免疫SOP

乙型肝炎病毒表面抗原定性检测1. 检验目的采用酶联免疫吸附试验（ELISA）- 双抗体夹心法，定性检测患者血清中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）。

2. 检测原理采用单克隆抗-HBs包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗-HBs-HRP，当标本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合，并与抗-HBs-HRP结合，形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。

3. 设备和试剂3.1仪器：Microlab STAR IVD ELISA全自动酶免仪，美国HAMILTON公司。

3.2 试剂：乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂盒，厦门英科新创科技有限公司。

试剂盒组成：·微孔反应板：12孔*8条。

·酶结合物、阳性对照、阴性对照。

·显色剂A，显示剂B，终止液，封片。

·浓缩洗涤液，用前以蒸馏水作20倍稀释。

3.3 试剂盒2-8℃避光保存，有效期12个月。

4. 性能参数4.1 阴性参考品符合率 20/204.2 阳性参考品符合率 3/34.3精密性 CV（%，n=10）≤15%4.4灵敏性：各亚型的最低检出量符合要求4.5稳定性：试剂盒内各组分，37℃放置6天，产品性能仍符合以上标准5. 样品5.1静脉抽取病人空腹血标本2mL，置于干燥管或含分离胶的促凝管内。

5.2 样品收到后立即以3000转/分钟，离心10分钟，分离血清。

不能及时测定的血清应置于2～8℃冰箱保存，于7日内检测；长期储存应低温冻存，避免反复冻融。

5.3 严重溶血和脂血的样品不能做检测。

6. 容器及添加剂血液标本使用含分离胶的真空管或者促凝管。

（黄色管帽）。

7. 校准程序每年仪器公司对仪器校准一次，计量局每年对酶标仪、移液器、水浴箱等进行校准。

8. 操作程序8.1平衡：将试剂盒各组份取出，室温平衡30分钟后方可使用，微孔板开封后，余者及时用袋封存于冰箱中，保证7天内用完。

免疫组化SOP

22
6、抗原修复：提前将高压锅清洗干净，不能有残余的石蜡，将抗原修复倒入高压锅开火直至水沸腾，将切片架在切片架上，倒放在高压锅里，要保证抗原修复液淹没切片，当气冒上来后开始计时，2-10min即可，修复好后PBS清洗5min*3次
7、用蜡笔将组织周围画一个圈，不可太大也不可太小，同时将保湿箱倒入2cm左右自来水，将修复好的切片放入保湿箱
8、滴加一抗工作液，37℃孵育2-3h，或4℃孵育过夜（约16h），PBS冲洗5min*3次
9、滴加二抗，37℃孵育10-15min（水浴锅孵育），PBS冲洗5min*3次，水浴锅需提前预热
10、DAB显色剂显色，滴加配好的DAB（载白色背景下观擦是否变成黄棕），一旦颜色变深，立即用一缸蒸馏水终止反应，一般所需时间为5-20min，蒸馏水冲洗5min*3次，自来水充分冲洗
①苏木素5min，注意不经过伊红
11、如果需要，可进行复燃，脱水，透明：②蒸馏水洗5-10min
③盐酸-酒精 1-3(一般2s)
④自来水浸泡5min（依旧蓝色），若蓝色
不明显，再在苏木素中返蓝
⑤95%酒精ⅠⅡ各5min、100%酒精5min
⑥二甲苯ⅠⅡⅢ各5min
12、封片：滴取1滴中性快干胶与组织片上，盖玻片沿玻片一端45º缓慢放下
13、储存：在切片盒中室温可储存数年
注意事项：
1、抗原修复液、3%去离子水可回收
2、注意抗体稀释的PH和浓度
3、DAB现配现用，避光保存6h之内可用，最好在30min内使用，注意剧毒，余下的DAB 不可直接倒入下水道，可倒进废液回收桶
4、每一步做完尽量把残余液体擦干，半干即可
5、DAB的配置：取1.5ml的EP管，加1mlDAB底物液，在滴加一滴DAB浓缩液，均匀混合，现配现用。

