抗A（B）抗体，建议每月复查一次。
❖ （2）第二次检测在妊娠28-30周做，以后每隔2-4周重复测定一次，了解抗体增加速度。抗体效价上升快，提示HDN 的可能性大。
❖ 二、证实患儿血清中是否有来自于母亲的抗体；
❖ 三、患儿红细胞是否被来自母亲的免疫性抗体所致敏。
HDN产后免疫血液学试验检测标准
❖ 一、标本要求 ❖ ⒈ 采样时间建议： ❖ （1）可疑ABO不合HDN患儿血清学
检查最好在出生后1-7天之内； ❖ （2）可疑Rh等其他血型系统血型
不合应在出生后尽早为好。
❖ 二、试剂与设备（查看Word文件） ❖ 三、检测方法 ❖ ⒈ 产妇血样检测： ❖ 同《HDN产前免疫血液学试验》孕妇血
样检测条目。 ❖ ⒉ 患儿血样检测： ❖ （1）红细胞：ABO正定型、RhD血型
HDN产后免疫血液学试验检测标准
❖ 说明：新生儿ABO定型，多数专家认为反定型没有意义。
❖ （2）红细胞直接抗人球蛋白试验（DAT）：
国内外进展 ❖⒉ 研讨：
（1）研讨内容： ① 样本采集 ② 实验项目及操作 ③ 结果判定或解释

新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程

新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程一、目的为规范新生儿溶血性疾病（HDN）产前血型血清学检测的技术操作，准确评估胎儿发生HDN 的危险程度，从而辅助临床正确的诊断和治疗。

二、适用范围输血科进行新生儿HDN产前血型血清学检测。

三、原理通过鉴定孕妇及其胎儿父亲的血型，推测胎儿可能的血型，进一步检测孕妇体内是否有针对胎儿红细胞血型抗原的抗体及其效价来评估胎儿发生HDN的危险程度。

四、步骤和方法1、检测孕妇ABO、RhD血型，红细胞不规则抗体及其丈夫ABO、RhD血型。

根据夫妇ABO 血型组合来推测母婴ABO血型是否相合：如果母婴血型配合则不需检测孕妇ABO血型IgG 抗体效价；如果母婴血型不配合（可能不配合）则需检测孕妇可能致敏胎儿红细胞的ABO 血型IgG抗体效价。

2、由于抗-A或者抗-B主要为IgM类，ABO血型不合极少发生胎儿HDN，故除有死胎史或者新生儿黄疸史的孕妇外，不需检测IgG抗-B及抗-A的效价。

3、如果孕妇为RhD阴性，丈夫RhD为阳性，孕妇不规则抗体阴性，建议孕妇以后每个月复检不规则抗体直至分娩。

4、如果孕妇不规则抗体为阳性，则需鉴定其特异性、Ig类型、37℃反应情况及其效价和丈夫红细胞是否表达对应的抗原，来评估抗体引起的HDN危险程度。

5、结果判定：效价>143有临床意义。

五、质量控制1、用于试验的试剂都在有效期内使用。

2、严格试验操作，设置阴、阳对照，结果符合预期才可判定试验结果。

六、注意事项1、HDN产前血型血清学检测结果只能为评估胎儿发生HDN的风险提供依据，并不能确定HDN 。

母婴ABO血型不合且孕妇IgG类ABO血型抗体效价在妊娠期持续升高或者检出了IgG类红细胞不规则抗体都是HDN的风险因素。

2、传统认为ABO血型系统IgG抗体效价高于64具有临床意义。

随着检测水平得的提高，其作为临床参考意义不大。

3、抗体效价与HDN的发生有一定的相关性，但是抗体效价的高低与HDN的严重程度并不完全一致，可能与IgG抗体亚类不同有关。

输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程

输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程1、目的：规范血液免疫学产前检查操作，确保试验过程及结果的准确性与可靠性。

2、范围：本规程适用于实验室血液免疫学产前检查试验操作。

3、职责：经授权的血型实验室试验人员负责血液免疫学产前检查试验过程及报告的发出。

4、原理孕妇和丈夫ABO血型不合（O/A、O/B、O/AB、A/B、A/AB、B/A、B/AB）时，孕妇体内的IgG抗A（B）可能会引起新生儿溶血病的发生。

本试验通过检测孕妇血清中有无IgG性质的抗A（B）抗体及其效价（应用巯基试剂破坏IgM抗体，检测IgG抗体效价）即可预测ABO系HDN发生的可能性。

应用筛选红细胞可检测孕妇血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，确定抗体的特异性，进一步检测非ABO系新生儿溶血病。

