比较不同抗原修复液对免疫组化结果的影响
不同抗原修复液对免疫组化结果的影响
盒 均为 Ｄａ ｏ公司产 品 。 ｋ
３ ．修复液
Ｈ Ｌ缓冲液 （Ｈ７６ 、Ｅ Ｔ Ｃ ｐ ．） Ｄ Ａ缓冲液 （Ｈ８Ｏ 。 ｐ ．）
４ 免疫 组 织 化 学 染 色采 用 Ｓ ． Ｐ法 切 片脱 蜡 人水 ，３ Ｈ。 抑制 内 源性 过 氧化 物 酶 １ｍｉ，水 ｏ２ ０ ｎ
目前 在免 疫组 化实 验 中 ，抗 原修 复是影 响染 色 结果 最关键 的因素 。通 常 ，抗 原修 复效 果 的好坏 取
结果 的影 响 。
材料 和方 法
１ ．Ｔｒ － Ｌ修 复 液 阳性 强 度 较 差 ，非 特 异 ｉ ＨＣ ｓ
性着色明显 ，脱 片率较高 ，抗体 Ｅ Ｒ、Ｐ Ｒ细胞浆
有非 特异 性着 色 ，阳性 细胞 数量 及强度 （ 一卅） 抖 。
２ Ｈ ． 的柠檬酸修复液对显示 细胞膜及细 ．ｐ ６ ０ 胞浆的抗体敏感 ，对显示细胞核的抗体较弱，阳性 细胞数量及强度 （ ＋一抖）（ １ ，抗体 Ｂ Ｃ 图 ） Ｒ Ａ 无
所 需要 最佳 ｐ 值是 不相 同的 ，应 根 据 条件 选 择 最 Ｈ 佳 的 ｐ 值 ，这 一点 应 引起重 视 。选 用 不 同修 复 液 Ｈ 对 同一 实验 结果 影 响很大 ，尤其 是对 一些 弱表 达 的 抗 原 ，很难 显示 出来 ，延 长显 色 时 间易造 成背 景显 色过 深 。Ｅ ＴＡ 适 合 大 多 数 抗 原 修 复 ，特 别 对 一 Ｄ 些 显示 细胞 核 的抗体 如 Ｐ ３ Ｒ、Ｐ ５ 、Ｅ Ｒ及 较 难 表达 的抗体 如 Ｂ Ａ－ ＲＣ ，效 果 更 明 显 ，但 其 染 色 背 景 同 时 加深 ，如 使用 不 当易造 成假 阳性 结果 的判断 。我 们 尝试 在经 Ｅ ＴＡ 修 复后 取 消 某 些 特 殊 抗 体 需 要 Ｄ 作 消化 酶处 理 的步骤 ，同样 取 得 了很好 的效果 ，这
免疫组化中抗原修复方法及修复液的比较
免疫组化中抗原修复方法及修复液的比较邹亮【摘要】目的本实验通过比较几种常用的抗原修复技术在免疫组化中的效果,寻求一种简洁、方便、实用的抗原修复方法.方法分别选取10种细胞核及细胞浆或膜标记的抗体,对理论上阳性的组织进行标记,对每种抗体均分别采用不修复,PH6.0柠檬酸煮沸,PH6.0柠檬酸高温高压修复,PH9.0EDTA煮沸,PH9.0EDTA高温高压修复.结果本实验的20种抗体均标记理论上为阳性的组织,不修复的有16种抗体阴性,水煮热修复与高压热修复的修复效果并无明显差别.抗原修复液中高PH值(9.0)时的染色结果明显好于相同修复方式的低PH值(6.0).结论免疫组化质量与是否进行抗原有关,但与抗原修复方法无关;抗原修复液PH值影响免疫组化质量,掌握抗体最佳的修复液能提高免疫组化结果的阳性率、染色强度,稳定性及准确性.【期刊名称】《健康研究》【年(卷),期】2013(033)003【总页数】3页(P176-178)【关键词】免疫组化;抗原修复;PH【作者】邹亮【作者单位】浙江大学医学院附属第一医院,病理科,浙江,杭州,310003【正文语种】中文【中图分类】R365免疫组织化学技术具有特异性、灵敏性、简洁性等优点,还能够将形态和功能结合,定性、定位和定量相结合,因此,在半个多世纪以来免疫组织化学技术广泛应用于病理诊断,尤其是在肿瘤诊断中不可缺少。
其原理是用已知抗体去检测未知抗原,而抗原在组织固定过程中因蛋白质的氨基与醛基交联成羧基,使部分蛋白抗原决定族被封闭,因此,在免疫组化染色前,必须进行抗原修复,打开其封闭状态使其充分暴露,才能与抗体充分结合,故在免疫组织化学技术中抗原的暴露修复是至关重要的[1]。
自1991年加热抗原修复报道后,免疫组化工作者对抗原修复方法及修复液进行了不断的探索,并对其效果进行比较研究,归纳起来影响抗原修复的因素主要有两种,一是抗原修复的温度,二是抗原修复的PH值。
本文对常用的两种修复液及最常用的两种修复方式进行比较分析。
影响抗原热修复的关键因素
影响抗原热修复的关键因素目前免疫组织化学染色技术已经广泛应用到各级医院临床病理诊断中，但是由于实验条件的差别和传统观念的影响，使得免疫组化染色结果差别很大，从而影响到病理诊断这个“金标准”的含金量，给医院和病人带来一些不必要的损失。