单抗制备小鼠免疫SOP

单抗制备免疫一、材料准备：弗式完全佐剂（complete Freunds adjuvant，CFA）弗氏不完全佐剂（incomplete Freunds adjuvant，IFA）实验动物：小鼠（Balb/c）雌性，8周以上,体重20g以上每种抗原蛋白免疫小鼠4只靶抗原：具有免疫原性的抗原或蛋白质、多肽，生理盐水抗原要求：抗原要尽量在无毒无刺激溶液中（PBS或生理盐水），纯度大于80%，浓度1mg/ml以上，总量大于2mg。

抗原尽量是可溶性抗原，溶液为PBS，如必需加入刺激物质，SDS浓度在0.5%以下，尿素在2M以下，不含咪唑，丙烯酰胺等变性剂，要求溶液澄清，无沉淀。

二、实验步骤1.抗原准备：每只小鼠按照100ug/100ul蛋白质或多肽置于生理盐水中制备成抗原。

2.抗原-佐剂的准备：将抗原液与佐剂混合制成乳状液，抗原与佐剂混合按照1：1比例进行，加入搅拌子后于4度搅拌过夜。

注射量为200ul 每只小鼠，抗原量为100ug。

第一次免疫使用弗氏完全佐剂，以后加强使用弗氏不完全佐剂，最后一次加强不加佐剂，免疫前采集阴性血做为对照，乳化因考虑损失，多计算两只小鼠的量。

乳化完全判断标准：挤出一滴乳状液滴于冷水表面以检测乳状液是否稳定，如果液滴散开则继续混合操作直至稳定的乳状液形成。

将乳状液移入1ml注射器。

3.小鼠免疫：将小鼠放在鼠笼上，拉住小鼠尾尖部，背部75%酒精消毒，针头15度角刺入小鼠皮下，挑起注射。

皮下注射共200ul，分5个点（背部皮下任意点）4.冲击免疫：如计划在免疫3d后进行细胞融合实验，则使用水相溶解的游离抗原进行直接脾脏免疫。

过程：将小鼠在固定架上固定，脾脏位置毛剪掉并消毒，快速分别剪开外皮和内皮，将脾脏拉出，吸取100ul/100ug抗原注入脾脏内，并快速用手术线分别缝合内皮和外皮。

5.小鼠阳性血清采集：尾部剪尾采血20ul，用生理盐水稀释10倍，离心收集上清。

6.效价检测：间接法检测小鼠多抗血清效价。

免疫沉淀SOP

免疫沉淀（Immunoprecipitation）SOP免疫沉淀技术通常是用于初步鉴定新蛋白抗原的方法之一。

免疫沉淀、SDS-PAGE和免疫印迹结合，可以测量蛋白的相对分子量，观察蛋白质之间的相互作用，检测其翻译后修饰的调控，或确定蛋白质降解的速率。

此方法是收集有关新抗原，为进一步分析其特性应用最为广泛的方法之一。

一、实验流程（以七鳃鳗血清为例）1.将七鳃鳗血清放在冰水中融化注：①在整个操作过程中，应尽量保证在冰水或4℃中进行。

②血清融化后，将血清10000 r/min，10min离心，因为血清中可能存在胶原蛋白，这样处理过以后，取上清以排除后续实验受到胶原蛋白的干扰。

2.取少量血清以备Western blot分析，剩余血清取出一部分与抗体混匀，并在4℃旋转混合孵育，2h～过夜（同时应该以同样条件设计一组空白对照和无关抗体的对照）。

注：①凭个人经验一般是5μl左右的血清混入10μg左右的抗体，这个比例是可以将血清中相应蛋白沉淀下来。

当然，当遇到不同蛋白时还应当根据当时的情况具体分析。

②有时候血清与抗体混合时，要加入一定比例的PBS来补充到一定的体系，所以在设置空白和无关抗体对照时，也应以加入相同比例的PBS，这样可以保持整个反应体系的一致性，以便于最终上样也保持一致。