5、所需设备、材料或试剂：37℃恒温水浴箱、细胞洗涤离心机、抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗-D RH血型定型试剂（单克隆抗体）、凝聚胺介质试剂、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）、（A、B、O）型标准红细胞悬液（2—5%）、商品化筛选细胞、谱细胞、2—ME试剂、12×75mm试管、塑料滴管。

6、检测环境条件：温度：18—25℃；湿度：30—70%7、标本要求7.1标本接收在接收标本时，应尽可能的了解、核对、记录患者的相关资料，包括受血者姓名、年龄、性别、临床诊断、输血史、用药史、妊娠史、标本编码等；7.2检验人员收到被检者产前检查申请按照申请单内容在试管上做标记(用记号笔在试管上标明被检者姓名、性别)，保留申请记录。

7.3按照要求进行血液采集。

将采好的血液沿试管壁注入已标识的抗凝试管中，反复颠倒混匀，放入2-8℃冰箱待用。

并填写《外来标本交接记录》及相关记录。

7.4标本的种类与数量：产前检查需送夫妇血样，血样均需抗凝（EDTA抗凝），女（母）5ml，男3ml。

7.5标本的保存与处理：完成所有试验内容后，要仔细核对实验结果，发出实验报告后，将实验所用的标本原始送检管存于2-8℃冰箱内至少7天以便进行查找和核对，之后交由单位相关部门统一处理。

新生儿溶血病的诊断与鉴别诊断

新生儿溶血病的诊断与鉴别诊断发表时间：2019-08-09T13:52:14.520Z 来源：《中国蒙医药》2019年第4期作者：张如婧1 许梅花2 廖常希1[导读] 新生儿溶血病是指母胎血型不合而引起的胎儿或新生儿的免疫性溶血性疾病[1]。

张如婧1 许梅花2 廖常希11莆田学院附属医院福建省莆田市；2 莆田学院福建省莆田市新生儿溶血病是指母胎血型不合而引起的胎儿或新生儿的免疫性溶血性疾病[1]。

本文针对新生儿溶血病的发病机制、实验室相关诊断及新生儿黄疸鉴别诊断的现状作简要概述。

1.新生儿溶血病的发病机制在妊娠晚期，部分胎儿红细胞经胎盘进入母体循环，其红细胞表面抗原可刺激母体产生相应的IgG类免疫抗体，随后再次通过胎盘进入胎儿的血液循环，并与胎儿红细胞膜上的相应抗原结合，使红细胞发生凝集，于胎儿脾脏中被巨噬细胞破坏导致溶血[2]。

在人类30多个血型系统中，可引起新生儿溶血病的血型系统有ABO、RhD、Kidd、Duffry、Kell、MNS等血型系统，我国以ABO血型不合最常见，约占新生儿溶血病的85％，Rh血型不合约14.6％，MN血型不合约0.1％[3-5]。

ABO血型不合溶血病多见于O型孕产妇产非O型胎儿，第一胎即可发病，这是自然界的食物、植物、细菌中广泛存在类A、B抗原物质，孕妇在孕前接受过类A、B物质的刺激，机体针对该物质产生IgG抗A（B），因此在初次妊娠时体内的IgG抗A（B）即可通过胎盘导致胎儿或所产新生儿发生溶血病[6]。

与ABO血型系统不同的是，Rh血型系统中的Rh抗体必须由Rh抗原阳性红细胞免疫刺激后产生，因此第一胎不发病，往往从第二胎起发病。

由于D抗原在胎儿红细胞上表达较早且免疫原性强，Rh血型不合引起的新生儿溶血病症状较严重、预后差[7]。

新生儿溶血病的临床表现一般为贫血、黄疸、胎儿水肿、胆红素脑病、肝脾肿大，甚至死亡[8]，严重威胁新生儿的生命安全。

2.实验室检查2.1外周血常规检查外周血检查可见红细胞计数降低，血红蛋白降低（<145g/L），网织红细胞升高，研究表明RET%升高时提示患新生儿溶血病的概率大[9]。