所以，提高免疫组织化学染色技术水平的需要变得越来越迫切。
众所周知，免疫组织化学染色中最关键的步骤莫过于抗原的修复了，而绝大多数常用抗体的修复是通过加热来完成的，可以这样说，抗原热修复是免疫组化的关键技术，会直接影响到最终的染色结果。
1、抗原热修复温度和时间的关系我们日常工作中所使用的组织固定液福尔马林会引起组织蛋白内或蛋白之间的亚甲基发生桥连，具体过程如示：上述反应的结果导致许多抗原决定簇被封闭，而加热可以水解该桥连使抗原被激活。
影响抗原热修复的两个最关键的因素是温度和时间，有人将这两种因素对抗原修复的影响总结为下面的公式：抗原热修复的有效性=加热温度（T）×加热时间（t）也就是说当我们修复时的温度越低则需要修复的时间就会越长；反过来当修复温度增高时则修复的时间可以适当地缩短，才能使抗原决定簇完全暴露，这种反比的关系从MBI单克隆抗体的实验结果表一中也可以清楚地看出。
如果修复强度不够，免疫组织化学染色所显示的只能是修复后暴露出的部分抗原决定簇，而不是组织所含的全部抗原。
这样的染色结果可能会非常弱，或出现假阴性，即使是阳性结果，充其量只能起到定性的作用，不能适应今后对免疫组化进行定量的需要。
这就给我们诊断中定量指标的应用带来困难，例如用来测定耐药的指标。
2、组织固定时间和所需的抗原热修复的关系大量的实验表明，固定时间越长的标本，它所形成的桥连就越紧密，抗原就越难以被激活，所需要的修复强度也就越强。
有意思的是随着固定时间的延长，组织中蛋白对温度的耐受也会相应增高，这可能就是我们对固定时间长的标本加大修复强度的理论基础。
这就提醒我们在做回顾性研究时一定要注意所使用的修复条件，它与新鲜标本的修复条件一定是有所区别的，同等条件下一定要加长修复的时间或提高修复所使用的温度，才可能得到比较满意的结果。
胰酶修复法、高压修复法和微波修复法对免疫组化结果的影响分析
胰酶修复法、高压修复法和微波修复法对免疫组化结果的影响分析韦翠容【摘要】目的探析三种免疫组化抗原热修复方法的对比情况。
方法分别采用胰酶修复法、高压修复法和微波修复法,并根据方法的不同分为酶消化组、高压加热组与微波修复组,三组均实施maxvison试剂盒,检测CD45RO和CDla、Ki-67和CD8、CD4和CD83及CD3染色结果。
结果三种抗原修复方法存在的差异性显著,相比微波修复方法,高压修复法具有较高的阳性率,最次为胰酶修复法。
结论相比胰酶修复法和微波修复方法,高压加热组织抗原修复方法具有操作便捷和经济等优势,能在大量标本中广泛应用。
【期刊名称】《临床检验杂志(电子版)》【年(卷),期】2018(007)001【总页数】2页(P80-81)【关键词】免疫组化染色;抗原修复;高压加热法【作者】韦翠容【作者单位】[1]贵港市人民医院,广西贵港537100;【正文语种】中文【中图分类】R322-34免疫组织化学又名免疫细胞化学，它属于一项新技术，表示待显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过组织化学的呈色反应与抗原体反应，能够对相应抗原予以定量、定位及定性测定。
该项技术不仅具有能紧密结合机能、代谢及形态等优点，而且还具有特异性强、较高的敏感性和操作便捷等优势，现已在神经解剖、鉴别诊断与病理诊断等研究中得到广泛应用[1]。
免疫组化染色的成败和组织中抗原修复技术、抗原性妥善保存具有一定的关联性，在常规石蜡包埋、福尔马林固定的组织中抗原显著伴有一定的问题，要因在其他固定液或者福尔马林中组织会导致蛋白间与蛋白内亚甲基桥的桥连，造成大部分抗原簇被封闭，所以会有效降低染色效果与表达反应，使其对诊断的准确性产生影响[2]。
为使染色效果得到最佳状态，行抗原修复时临床多实施抗原修复技术。
不同抗原修复方法会影响实验结果的表达，本研究采用胰酶修复法、高压修复法和微波修复法等三种不同抗原修复方法，分析比较免疫组化试验结果表达和三种修复方法的关系，现将研究详情报道如下。
不同修复方法对免疫组化染色结果的影响_崔永兴