③在设置无关抗体对照时，还应当保证抗体来源种属的一致，即如果你选择的特异性抗体为兔源的，那你无关抗体最好选用未免疫兔子的血清纯化的抗体。

3.在血清抗体混合液中加入proteinA/G agaroge beads， 4℃旋转混合孵育，4h～过夜。

注：①凭个人经验，按照上面的体系，加15μl-20μl beads珠即可。

理论上1ml proteinA/G agaroge beads可以结合大于18mg的人IgG。

即，按照上面的体系加1μl就行了，可是这在操作上是不便于进行的。

那20μl的beads有多少呢？如图，箭头所指的位置就应该是20μl的beads大致的沉淀位置。

检验科SOP_13免疫检验SOP

文件审批者：发布日期：操作者从事本项工作前，必须认真学习并掌握本手册的内容，严格按照操作规程操作！学习者:休订书册与增补程序内容与日期：学习者：休订书册与增补程序内容与日期：学习者：SOP_13-1 酶联免疫吸附试验（ELISA）基本原理与注意事项一、基本原理1、包被1.1、固相载体的要求（1）、结合抗体或抗原的容量大（2）、抗体或抗原牢固地固定在其表面（3）、不影响免疫反应性（4）、利于反应充分进行（5）、固相方法简便易行，快速经济1.2、固相载体的材料：聚笨乙烯1.3、包被coating将抗原或抗体结合于固相载体。

1.4、封闭blocking用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清消除固相载体表面未结合的位点，消除非特异性吸附。

2、反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体。

标记酶的要求：(1)、活性高(2)、性质稳定(3)、专一性强(4)、酶催化底物的显色信号易于判断和测量(5)、方法敏感，重复性好，简单易行(6)、酶的底物易于配制保存，酶及底物价廉常用酶辣根过氧化物酶HRP（ELISA中应用最为广泛的标记用酶）3、洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离。

4、底物显色HRPDH2+H2O2—————→D+2H2OH2O2为受氢体，HRP对受氢体的专一性很高。

供氢体DH2习惯上被称为底物，底物有多种。

常用底物：四甲基联苯胺TMB四甲基联苯胺TMB是ELISA中应用最广泛的底物。

TMB反应后显蓝色，加酸终止反应后变为黄色,测定波长450nm ，稳定，无致癌性。

二、常用方法与原理1、双抗体夹心法方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色应用：二价或二价以上的较大分子抗原测定乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等2、双抗原夹心法原理：类似双抗体夹心法操作步骤：类似双抗体夹心法应用：乙型肝炎表面抗体3、竞争法（测抗原）方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。

免疫组化检测

免疫组化SOP一．总纲（一）技术原理免疫组化全称为免疫组织化学技术（immunohistochemistry，IHC）。

基本原理是抗原与抗体特异性结合，具体为带有显色剂标记的抗体在组织细胞上与抗原特异性结合，对抗原进行定性、定位和定量检测的技术。

（二）研究进展二．实验操作免疫组化基本操作流程如下：（一）切片脱蜡水化脱蜡水化的目的是将石蜡包裹住的抗原暴露于与抗体结合的水环境中，便于两者结合。

若脱蜡和水化不全，则易出现局灶性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色。

1.实验操作如下：（1）烤片：将石蜡切片置于烤箱中烤片60min；（2）脱蜡：入二甲苯5min×3；（3）水合：100%乙醇，5min×2；95%乙醇5min；70%乙醇5min；ddH2O浸洗5min ×2。

2.技术要点：（1）注意无水乙醇和二甲苯的新旧程度，若出现雾状，则需及时更换；（2）60℃烘箱烤片时间勿过久；（二）消除内源性过氧化物酶由于在红细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、出血坏死组织等组织细胞中含有内源性的过氧化物酶，在DAB显色时，可与HRP一样催化底物显色。

为排除干扰，可用过氧化氢溶液消除该酶的活性。

1.实验操作如下：（1）ddH2O漂洗5min×2；（2）滴加3%H2O2于切片组织细胞上，湿盒中37℃孵育20min；（3）PBS漂洗5min×22.技术要点：（1）过氧化氢消除内源性过氧化酶应避光处理。

（三）抗原修复与封闭液封闭由于固定液和石蜡导致组织蛋白的氨基酸残基在分子内或分子间形成醛基，或发生蛋白交联，导致蛋白质三级结构或四级结构改变，出现空间位阻，从而封闭抗原决定簇，阻碍抗体与抗原的结合。