新生儿溶血病检测作规程

新生儿溶血病检测操作规程一、项目名称、检验方法名称1.项目名称：新生儿溶血病检测（包括直接抗人球蛋白试验、游离试验和放散试验三项）2.检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。

正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。

加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。

三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1.试剂卡品牌：美国强生奥索2.代号：BioVue-po1yCassettes3.包装规格：400卡/箱试剂卡（707300）；100卡/箱试剂卡（707350）4.试剂成分:抗人球蛋白（1gG,C3b∕C3d）检测卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液,其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1%叠氮钠,0.0IM的EDTA.成分描述第1〜6柱：抗人球蛋白、抗抗一IgG（兔）-IgG.-C3d；多特异性抗一C3b（鼠单克隆）（克隆F7G3）抗一C3d（鼠单克隆）（克隆C4C7）FD&C1#蓝色染料FD&C5#黄色染料5.试剂的储存与效期：储存条件：2〜25。

C环境保存。

请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。

并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。

效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVUe专用离心机；BiOVUe专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求。

含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。

标本采集后应尽快进行检测。

如果实验不能立即进行，应将标本置于2—8。

C保存。

六、试剂准备：抗人球蛋白（IgG,C3b∕C3d）检测卡为即用型产品。

试剂卡应在铝箔开启后一小时内使用。

试剂卡经过运输颠簸后，需倒置一下，然后重新离心以备用。

新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程

新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程1、目的为规范输血科HDN血型血清实验诊断的技术操作，确保检测结果准确，明确HDN诊断及其原因，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。

2、适用范围本文件适用于本院输血科对HDN进行血型血清学实验诊断及其实验操作技术的规范化管理。

3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。

4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶卡式法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。

当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。

离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。

5、样本采集和处理取患儿不抗凝血1-2ml及EDTA-K2抗凝血3～4ml,24小时内送检。

将不抗凝血离心分离出血清备用。

6、试剂：5.1 0.9%的生理盐水；5.2戴安娜合血卡；5.3血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）、抗D标准血清；5.4 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；5.5长春博迅公司的血型定型试剂卡；7、仪器：1)XTL-4.7细胞洗涤离心机；2)DiaMed-ID Incubator 37 SⅠ温育器；3)DiaMed-ID Centrifuge 12 SⅡ7.5操作程序：7.5.1婴儿及母亲ABO血型鉴定是检查第一步，以便考虑以后进一步检查程序。

7.5.2如母子ABO不合（母O子A、B，母A子B、AB，母B子A、AB）则按下列步骤进行患儿血液三项试验：⑴直接抗人球蛋白试验（DAT）（微柱凝胶卡式法）1)取患儿不抗凝血离心后，用0.9%的生理盐水配成0.8%的红细胞悬液。

2)在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，加入配好的患儿红细胞悬液50μl。

3)将卡放入戴安娜离心机离心10分钟后判读结果。

新生儿溶血病血清学检查操作规程

新生儿溶血病血清学检查操作规程原理新生儿溶血病是由母婴血型不合引起，可见于ABO、Rh及MN等血型系统。

胎儿和新生儿红细胞被来自母亲的IgG抗体包被，并在婴儿的单核-巨噬细胞系统（网状内皮系统）受到免疫性破坏，出现溶血，表现出相应的症状。

病情严重程度因个体差异、抗体类型、抗体效价等不同而异。

目的规范新生儿溶血病血清学检查操作；查找新生儿溶血病发生的原因，协助临床进行实验室诊断及治疗；保证临床用血的安全性和有效性。

职责输血科技术人员负责新生儿溶血病血清学检查。

适用范围母婴血型不合引起的新生儿溶血病的血标本。

支持文件《中国输血技术操作规程》（血站部分）.天津：天津科学技术出版社1997《输血技术学》第2版.北京：人民卫生出版社，2002《输血科（血库）工作手册》莞市中心血站2006材料或设备1、材料抗-A、抗-D定型试剂、抗球蛋白试剂、ABO反定型试剂红细胞、筛选细胞、谱细胞、生理盐水、新生儿静脉血、产妇及患儿父亲血标本2、设备血清雪专用离心机、电热恒温水浴箱、水浴振荡仪、显微镜、小试管、滴管、小玻棒操作步骤一、血标本采集及处理采集患儿及其父亲与母亲血标本各3-5ml，分离出血清，配制3%-5%红细胞盐水悬液。

