PCR-SSP ABO基因分型实验操作规程

PCR-SSP ABO基因分型实验操作规程 SXYJ-GZ-0222

1目的本文件规定了采用PCR－SSP技术、使用ABO基因分型试剂盒，对被检标本ABO血型基因型进行鉴定的操作规程。

2适用范围适用于各类ABO疑难血型标本鉴定。

3职责检测者负责依据此程序进行ABO基因分型实验操作。

4材料与设备ABO分型试剂盒（美国G&T公司）、Taq酶（Promega公司）、注射用水、PCR 扩增仪、微量加样器、涡旋震荡仪、冰箱、灭菌0.5ml离心管、灭菌200µl枪头、灭菌20µl枪头、废物缸、超净工作台、台式离心机、一次性帽子、口罩、手套等。

5操作方法

5.1建立PCR反应体系按此操作规程表1建立PCR反应体系

表1 PCR扩增反应体系配制

5.2PCR扩增反应采用热启动方法，先将PCR扩增仪预热到95℃后，再放入PCR板或

PCR试管，进行以下扩增反应：95℃预变性5min;95℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸90s，30个循环；72℃延伸5min，4℃保温。

5.3质量控制标准：

5.3.1PCR反应体系的建立必须在PCR前区的生物安全柜进行操作。

5.3.2实验前应对照DNA模板管编号标记相应PCR管或板。

5.3.3必须设立ABO各基因表型的阳性对照。

5.3.4严格按操作规程中PCR扩增循环程序参数进行扩增，放入PCR板或PCR试管前需调出

已存入的程序核对无误后再进行PCR扩增。

5.3.5严格按照要求存放Taq DNA聚合酶，使用时一定要放在冰盒中保持低温，并核对有效

期限和浓度，用后立刻放回冰箱，不得反复冻融。

5.4琼脂糖凝胶电泳参见SXYJ-GZ-0305《凝胶电泳操作规程》。

5.5琼脂糖凝胶电泳结果记录与分析参见SXYJ-GZ-0318《凝胶成像系统操作规程》。

6结果分析

每个PCR反应都产生强弱不一的207bp内对照产物。由于竞争作用，某些PCR反应中内对照很弱，属正常现象。根据是否产生特异性PCR产物及其大小来指定相应基因型，见此操作规程表2。

表2 PCR产物及检测的等位基因PCR Mix PCR产物（bp）检测的等位基因

A 75 A101,A102,A103,A113;A201,A202,A203,A205,A206;A301,A302; Ax01,Ax03,Ax04;Ael01,Ael02;cis-AB01;B108;O301,O302O304

B 90 B101,B102,B103,B104,B105,B106,B107,B108;B301,B302; Bx01; Bel01,Bel02;B(A)01;B(A)02; cis-AB01,cis-AB02

O 127 O101,O102,O103,O104,O105,O106,O108,O108,O109,O110, O111,O112,O113,O114,O115,O116,O117,O118,O119;

O201,O202,O203,O204,O205,O206,O207,O208,O209,O210, O211,O212,O213,O214

7常见问题分析参见试剂使用说明书。8依据ABO基因分型试剂盒使用说明书。