因此，需要进行抗原修复暴露抗原。

修复方法有很多种，常见的为高温高压修复法。

封闭目的为细胞表面（特别是淋巴造血组织、淋巴细胞、单核细胞等）存在Fc受体，可与抗体（Ig）结合，形成非特异性染色。

酶联免疫法sop文件

酶联免疫法sop文件1、原理：本法采用间接酶联免疫吸附实验原理，在微孔上预包被基因重组HCV结构和非结构区，配以酶标记Ig G抗体及TMB显色等其他试剂，检测人血清和血浆中的丙型肝炎病毒抗体。

2、标本采集与处理（1）受检者准备:对于体检对象，抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6个小时（2）静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平，故在采血前至少应静坐五分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

（3）采血管：一般采用血清做检查，可以用一般洁净的塑料管和玻璃试管作为容器（4）标本处理：血液标本应尽快的送实验室，试剂使用样品为人血清和血浆，含EDTA，柠檬酸钠和肝素等抗凝剂的样品可用于本实验（5）标本接收：接受标本时，应检查标本是否符合要求，所用试管是否正确，试管是否填写完整。

并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采并填写记录。

（6）标本储存: 样品中应无微生物，在2-8℃储存一周。

长期储存应低温冷存，避免反复冻融。

试剂配制：8*12孔或12*8HCV酶标试剂12ml*1瓶HCV阳性对照0.2ml*1支HCV阴性对照0.2ml*1支底物液A、B液各6ml*1瓶终止液6ml/*1瓶自封袋1个封版膜2张3、操作步骤（1）配液：浓缩洗涤用蒸馏水或去离子水20倍稀释（2）编号：将样品对应微孔按续编号，每板应设阴性对照3孔和空白对照1孔，其余各孔加入100ul样品稀释液（3）加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照，十微升轻轻震荡混匀（4）温育: 用封板膜封板后。

至37℃温育60分钟（5）洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干（6）加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶标记抗体100ul轻轻震荡混匀。

（7）温育：置37℃温育30分钟（8）洗涤：揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干（9）显色：每孔加终止液1滴（50ul）轻轻震荡混匀（10）测定：10分钟内测定结果，设立酶标仪单波长450nm或双波长450nm/600-650nm测定。