如果患儿血标本为不抗凝血，则在一小玻璃漏斗颈部置一适当大小的棉球上，一边加生理盐水，一边用玻棒挤压血块，收集漏斗下面的红细胞悬液。

二、患儿血标本具体操作执行《ABO和Rh血型鉴定操作规程》。

ABO血型测定只做正定型。

1、直接抗球蛋白试验具体操作执行《抗球蛋白操作试验规程》中的直接抗球蛋白试验部分。

2、游离抗体检测⑴、取小试管3支，分别标明A、B、O细胞，每管加患儿血清2滴，再分别加入3%-5%的A、B、O、反定型试剂红细胞悬液1滴。

⑵、37℃致敏1h后取出，若发生凝集，不必继续往下做。

⑶、若不凝集，用盐水充分洗涤3次反应物后加入抗球蛋白血清1滴。

1300g离心15s，轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。

血型鉴定的操作流程

ABO血型鉴定正定型原理：用已知特异性抗体（标准血清）检查红细胞上的未知抗原。

试管法的操作过程1、取2支洁净小试管，编号分别为抗A和抗B2、分别加入抗A和抗B标准血清各1滴3、取1支洁净试管，用标签纸注明病人姓名，科室、床号.配成5%的红细胞悬液。

4、将配好的红细胞悬液分别加入抗A和抗B的两个试管中各1滴。

5、混匀，将试管以3400转/分钟离心15秒。

6、将试管从离心机中取出，再以推拉旋转的正确手法轻轻摇动试管，使细胞悬浮观察有无凝集现象。

7、登记结果、签名。

ABO血型鉴定正定型原理：用已知血型的标准红细胞，检查血清中的未知抗体。

试管法的操作过程：1、取3支洁净的小试管，分别标明A细胞，B细胞、O细胞；2、分别加入受检者的血清各2滴；3、分别在3个试管中加入反定细胞A、B、O（既5%的A、B、O型标准红细胞盐水悬液）各1滴；4、混匀，将试管以3400转/分钟离心15秒；5、将试管从离心机中取出，在光照下观查是否有溶血、脂血等，再以推拉旋转的正确手法轻轻摇动试管，使细胞悬浮观察有无凝集现象并记录。

ABO血型正反定型结果判断Rh（D）血型鉴定试管法（盐水法）操作过程：1、取洁净小试管3支，分别标明阴、阳对照管和试验管；2、在3支试管中各加入RhD定型血清1滴；3、在实验管中加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，在阴、阳对照管中各加入Rh阴性和阳性5%红细胞盐水悬液1滴；4、混匀，以3400转/分秒离心15秒；5、观查结果:实验管凝集，即表示受检红细胞上有相应抗原；实验管不凝集，即表示受检红细胞上没有相应抗原。

不规则抗体筛检试验凝聚胺法操作过程：1、取3支洁净的小试管，分别标上“Ⅰ”“Ⅱ”“Ⅲ”；2、分别在3支试管中加入两滴受检者血清2滴；3、分别在3支试管中加入3~5%的筛选Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号细胞试剂各1滴，混匀以3400转/分钟，离心15S，看是否凝集；4、分别在3支试管中心0.65ml的Baso低离子溶液，放置室温1分钟；5、再分别在3支试管中心加入凝聚胺溶液两滴摇匀，以3400转/分钟，离心15秒，倒去上清液，不要沥干，让管底留0.1ml液体；6、轻轻摇动试管，且测红细胞有无凝集，（必须凝集，不凝集要重新做实验）；7、分别在3支试管中加入2滴“悬浮液”轻轻转动试管混合并同时观察结果，30S肉眼看是否凝聚。

