紫河车质控研究

关于紫河车中药材及紫河车中成药质量标准的研究欧阳长庚（广州中医药大学中药学院510405）摘要：针对紫河车中药材及紫河车中成药质量标准中存在的主要问题：缺乏有关病毒的检测和特征性检测。

就多年从事紫河车的研究经验，设计出质量标准的研究方案，与同行商榷。

关键词：紫河车；质量标准。

紫河车，为人的胎盘（Human Placenta）加工而成的干燥品，具有几百年历史的中医传统用药。

一般取健康妇女分娩的胎盘作药用原料，味甘、咸，性平偏温。

归心、肺、肾经。

功能与主治：温肾补精，益气养血。

用于虚劳赢瘦，骨蒸盗汗，咳嗽气喘，食少气短，阳萎遗精。

紫河车入汤剂组成的复方很多，最早有河车大造丸，史源于明朝张介宾《景岳全书》。

紫河车配不同中药，用于补益，入汤剂也多为类似加减方。

目前，以紫河车为原料的中成药主要是紫河车胶囊。

功效同紫河车。

紫河车和河车大造丸为2000年版国家药典收载，紫河车胶囊为1991年部颁标准收载。

紫河车系列作用广泛，深受人们喜爱，有关资料丰富，经市场调查，三者的市场价值一年有3000万元以上，前景十分广阔。

但是2000年版国家药典上紫河车及1991年部颁标准上紫河车胶囊的质控标准很粗浅，紫河车只有表观，就凭它的形状、直径、颜色，沟纹等观察来鉴定。

可是我们在医药公司，或是在药店购买的，可不一定是完整的，那就不能凭外观来判断，而且外观也是可以造假的。

尤其因为人们认为紫河车是补品，又有几百年的历史，病人也好，健康人也好，都可以服用，作为贵重药品，争相抢购，虽然我国每年有2000万婴儿出生率[1]，仍然有充假的可能。