临床免疫化学室SOP

临床免疫化学室SOP1. 概要临床免疫化学室标准操作规程（SOP）用于指导临床免疫化学实验室的各项工作，确保测试的准确性、可靠性和一致性。

本SOP 适用于实验室内的操作流程和实验技术。

2. 实验室准备- 确保实验室设备处于正常工作状态并清洁无污染。

- 检查试剂的质量和有效期，并妥善存放。

- 确保实验室操作区域整洁有序，并且操作台面清洁。

- 检查仪器仪表的校准情况，及时记录校验结果。

3. 样本处理- 收到样本后，进行妥善记录和标识，确保样本的正确性和追踪性。

- 根据需要，进行合适的前处理步骤，如离心、稀释等。

- 根据标准操作程序，将样本分配到合适的试验管或板中。

4. 试剂与标准品准备- 根据测试要求，准备相应的试剂和标准品。

- 确保试剂和标准品的重新制备、储存和标签符合规定要求。

- 对试剂和标准品进行质量控制，并记录结果。

5. 试验操作- 按照标准操作程序进行实验，确保操作步骤的一致性。

- 严格遵守实验室安全操作规定，使用个人防护装备。

- 合理安排实验仪器和设备的使用顺序，有效节约时间和资源。

- 在实验过程中，注意观察和记录实验现象。

6. 结果分析与记录- 对实验结果进行分析和解读，确保结果可靠且准确。

- 对实验结果进行记录，并保留必要的原始数据和结果计算。

- 根据实验室质量管理体系的要求，对实验结果进行复核和确认。

7. 质量控制- 在每批次实验中设置质量控制样本，进行系统的质量控制分析。

- 根据质量控制结果，评估实验结果的可靠性和准确性。

- 对质量控制过程进行记录和审查。

8. 仪器维护和校准- 定期对实验仪器进行维护和保养，确保仪器的正常运行。

- 根据实验室标准操作程序，对仪器进行校准和验证。

- 记录维护和校准记录，并及时处理异常情况。

9. 废物处理- 根据实验室的废物管理程序，进行废物收集、分类和处理。

- 遵守环保法规，将废物正确处理，并保留相应的记录。

10. SOP更新和培训- 定期检查和更新SOP，确保其与实验操作的一致性。

手工免疫检验项目标准操作程序

SOP_13-6 手工免疫检验项目标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：免疫学检验项目。

三、操作人员：检验科授权工作人员。

四、项目内容：抗链球菌溶血素“O ”(ASO) 类风湿因子(RF) 梅毒（TP ）抗链球菌溶血素“O ”(ASO)【方法】快速胶乳法。

【用途】血清中ASO 的测定，用于链球菌感染的诊断。

【原理】高滴度的病人血清被适量的溶血素中和了正常水平的抗体后还有多余ASO ，这些多余的抗体即与ASO 胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。

ASO 胶乳试剂系羚化聚苯乙烯胶乳与溶血素“O ”共价交联的产物。

【试剂】以1g ／L 叠氮钠防腐。

1．溶血素“0”溶液2瓶：每瓶可测定100人次，用时摇匀。

2．ASO 胶乳试剂2瓶：每瓶可测定100人次，用时摇匀。

3．阳性控制血清1瓶：已稀释灭活，可直接使用。

4．阴性控制血清1瓶：已稀释灭活，可直接使用。

【操作】1．血清标本用生理盐水1：15稀释(血清0．1ml+生理盐水1．4m1)。

2．在反应板(和妊娠诊断胶乳试剂使用的相同)各格子上分别滴加稀释待检血清1滴(约50 l)以及阳性和阴性控制血清1滴，再各滴加溶血素“0”溶液1滴，轻轻摇动1分钟，使其充分混匀，均匀分布于方格内。

3．每格各滴加ASO 胶乳试剂1滴，轻轻摇动3分钟(室温为18～20℃)，将反应板平放在实验桌上，有清晰凝集者为阳性，不出现清晰凝集者为阴性，阴性者的ASO ≤250IU ／ml 。

4．阳性者的1：15稀释血清，进一步稀释为1：30和1：60，再重复步骤2和3，出现凝集的血清稀释度和ASO 滴度问的关系大致如下：【附注】1．ASO胶乳加入后，轻轻摇动到本说明指定的时间时应立即记录结果，超过规定时间后再出现的凝集不列为阳性。

阳性控制血清应在本说明指定的时间内出现清晰凝集，但不能将阳性控制血清出现凝集的时间视为判断结果的时间界限。

免疫项目室内质控SOP文件

室内质量控制SOP文件冀中能源峰峰集团总医院检验科免疫组一、室内质量控制原则3二、室内质控品3三、室内质控品的正确使用和保存4四、室内质控的实际操作4所有相关人员上岗前或文件有变动时均应及时阅读此文件并签字。