输血科试验操作规程

输血科试验操作规程一、血型血清学检查的操作规程（一）ABO+RH血型鉴定常规方法1..试剂：单克隆或多克隆抗A、抗B试剂，RhD(IgM)血型单克隆抗体定型试剂，2-5%的反定红细胞悬液2.．操作步骤：（1）将病人标本离心（2）反定型：取两只试管分别标明A、B，加入相应的反定细胞各1滴，加入病人的血浆1滴，离心（3）将玻片用红蜡笔划分为3个区域，各加一滴待测标本红细胞，分别滴加抗A、抗B、RhD试剂，轻轻晃动观察结果（4）结果：有凝集为阳性。

无凝集无溶血为阴性。

正反定型对照得出结果（二）ABO+RH血型鉴定（卡氏法）操作1.试剂：Ortho Biovue ABO-Rh正反定型血型试剂卡友6个微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白、大分子增强剂以及0.1%叠氮钠和0.01M的EDTA。

2.操作步骤：（1）配置0.8%的反定细胞（一般配成约1.5%）（2）将试剂卡编号，并打开试剂卡（3）将病人血标本离心（4）将50ul的反定细胞A、B加入到相应反应腔中（5号6号柱），加入50ul的病人血清。

（5）取50ul的病人压积红细胞加入1ml的盐水中配成5%的红细胞悬液，分别加入前四柱10ul的5%红细胞悬液。

（6）离心，读取结果. 按照下表并结正反定型对照。

得出结果（二）改良凝聚胺技术交叉配血试验一.主要组成成份：R1：低离子介质、R2：凝聚胺、R3：假凝集清除液。

二.步骤：1.复检供血者、受血者血型2.主侧管加入供血者3%-4%的红细胞悬液1滴，加入受血者血清1滴或2滴3.次侧管加入受血者3%-4%的红细胞悬液1滴，加入供血者血清1滴或2滴4.加低离子介质3滴，混匀，静置30秒，各管加凝聚胺1滴，混匀，3500r/min离心15秒，倒出上清液（残留约0.1ml）,扣摇，肉眼可见明显的凝集状（如无凝集须重做），加假凝集清除液1滴于管底，轻摇，凝集1min内消失呈均匀混悬液，为阴性，凝集1min内不能被消除，即为阳性。

新生儿溶血病血清学检查标准操作规程

新生儿溶血病是由母婴血型不合引起，可见于ABO、Rh及MN等血型系统。

胎儿和新生儿红细胞被来自母亲的IgG抗体包被，并在婴儿的单核-巨噬细胞系统受到免疫性破坏，出现溶血，表现出相应的症状。

病情严重程度因个体差异、抗体类型、抗体效价等不同而异。

1目的规范新生儿溶血病血清学检查操作；查找新生儿溶血病发生的原因，协助临床进行实验室诊断及治疗；保证临床用血的安全性及有效性。

2适用范围母婴血型不合引起的新生儿溶血病的血标本。

3职责输血科(血库)技术人员负责新生儿溶血病血清学检查。

4原理通过检测新生儿血浆中是否存在来自母体并与新生儿红细胞血型抗原不相容的IgG类红细胞血型抗体，直接抗人球蛋白试验证实新生儿红细胞是否被致敏，放散试验证实新生儿红细胞是否能解离出来自母体的红细胞血型抗体，根据以上三项试验结果综合诊断新生儿溶血病。

5设备与材料5.1材料单克隆抗-A、抗-B、抗-D定型试剂、多特异性抗球蛋白试剂或微柱凝胶抗球蛋白卡、A、B、O型试剂红细胞、筛选细胞、谱细胞、生理盐水、小试管、滴管、小玻棒、新生儿静脉血、产妇及患儿父亲血标本。

5.2设备普通离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱、水浴振荡仪、普通显微镜。

6检测环境室温应控制在18-27℃，湿度应控制在30%-70%。

7操作步骤7.1血标本采集及处理7.1.1采集患儿父母的血标本采集患儿父母的血标本各3～5ml，分离出血清，配制3%～5%红细胞盐水悬液。

7.1.2采集患儿血标本7.1.2.1采集患儿静脉血3-4ml，EDTA-K2抗凝，离心分离出血浆及红细胞，取压积红细胞30-50μl，加生理盐水1ml配制成3%-5%的红细胞悬液。