紫河车胶囊只有茚三酮试液及鞣酸试液反应，是鉴定蛋白质和肽类的定性反应，毫无特征性，很容易冒假。

这是一方面。

另一方面，没有经过严格的病毒检查，尤其对乙肝病毒（HBV）和人类免疫缺陷病毒（HIV1、HIV2-艾滋病的病原体）的检查，2000年版药典是空白，这就造成隐患。

病人往往反应的不是疗效问题，而是担心感染病毒。

虽然原加工过程是在沸水中煮沸过，但也只是“略煮”，含含糊糊。

但是，乙肝病毒在100℃需10分钟才失去传染性[2：293]、[3：276]；我国艾滋病患者也逐年增加，也不得不防。

由以上两方面的欠缺，提出一个迫切需要解决的问题—要有严格而可靠的质量标准。

以下就笔者多年对紫河车系列研究的实践和积累，再参考有关资料，经过思考提出的解决方案。

一.首先，原料胎盘必须取自健康产妇。

凡患传染性肝炎、恶性肿瘤、免疫缺陷症、艾滋病、性病（梅毒、淋病）及急性传染病尚未恢复的产妇分娩的胎盘。

以及人工流产、死胎、畸形儿的胎盘不得使用。

这不仅是避免疾病传染，而且这些胎盘的质量不好[4]。

二．加工和病毒的检测问题。

传染病的预防主要是针对艾滋病和乙型肝炎。

艾滋病被认为是20世纪（及21世纪）的瘟疫，病死率极高[5：1289]，目前没有什么好办法。

目前，我国乙型肝炎的发病率很高，携带乙型肝炎病毒率更高，传染性和遗传性都很强，乙型肝炎病毒又较难灭活。

所以，这两种病毒必须检验（取胎盘血检验）。

原2000年版国家药典加工是将胎盘洗净血后在沸水中略煮，然后在60℃烘烤至干品。

这样，一般的病毒、病菌都杀死了（包括人们所担心的其它肝炎病毒：甲肝、丙肝、丁肝、戊肝病毒。

其中甲型肝炎病毒（HAV），100℃数分钟可灭活[3：269]、[5：1249]；丙型肝炎病毒（HCV），煮沸可将其灭活[3：281]、[5：1145]；丁型肝炎病毒（HDV）是缺陷病毒，其复制必需拌有乙肝病毒共同感染[5：989]；戊型肝炎病毒（HEV）不稳定，戊型肝炎为自限性疾病，症状一般较轻，多数患者6周所有症状消失，ALT恢复正常，不发展成慢性肝炎，也无慢性携带状态[5：1168]，也有学者认为戊型肝炎患者一旦病愈，则获终生免疫[6]；关于它的灭活，有学者认为于4℃或～20℃下易破坏，4℃～8℃超过3～5天，可自动降解[3：284]；人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV1）、Ⅱ型（HIV2）是艾滋病的病原体，对温度、干燥都十分脆弱，检测其抗体时，即便有窗口期，或是漏检而混入健康胎盘中，在如此的温度和干燥情况下也灭活了[5：1290 ]、[7]。

较难灭活的是乙肝病毒。

必须做乙型肝炎表面抗原（HbsAg）、核心抗体（HbcAb）的检测，后者更灵敏，检验阴性者才能药用。

建议在加工过程中，人胎盘在洗净血后，高压灭菌（103．4kpa,温度可达121．3℃）30分钟，然后降至60℃烘10小时以上至干燥；含水份不得大于9%。

如此，不仅杀灭了个别漏检胎盘含的乙肝病毒，而且也杀灭了包括细菌芽孢（血液中不可能有芽孢-有的芽孢灭活的温度要求很高，必须高压灭菌）在内的所有微生物[2：44]；当然包括其它肝炎病毒，如未完全研究清楚的己型肝炎病毒（HFV）、庚型肝炎病毒（HGV）-有学者认为庚型可能是丙型肝炎病毒（HCV）的相拌病毒或辅助病毒[5：1155]、TT型肝炎病毒（TTV）及8～10%的未知微生物。

药厂可用夹层蒸汽锅，我们用如此温度下处理的药材粉碎后灌成胶囊，再用60C O 辐照灭菌，患者反映疗效仍然可以，而且比烘箱烘干的火气小。

有报道用冷冻干燥法加工人胎盘，有效成分含量比传统工艺（煎煮、烘干）高，但前者对微生物的灭活作用差，尤其对病毒灭活差[8]。

所以，仍然要高温灭菌。

有得有失，重要的是安全、放心。

当然，这毕竟是原料干块，是煮沸10分钟，还是高压灭菌，可以商榷。

第三方面是关于紫河车的特征鉴别。

曾有报道用普通电泳法鉴别紫河车干粉与牛、羊、猪胎盘干粉，有明显的区别，紫河车所具有的特征谱带，牛、羊、猪胎盘干粉均没有[9]。

但未见重现性报道。

稳定性问题尚待研究。

2003年又有一篇报道是将新鲜人胎盘、紫河车干品及紫河车炮制品分别在非解离系统和解离系统时的聚丙稀酰胺凝胶电泳（PAGE）法鉴别，并作了脐带和胎膜的电泳比较[10]。

认为用解离系统时的聚丙稀酰胺凝胶电泳（SDS- PAGE）法对紫河车鉴别比较适宜。

为紫河车的质控标准提供了更为详细的参考，遗憾的是仍未见重现性报道。

由于紫河车主要含蛋白质，药材存放一段时间后，蛋白质可能会降解，那些谱带还有吗？还会出现什么新的谱带？有什么干扰？都是值得研究的。

再有定量问题，电泳法不如高效液相，可以用高效液相仪测定氨基酸和肽谱，紫河车有它一定的氨基酸含量和肽的含量，可以从各氨基酸及肽的峰高、峰面积寻找其特征。

这里同样有一个稳定性问题，蛋白质若降解，各氨基酸和肽的含量也会改变。

有文献报道紫河车有其独特的人胎盘肝细胞生长因子和对热稳定的肽类[11、12]，可以寻找稳定而特有的肽谱及氨基酸峰。

这种特征谱带或是特征峰（群），实际上也可以说是个初级指纹图谱（不与疗效挂钩）。

目前，我和我的合作者正着手研究紫河车的电泳法鉴别图谱，并考虑高效液相测定。

紫河车中药材质量标准一解决，紫河车胶囊的质量标准就好办了。

病毒不用再检测。

它的加工就是紫河车粉碎后灌胶囊；未经任何提炼，无质的变化。

我们试验的工艺流程：紫河车粉碎后、过60目筛、用60～70%的乙醇制成颗粒（制成颗粒是解决药粉太轻不易掉下而灌不满胶囊）、过12目筛、60℃～65℃烘干、无菌灌胶囊。