一、室内质量控制原则1.免疫实验室开展的所有检测项目均要求进行室内质量控制。

2.室内质控应在日常常规工作中进行，以监测方法或者检测系统的稳定性，质控品的测定要与日常标本的检测一致。

3.质控过程要遵守制造商对质控的要求和说明。

测定过程遵循各检测项目的SOP。

4.每个工作日做一次室内质控，每次至少做两个不同浓度水平的质控品。

室内质控图中心线（均值）和控制限（标准差）的设定见下文详细说明。

5.每天检查室内质控结果，依据13s，12s，22s，R4s规则(见下文详细说明)结合质控图分析本次测定结果是否在控。

如违反规则，按失控程序处理(详见下文)并填写失控记录单。

6.每月末打印当月质控图，并对当月质控图进行分析，填写室内质控月报表。

，则分析存在系统误差的可能原因。

如有无违背其它质控规则，如10x二、室内质控品1.室内质控测定项目包括：HbsAg，抗-HCV，抗-HIV。

2.室内质控品特性及说明名称：科美质控品生产厂家：北京科美东雅生物技术有限公司，康彻思坦生物；浓度水平：低浓度；成分：用人血清制备的，采用乙二醇将其稳定。

乙二醇有三重稳定效应。

高渗透性使细菌很难生长，抗氧化性保证组份不易被氧化。

此外，乙二醇会降低凝固点，使得该液在通常的凝固点（-15℃～-20℃）依然保持液态。

液态的质控液可以避免因灌装，干燥，和重新对冻干进行配制而造成的差错。

稳定性: 当密封贮存于-15℃～-20℃时，使用有效期同试剂瓶上标签所标注的时间。

试剂开启后，贮存于2℃～8℃，可保存5天（在有效期内）。

贮存时应避光、隔热、隔绝空气。

溯源性：该质控品中所有分析物可溯源至相应的校准物质。

溯源程序基于prEN ISO 17511。

生物安全：经FDA验证anti-HIV、anti-HCV、HBsAg阴性，但任何方法都不能保证可以完全检测出HIV、HBV、HCV和其它感染源。

免疫项目室内质控SOP文件

室内质量控制SOP文件冀中能源峰峰集团总医院检验科免疫组一、室内质量控制原则3二、室内质控品3三、室内质控品的正确使用和保存4四、室内质控的实际操作 4所有相关人员上岗前或文件有变动时均应及时阅读此文件并签字。

一、室内质量控制原则1.免疫实验室开展的所有检测项目均要求进行室内质量控制。

2.室内质控应在日常常规工作中进行，以监测方法或者检测系统的稳定性，质控品的测定要与日常标本的检测一致。

3.质控过程要遵守制造商对质控的要求和说明。

测定过程遵循各检测项目的SOP。

4.每个工作日做一次室内质控，每次至少做两个不同浓度水平的质控品。

室内质控图中心线（均值）和控制限（标准差）的设定见下文详细说明。

5.每天检查室内质控结果，依据13s，12s，22s，R4s规则(见下文详细说明)结合质控图分析本次测定结果是否在控。

如违反规则，按失控程序处理(详见下文)并填写失控记录单。

6.每月末打印当月质控图，并对当月质控图进行分析，填写室内质控月报表。

如有无违背其它质控规则，如10x，则分析存在系统误差的可能原因。

二、室内质控品1.室内质控测定项目包括： HbsAg，抗-HCV，抗-HIV。

2.室内质控品特性及说明名称：科美质控品生产厂家：北京科美东雅生物技术有限公司，康彻思坦生物；浓度水平：低浓度；成分：用人血清制备的，采用乙二醇将其稳定。

乙二醇有三重稳定效应。

高渗透性使细菌很难生长，抗氧化性保证组份不易被氧化。

此外，乙二醇会降低凝固点，使得该液在通常的凝固点（-15℃～-20℃）依然保持液态。

液态的质控液可以避免因灌装，干燥，和重新对冻干进行配制而造成的差错。

稳定性: 当密封贮存于-15℃～-20℃时，使用有效期同试剂瓶上标签所标注的时间。

试剂开启后，贮存于2℃～8℃，可保存5天（在有效期内）。

贮存时应避光、隔热、隔绝空气。

溯源性：该质控品中所有分析物可溯源至相应的校准物质。

溯源程序基于prEN ISO 17511。

免疫组化标准操作规程(SOP)

免疫组化标准操作规程(SOP)一、实验目的：蛋白物质的定性、定位检测。

二、实验原理：基于利用放射性核素和其他标记物（荧光素，酶，重金属离子等）作为示踪剂，通过免疫亲和（抗原-抗体特异性结合）和核酸杂交（碱基配对特异性连接）途径，在组织切片或细胞涂片上，原位显示生物大分子的动态变化而建立的一门染色技术。

三、实验准备材料：移液器（P1ml，P200，Gilon）吸头（10ul，100ul，1000ul，A某ygen）6cm、10cm培养皿（corning）EP管（1.5mL）试剂：胎牛血清(10099-141Invitrogen)1mol/L的TBS缓冲液0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠3g，柠檬酸0.4g3%H2O2溶液仪器：通风橱，医用微波炉；四、操作流程1）脱蜡前，应将组织芯片在60℃恒温箱中烘烤30分钟。