第３卷第２期唐山职业技术学院学报Ｖｏｌ．３Ｎｏ．２２００５年１２月ＪｏｕｒｎａｌｏｆＴａｎｇｓｈａｎＶｏｃａｔｉｏｎａｌ＆ＴｅｃｈｎｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅＤｅｃ．２００５不同修复方法对免疫组化染色结果的影响崔永兴１涂静宜１李冬梅２李红民３（１－唐山职业技术学院，２－唐山开滦医院，３－唐山协和医院，河北唐山０６３００４）【摘要】目的：探讨不同抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响。
方法：选取常用需要修复的抗体１６种，对每种抗体采用多种修复方法，比较免疫组织化学染色结果。
结果：１６种抗体经修复后，均有较好的阳性表达，其中热修复的高压锅方法背景清晰，阳性颗粒明确，效果最好；微波法次之；胃酶及胰酶修复法结果稍差。
结论：本文通过对临床几种常用抗体在不同抗原修复方法下的表达进行研究表明，抗原热修复法可替代酶消化法，热修复方法中以高压锅抗原修复法效果最好。
【关键词】抗原修复；抗体；免疫组化目前免疫组化技术已成为病理诊断必不可少的重要辅助手段，但常规石蜡切片标本，一般均用１０％中性甲醛固定，而使其抗原蛋白的氨基与固定液中的醛基交联形成醛键、羧甲键，从而封闭了部分抗原决定簇；或由于蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽，因此使其免疫组化标记的敏感性明显降低，甚至出现假阴性。
因此抗原决定簇的充分暴露是免疫组化染色成功的关键。
在免疫组化染色时，通常采用抗原修复方法使抗原决定簇充分暴露。
抗原修复方法主要有两种：一种为化学方法－－即酶消化法，是最早的抗原修复方法，另一种为物理方法－－即热修复法。
但在日常工作中，不同的抗体，试剂公司推荐的修复方法不尽相同，操作起来较繁琐，增加了工作量和成本，而且染色结果也不尽如人意。
为了解决这些问题，提高工作效率和节省试剂，我们对一种需要进行抗原修复的抗体采用高压加热法、微波加热法、胰酶消化、胃酶消化方法分别修复，探讨不同修复方法对染色结果的影响，旨在选取一种简洁、有效的修复方法。
１材料与方法１．１材料：收集唐山市协和医院手术切除的乳腺癌、淋巴瘤、大肠癌标本各１２例，待检组织均经１０％中性福尔马林液固定，常规脱水、透明、石蜡包埋。
3种抗原修复方法对免疫组化染色效果的影响
3种抗原修复方法对免疫组化染色效果的影响郑秋桦;李钰湘;柯野;张海明【摘要】为了确定5种抗体在免疫组织化学染色效果中的最佳修复方法,本文分别采用水煮法、微波法和高压法对抗原进行修复后,按常规免疫组化方法进行染色、镜检.结果表明5个抗体在高压修复下都是强表达,P53、P63在微波修复20 min 下也是强表达.因此,从修复效果、时间及稳定性等角度综合考虑,高压0.1Mpa(121℃)修复2 min是对P53、P63、Ki67、CK5/6、CK7的较佳修复方式.【期刊名称】《韶关学院学报》【年(卷),期】2017(038)012【总页数】4页(P51-54)【关键词】免疫组织化学;抗原修复;染色【作者】郑秋桦;李钰湘;柯野;张海明【作者单位】韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;广州安必平医药科技股份有限公司,广东广州510663【正文语种】中文【中图分类】R446.61免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究.在免疫组织化学的试验过程中，常采用固定石蜡包埋组织，然而组织在使用甲醛固定过程中，形成的醛键会封闭抗原的决定簇，影响抗体和抗原的结合，从而影响染色观察结果；因此，对抗原的修复在免疫组织化学中就尤为重要［1］.不同的抗原修复方法对免疫组化染色结果产生不同的影响［2-3］.如加热抗原修复技术既能保留福尔马林固定石蜡包埋技术良好的组织学形态，又明显提高抗原的检出率，提供良好的IHC染色结果［4-5］；影响加热抗原修复的因素主要包括修复的温度、加热的时间、热源、抗原修复液的pH值等方面［1］.