7.1.2.2如果患儿血标本为不抗凝血，则在一小玻璃漏斗颈部置一适当大小的棉球，把血块倒在棉球上，一边加生理盐水，一边用玻棒挤压血块，收集漏斗下的红细胞悬液。

7.2患儿血标本7.2.1血型鉴定具体操作执行《ABO和Rh（D）血型鉴定标准操作规程》。

新生儿abo溶血症

新生儿ABO溶血症ABO溶血病的*些轻型病例，可能早期病症不重，但到生后2～6周发生晚期贫血，或到生后8～12周"生理性贫血〞时期贫血表现得特别严重，这是因为抗体持续存在，发生慢性溶血所致。

血型抗体可使红细胞寿命缩短。

据报道，这类小儿红细胞的寿命仅35天左右，每天血红蛋白下降值约为同期正常小儿的4倍，红细胞破坏增加，而这时骨髓造血功能生理性低下，不能有效地代偿，终致发生新生儿晚期贫血(neonatal late anemia)。

2.生后诊断(1)临床表现：观察新生儿有无贫血、水肿、黄疸和肝脾大等溶血病症，假设有应考虑新生儿溶血病。

(2)实验室检查：对于出生时有水肿、贫血、出生后24h内出现黄疸及母亲为Rh阴性的新生儿应考虑新生儿溶血病，需做血常规、母婴血型、血清胆红素和Coombs试验。

新生儿ABO溶血病应该做哪些检查？1.血液学检查红细胞及血红蛋白多数在正常范围，血红蛋白在100g/L 以下者仅占5%左右，网织红细胞常增多，重型病例有核红细胞可达10%以上。

红细胞形态特点是出现球形红细胞，而且红细胞盐水渗透脆性和自溶性都增加。

2.血清学检查(1)胆红素测定：由于ABO溶血病的程度差异较大，故血清胆红素增高的程度也不一致，血清总胆红素超过342"mol/L(20mg/dl)以上约占1/4。

总之，ABO溶血病的黄疸程度较轻。

有人统计86例AO溶血病新生儿胆红素值，其平均值为(131.7±83.8)"mol/L[(7.7±4.9)mg/dl];BO溶血病新生儿66例，其平均胆红素值为(126.5±71.8)"mol/L[(7.4±4.2)mg/dl]。

在血清胆红素中，以未结合胆红素增高为主。

(2)抗体测定：在新生儿红细胞或血清中查出对抗其自身红细胞的血型抗体，是诊断ABO溶血病的主要实验根据。

一般进展3种试验：第一是改良Coombs试验，这是用"最适稀释度〞的抗人球蛋白的血清查出附着在患儿红细胞上的抗体;第二是抗体释放试验，这是用加热的方法，使患儿红细胞上的抗体释放出来，再检查释放液中的抗体。

新生儿溶血病血型血清学检查标准操程序

SOP_10-4 新生儿溶血病血型血清学检查标准操程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：血型鉴定。

三、操作人员：检验科授权工作人员。

四、操作步骤：新生儿溶血病包括:①母婴血型不合新生儿溶血病;②红细胞葡萄糖6磷酸脱氢酶缺陷;③球型红细胞增多症。

因为母婴血型不合所致新生儿溶血病为首先发现,所以新生儿溶血病特指为母婴血型不合所致的新生儿溶血,另外两种疾病是以疾病原因命名。

造成新生儿溶血病的抗体有：ABO系统（IgG抗A、IgG抗B、IgG抗AB）；Rh系统（抗D、抗E、抗Ce、抗cE、抗c）；Kidd系统（抗Jka、抗Jkb）；MNSs系统（抗-M、抗N、抗S、抗-s）；Kell系统（抗K、抗-k）；Daff系统（抗Fya、抗Fyb）；Diego系统（抗-Dia、抗-Dib）。