2）组织芯片置于二甲苯中浸泡15分钟；3）更换二甲苯后再浸泡15分钟；4）二甲苯：乙醇=1:1混液中浸泡10分钟；5）无水乙醇中浸泡10分钟；6）95%乙醇中浸泡10分钟；7）85%乙醇中浸泡10分钟；8）75%乙醇中浸泡10分钟；9）蒸馏水中浸泡10分钟；10）用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭10分钟；11）抗原修复在微波炉里高火加热0.01M柠檬酸钠缓冲溶液（pH6.0）至沸腾后将组织芯片放入，低火维持20分钟；12）自然冷却至室温后，置入蒸馏水中浸泡10分钟；13）10%血清（TBS配制）封闭30分钟；14）吸弃血清，勿洗加入对应的一抗孵育过夜；15）回收一抗，TBS洗2遍，每次5分钟；16）加入二抗，室温孵育60分钟；17）TBS洗4遍，每次5分钟；18）加入DAB染色，直到显浅黄色为止，放入蒸馏水中终止反应；19）用苏木精30秒，清水漂洗7-8遍；20）脱水封片75%乙醇中，浸置5分钟；21）85%乙醇中浸泡5分钟；22）95%乙醇中浸泡5分钟；23）无水乙醇中浸泡5分钟；24）二甲苯：乙醇=1:1混液中浸泡5分钟；25）二甲苯后再浸泡5分钟；26）更换二甲苯后再浸泡5分钟；27）取出后，滴加30ul中性树胶，用盖玻片封片28）晾干，观察结果。

鉴别试验(免疫双扩散法)SOP

鉴别试验（免疫双扩散法）SOP1.目的为规范鉴别试验（免疫双扩散法）的操作，特制定本SOP。

2.范围本SOP适用于鉴别试验的操作。

3.定义无4.职责4.1QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。

4.2QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。

4.3质量总监负责批准本规程。

4.4QA负责本规程执行的监督。

5.引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部。

6.材料6.1仪器设备：微波炉；电子天平。

6.2免疫血清（A、B、C）A、C群血清自中国药品检定研究院或其它检验机构购买的国家标准血清，按照标示量复溶，2～8℃保存。

B群血清是本单位自己免疫动物制备而得, 2～8℃保存。

6.3试剂与配制1.0%琼脂糖：称取琼脂糖1.0g，加入100ml 0.9%生理盐水，在微波炉上加热溶化。

6.4使用器材打孔器、三角瓶、量筒、刻度吸管等。

7.流程图无8.程序8.1原理：在琼脂糖凝胶介质中，在一定的离子强度下，可溶性的抗原和抗体在介质中相向扩散，至相对应性抗原与抗体适合比例时，则可出现免疫沉淀线，再根据沉淀线的种类及特点，鉴别抗原或抗体的性质异同。

8.2操作步骤8.2.1灌胶：将完全溶化的1%琼脂糖溶液趁热用10ml吸管加在载玻片上，每玻片加琼脂糖溶液6～7ml灌制琼脂玻片。

8.2.2打孔：待琼脂玻片凝固后，在玻片上中心打一孔，周围打六孔，各孔中心相距8mm。

8.2.3抗原稀释：取试管数支，将抗原按二倍稀释法用生理盐水连续4～8个稀释度。

8.2.4加样扩散：将稀释后的各抗原浓度依次加到梅花孔四周，抗体加到中心孔。

每孔加样 20～40μl，加样后置密封塑料盒内（盒内放置湿纱布），盖好盒盖，置37℃内水平扩散24小时。

8.2.5染色：用0.9%生理盐水溶液充分浸泡琼脂板，以除去未结合抗原及抗体，再将浸泡好的琼脂板放入0.3%考马斯亮蓝中染色1～3分钟，用脱色液脱至背景无色，沉淀线呈清晰为止。

8.3合格标准A群多糖抗原在抗A群脑膜炎球菌抗体存在下，扩散后应产生明显的沉淀线；C群多糖抗原在抗C群脑膜炎球菌抗体存在下，扩散后应产生明显的沉淀线；B群外膜蛋白抗原在抗B群脑膜炎球菌抗体存在下，扩散后应产生明显的沉淀线。