本文采用控制变量法，探究在改良Tris-EDTA(PH9.0)修复试剂中，采用水煮、微波和高压3种不同的热修复方法对P53、P63、Ki67、CK5/6、CK7这5个抗体的免疫组化染色效果的影响.1 材料与方法1.1 试验组织与试剂1.1.1 试验组织由广州安必平（LBP）医药科技股份有限公司提供的阳性组织材料.1.1.2 试验试剂抗体试剂均由LBP公司提供的即用型产品（见表1）；环保透明脱蜡剂；无水乙醇；过氧化物酶封闭液（3%过氧化氢）；二抗试剂：LBP-VBrightI二抗HRP鼠兔通用型（一步法）；DAB显色液（加强型）：1 mL DAB色原/20 mL DAB缓冲液；改良Tris-EDTA(PH9.0)浓缩液（50×）；Mayer’s苏木素染液；PBS 缓冲粉：2 000 mL/包；Tween-20.1.1.3 试剂的配制DAB显色液（加强型）：一滴DAB原液加入至1 mL DAB缓冲液中，该溶液易氧化，现配现用.Tris-EDTA(pH9.0)修复液：改良Tris-EDTA(pH9.0)浓缩液（50×）40 mL加入1 960 mL的蒸馏水搅拌均匀.表1 试验所用抗体信息抗体名称CK5/6 CK7 Ki67 P53 P63克隆号D5、16B4OV-TL12/30 MIB-1 DO7 4A4阳性组织肺鳞癌肺腺癌扁桃体/乳腺癌结肠癌前列腺PBS缓冲液：一包PBS缓冲粉加入蒸馏水2 000 mL搅拌至粉末全部溶解加入4 mL Tween20继续搅拌至完全融合即可.1.2 试验设备Thermoscientific切片机、武汉俊杰电子有限公司生物组织摊烤片机、微波炉、Leica DM500显微镜、Leica ICC50 HD Camera、苏泊尔YS20ED 20 cm高压锅.1.3 方法1.3.1 组织蜡块的切片与前期处理将五种组织蜡块-20℃冷冻，2～3 min后取出，打开空气加湿器减少静电作用，在切片机上连续切片（2μm），放入20%的酒精中展片，再使用防脱载玻片进行捞片，保证每张片捞的方向及位置一样且尽可能在载玻片的中央处，以便阅片及效果对比.每个组织块捞9片，在44℃热水中进行摊片使组织与载玻片平整粘附，无褶皱，60℃的烤片机上进行烤片至组织与载玻片较牢固结合，不会由于重力作用而出现移位，将载玻片转至耐高温塑料切片架后，放入烘片机进行55℃烘片2 h.1.3.2 片子的脱蜡与水化将已完成初步处理的片子放进通风橱中的环保脱蜡剂（代替二甲苯）中进行脱蜡处理3次，每次10 min，确保脱蜡干净后进行梯度水化，梯度水化为无水乙醇→95%乙醇→90%乙醇，每个梯度水化5 min.1.3.3抗原修复1.3.3.1 水煮修复法取2 000 mL修复液于不锈钢锅中，置于电磁炉上加热至沸腾后，放入组织片进行修复，修复时间分别为10 min和20 min.1.3.3.2 微波修复法将组织切片放入2 000 mL修复液中置于微波炉中，微波炉高火（功率750 W）加热至沸腾后，调至中火（功率375 W）开始修复，修复时间分别为10 min和20 min，修复后用自来水迅速降至室温.1.3.3.3 高压修复法将组织切片完全浸置于修复液中，放入高压锅内0.1 MPa（121℃）分别进行修复2 min、2.5 min、3 min和5 min，修复完后，迅速降压降温至常温常压后进行清洗.1.3.4 阻断（内源性过氧化物酶的灭活）立即将修复完后的组织切片进行多次水洗后，置于过氧化物酶封闭液中阻断10min，再进行水洗，然后置于PBS溶液中.1.3.5 抗体孵育从PBS溶液中取出组织切片，迅速甩干大量水珠，放于免疫组化湿盒中，快速滴加即用型一抗，23℃孵育30 min后，用PBS溶液冲洗后，置于PBS溶液清洗缸中取出组织切片去掉大部分水份滴加二抗，室温孵育20 min，再用PBS冲洗后浸泡.1.3.6 DAB显色与苏木素复染从PBS溶液中取出组织切片，甩干大量水分后，迅速滴加DAB显色液，显色3 min后，吸干大部分显色液后，置于DAB清洗液中多次水洗，然后用Mayer’s 苏木素溶液进行复染30 s.1.3.7 PBS返蓝将组织切片放进PBS溶液中进行返蓝1 min，返蓝后的苏木素是标记出细胞核的位置，方便观察时做目标区域的参照物，返蓝后多次水洗.1.3.8 脱水、透明、封片和镜检将片子放进95%乙醇脱水1min后，分别用无水乙醇脱水2次，每次1 min；将切片架放于环保透明脱蜡剂中脱蜡2次，每次3 min，用中性树胶滴入封片后，标记归类；利用Leica ICC50 HD Camera进行拍照保存，并对染色结果进行评分.1.4 评分标准判断评分标准参考文献［6］的方法进行评分.