用乙醇制粒，不仅可灭活人类免疫缺陷病毒[5：1290]，乙醇在烘干的过程中都挥发掉了，特征谱带（或特征峰）应与紫河车药材一样。

最后在无菌室装瓶。

装箱后，整箱用60C0-γ射线辐照杀菌，达到微生物限量标准。

一般辐照后，霉菌和总菌仅几十个甚至10个。

60C0-γ射线辐照杀菌是根据国际原子能机构的充分肯定及我国卫生部文件：卫药发[1997]第38号-关于发布《60C O辐照中药灭菌剂量标准》（内部试行）的通知。

可以杀灭任何病菌，而对任何药品没有残留，对人体无任何副作用。

而且本药品不在卫生部规定不允许辐照中药材品种之列。

但是，不能因用60C0-γ射线辐照杀菌而不严格按无菌操作，辐照强度是有限的，而且，不注意，在加工过程中仍可能带进新的病毒。

紫河车胶囊含水量可低于2000年版国家药典一部中规定的标准（胶囊剂中药粉含水量不得高于9%，紫河车胶囊可以规定不得高于5%～6%）。

我们与医院合作制备紫河车胶囊几年，加工过程完全容易达到。

这样的含水量我们曾试验了三批，常温下放置3～4年菌检仍合格，甚至一个杂菌也没有。

分析是在这种干燥条件下，细菌难于存活。

最后，关于病毒检测成本及时间等。

有人担心施行这样的质量标准，成本太高，患者承受不了。

我们调查了病毒检测成本：乙肝病毒检测用国产试剂，人类免疫缺陷病毒检测用进口试剂（均经国家食品和药品监督管理局批准），每个胎盘消耗的试剂费共16.5元，大批量检测费不会高于14元，总费用大约每个＜30元。

何况有的孕妇产前已做了乙肝病毒的两对半检验，合格者的胎盘无须再检验乙肝病毒。

如果允许生产厂家自检，那只是试剂费了。

一个一个胎盘血检测，乙肝病毒一人一次可检测400多个，一小时出结果；人类免疫缺陷病毒每两人每次可检测400多个，4小时可出结果。

至于检测仪器，高效液相仪已普及，普通电泳仪比高效液相仪便宜多了，进口一套电泳仪设备也就2万多元。

无论检测仪器、试剂、时间、成本都不成问题。

完全可行。

为了保障人民的健康，预防传染病，充分利用药源，建议今后应由国家统一收购健康人胎盘作为药用，逐渐杜绝民间自行食用（100℃煮沸不能保证杀死任何有害微生物）；检测不合格的胎盘作专业处理，以防环境污染、传染病泛滥，药源也有充足的保证。

参考文献[1] 涂平。

中国的人口环境及其市场意义。

北京大学光华管理学院营销学系教授在网上的文章。

[2]陆德源，闻玉梅，郭辉玉等。

医学微生物学，北京：人民卫生出版社，2001：293，44。

[3]冯树异，程松高，吴光照。

医学微生物学，北京：北京医科大学，中国协和医科大学联合出版社，1992：276，269，281，284。

[4] 刘淑兰，郭立新，冯蕾等。

影响紫河车质量的若干因素。

中国中药杂志，1993，18（7）：443。

[5] 闻玉梅，陆德源，何丽芳等。

现代医学微生物学，上海：上海医科大学出版社，1999：1289，1249，1145，989，1168，1290，1155。

[6] 龙北国，江丽芳，郭辉玉等。

高级医学微生物学，北京：人民卫生出版社，2003：221。

[7] 贾文祥，江丽芳，戚中田等。

医学微生物学，北京：人民卫生出版社，2001：285。

[8] 张培培。

两种工艺对紫河车成分含量影响的比较研究。

江苏中医，1994《16（4）：35。

[9]石俊英，吕鹏月，程金友等。

穿山甲与紫河车及其混淆品的鉴别和质量研究。

山东中医药大学学报。

1998，22（5）：379。

[10] 李峰，孙娟，康延国等。

紫河车的凝胶电泳鉴别研究。

中草药，2003，34（6）：570。

[11] 王勇，朗刚华，张振宇等。