免疫标准操作程序SOP【范本模板】

标准操作程序［目的］保证检测结果准确可靠。

［该SOP变动程序］本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经专业主管、科主任批准签字。

[标本的采取和保存]采静脉血2ml，分离血清备用。

也可以使用血浆标本进行检测。

标本宜新鲜,无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。

［测定原理]采用兔抗-人IgMu链包被反应被，加入待测标本，同时加入HA V Ag,抗HA V-HRP,如待测标本中含有抗—HA V—IgM时,就能与包被兔抗-人IgMu链结合,并且与HA V Ag，抗-HA V-HRP 结合成复合物，加TMB底物产生显色反应,反之则无显色反应。

［操作步骤］1.将待测标本用生理盐水作（1:1000)稀释，每孔加入稀释标本100ul,设阴、阳性对照各2空，每孔加入阴性对照（或阳性对照）100ul（或2滴)，并设空白对照一孔，封板,置37度孵育20分钟。

2.洗板机洗板:选择洗涤5次程序洗板后拍干。

手工洗板：弃去孔内液体,洗涤液注满各空，静置5秒，甩干，重复三次后拍干.3.每孔加入HA V Ag30ul（或一滴），酶结合物50ul(或一滴），（空白对照孔不加），充分混匀，封板，置37度孵育20分钟.4.洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。

手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各空，静置5秒，甩干,重复三次后拍干。

5.每孔加显色剂A液、B液各50ul（或一滴),充分混匀，封板，置37度孵育10分钟。

6.每孔加入终止液50ul（或一滴），混匀.7.用酶标仪读数，取波长450nm(建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

［结果判断]样品OD值除以阴性对照平均OD值大于或等于2。

1判断为阳性，否则为阴性阴性对照OD值低于0。

05作0。

05计算，高于0.05按实际OD值计算［临床意义］血清中HA V-IgM在亚临床期即已出现，其滴度在感染后3个月维持在1000以上，早被公认为早期诊断甲型肝炎的依据。

免疫细胞储存SOP

免疫细胞储存SOP1.咨询1.顾客通过联系健康顾问进行咨询，了解选择服务方案。

YBK-IM-X5K：冻存3支（可复苏3次，每次50亿-400亿）；YBK-IM-X1Y/YBK-IM-XX1Y：冻存6支（可复苏6次，每次50亿-400亿）；YBK-IM-XX3Y：冻存18支（可复苏18次，每次50亿-400亿）。

2.签约1.提供身份证等相关资料和信息并签署细胞储存相关文件(包括储存合同、健康调查表、知情同意等)。

2.缴纳相关费用，预约采集时间。

并了解采集条件和标准、采集禁忌，以及采集前的注意事项。

3.采集条件和标准：年龄：18-70周岁;体重：男≥50kg，女≥45kg;体温：正常;血压：90mmHg-140mmHg/60mmHg-90mmHg；脉压差不低于30mmHg；脉搏:节律规整，60-100次/分钟，高耐力的运动员不低于50次/分钟；血象正常：白细胞≥4*10^9个/L，淋巴细胞≥0.8*10^9个/ L;一周内没有感冒和急性胃肠炎，没有服药，24小时内没有饮酒；与上次采集时间相隔3个月以上；采血前做血常规、传染病学检测（乙肝、丙肝、梅毒、艾滋等）。

4.提供正规体检机构或二级以上医院相应体检报告，体检内容如下：5.采集禁忌1)凝血功能严重异常；2)近期有明显的活动性出血病史；3)重大脏器功能不全的供者；4)患有各种传染性疾病：如艾滋与梅毒患者；5)T细胞淋巴瘤患者；6)败血症及其他未有效控制的感染；7)女性在月经期和前后三天不宜采集；8)小手术后未满半个月，一般手术后未满三个月，较大手术后未满半年者不宜采集等。

6.采集前注意事项1）采集前一天晚餐不要进食过饱，少吃肉、鱼、蛋、牛奶、豆制品以及油腻食物，不要大量饮水，以免稀释血液，影响采集质量；2）采集前一晚要保持良好的睡眠，充足的休息；3）采集前不要空腹，可提前吃一些清淡饮食，如稀饭、馒头、面包等，可适当补充水分。

4）采集前一周内不宜服用任何药物。