ABO系统新生儿溶血病多见于ABO血型不合的母子。

O型母亲多见(90%以上),多由IgG-AB所致。

A型、B型母亲少见(不足10%),多由IgG抗A或抗B所致。

Rh系统则多见于母子ABO血型相合者(母有输血史除外),以抗D为多见,为抗E,抗cE等。

其它系统为母子其它血型系统不相合。

1.原理：母体内存在与胎儿红细胞不相合的抗体。

抗体的产生是胎儿的红细胞抗原(由父亲而来的恰好是母体红细胞上所缺少)进入母体,刺激母体产生了免疫性抗体。

胎儿红细胞被来自母亲的IgG抗体所包被，并在婴儿的网状内皮系统内受到免疫必破坏。

另外，母亲有输血史,产生的免疫性抗体恰巧与胎儿红细胞抗原是相应的，也会发生新生儿溶血病。

2.检查方法2.1 ABO新生儿溶血病的检查* 母血清中天然抗体A （B ）用型物质或2-ME 中和后进行试验。

夫妇或母子间ABO 血型关系：妇夫血型子血型血型血清抗体配合不配合配合不配合O 抗A 、B O A 、B 、AB O A 、BA 抗B A 、O B 、AB A 、O B 、ABB 抗A B 、O A 、AB B 、O A 、ABAB A 、B 、O 、AB A 、B 、AB（1）ABO 定型：新生儿血清中的同种抗体来源于母亲,所以新生儿的ABO 检查完全依靠细胞定型(正定型),如果ABO 定型为O 型,则可排除ABO-HDN 的可能。

新生儿溶血病检测操作

新生儿溶血病检测操作SOP一、产前诊断1.夫妇血型检测（微柱凝胶检测法：ABO、Rh(D)血型定型检测卡）将红细胞稀释至1% 红细胞生理盐水悬液；撕开微胶卡的封膜，于正定管蓝A、黄B、灰D、Control微柱管反应腔中加入1% 待检 RBC 生理盐水悬液各50μl；于反定管白色A、B、O、自身管分别对应加入% A1、B、O型试剂红细胞和待检红细胞生理盐水悬液50μl，再分别加入待检血浆（血清）50μl；将检测卡室温反应≥10 min,取出，置离心机1000r/min 2min，1800r/min 3 min离心；取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）。

2.孕妇抗体效价的测定（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）孕妇IgG(抗A/抗B)效价取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各，充分混匀，37℃水浴2小时（以充分破坏血清中的IgM类抗体）。

取4支干净试管排于试管架上；将第一管加入50微升中和血清和毫升低离子介质（原液为1:1稀释，此时稀释倍数为原液的64倍）。

第2－4管中分别加入400微升低离子介质；从第一管中吸出400微升的液体加入第二管，混匀，在从第二管吸出400微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。

取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在4管中个依次加入倍比稀释好的灭活血清50微升和1％的标准红细胞（或父亲红细胞）低离子介质(LIM)悬液50微升。

将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。

将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟（1000r/min 2 min，1800r/min 3 min），（离心必须在加样后30分钟内进行）取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）临床参考值：孕妇IgG(抗A/抗B)效价≤64。

孕妇IgG(抗D)效价测定确定孕妇为RhD阴性，丈夫为RhD阳性。

取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各，充分混匀，37℃水浴2小时（孕妇血清与O型RhD阳性红细胞反应盐水法为阳性需要灭活，阴性不需要灭活）。

新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程

2、适用范围本文件适用于本院输血科对HDN进行血型血清学实验诊断及其实验操作技术的规范化管理。

3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。

当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。

离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。

5、样本采集和处理取患儿不抗凝血1-2ml及EDTA-K2抗凝血3〜4ml,24小时内送检。

将不抗凝血离心分离出血清备用。

6、试剂：5.10.9%的生理盐水；5.2戴安娜合血卡；5.3血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）、抗D标准血清；5.45%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；5.5长春博迅公司的血型定型试剂卡；7、仪器：1）XTL-4.7细胞洗涤离心机；2）DiaMed-IDIncubator37SI温育器；3）DiaMed-IDCentrifuge12SII7.5操作程序：7.5.1婴儿及母亲ABO血型鉴定是检查第一步，以便考虑以后进一步检查程序。

7.5.2如母子ABO不合（母。

子A、B,母A子B、AB,母B子A、AB）则按下列步骤进行患儿血液三项试验：⑴直接抗人球蛋白试验（DAT）（微柱凝胶卡式法）1）取患儿不抗凝血离心后，用0.9%的生理盐水配成0.8%的红细胞悬液。

2）在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，加入配好的患儿红细胞悬液50口1。

3）将卡放入戴安娜离心机离心10分钟后判读结果。

4）结果观察：5）阳性：红细胞凝集，在凝胶柱中或表面形成红线。