评分方法1：在判断中只考虑阳性细胞所占的百分比，按不同的百分比分级；将阳性细胞百分比分成5级，无阳性细胞为0分，阳性细胞≦25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分.评分方法2：在判断中只考虑阳性细胞的染色程度，按不同的染色强度分级；着色强度无色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分［6］.试验中，Ki67 采用方法 1 的评分方法；CK5/6、CK7、P53和P63采用方法2的评分方法.图1 CK5/6的3种修复方法比较结果图图2 CK7的3种修复方法比较结果图2 结果与分析对5种抗体的3种修复方式，结果分别见图1-5，评分结果见表2.由图1-5和表2可知：5种抗体高压修复的效果均为强表达；微波20 min修复P53和P63均为强表达.CK5/6、CK7和ki67在高压修复较其它两种修复方式有更为理想的染色效果；从节省时间，降低掉片概率及出现背景概率等方面综合考虑，故将Tris-EDTA(pH9.0)高压修复2 min作为最佳修复方式.而P53及P63的微波修复20 min染色强度与高压修复的结果一致，均为强阳性.5种抗体的水煮修复法的染色效果均不理想，主要由于修复液的大量蒸发不但浪费试剂还有可能影响修复液浓度从而导致修复效果不稳定，故不宜使用该方法.微波修复20 min对于部分组织的修复效果可以达到要求，但是微波修复也存在不足，如：长时间的浸泡和机械力容易导致掉片；修复液的大量蒸发浪费试剂，严重时导致干片，抗原失活.综上所述，较佳的修复方式为高压修复2 min.图3 ki67的3种修复方法比较结果图图4 P53的3种修复方法比较结果图3 讨论免疫组织化学的染色质量受整个试验过程多方面因素的影响，如温度、抗原修复方法、抗体浓度、孵育时间及显色时间等多种因素.抗原修复方法是关键的因素之一.由于采用不同的抗原修复方法，导致免疫组化实验结果差异极大甚至出现假阴性.因此寻找理想的抗原修复方式可提高抗原检出率，提高免疫组化结果的准确性［7］.图5 P63的3种修复方法比较结果图表1 3种抗原修复法对免疫组化染色结果的比较注：“0”为阴性；“1”为弱阳性；“2”为阳性；“3”为强阳性抗体名称高压2 min高压2.5 min高压3 min高压5 min水煮10 min水煮20 min微波10 min微波20 minCK5/6CK7Ki67P53P63 3 3 3 3 1 2 1+3 3 3 3 1 2 1 3 3 3 3 1 2 1 2+3 3 3 3 12 1 2+33 3 3 1 2 12++3+3本研究仅对5种抗体采用了3种修复方式的研究，有待一步探究其它的修复方式，以期获得更为直观和方便可行的修复方法.参考文献：［1］姚梅宏,郑智勇.免疫组化抗原修复技术新进展[J].临床与实验病理学杂志,2013,29(5):544-547.［2］陈余朋,张声,王行富,等.不同的抗原修复方法在Ⅳ型胶原免疫组化染色中的应用[J].临床与实验病理学杂志,2014,30(1):98-100.［3］宿颖,刘曼,张辛燕.不同抗原修复方法对KLF4在小鼠舌黏膜上皮中表达的比较[J].北京口腔医学，2014,14(6):344-346.［4］Jagirdar J.Immunohistochemistry:then and now[J].Arch Pathol Lab Med,2008,132(3):323-5.［5］Shi S R,Taylor C R.Extended application of antigen retrieval technique in immunohistochemistry and in situ hybridization[A].Shi S R，Taylor C R，eds.Antigen retrieval immunohistochemistry based research and diagnostics[C].Hoboken:John Wiley,2010:25-45．［6］许良中，杨文淘.免疫组织化学反应结果的判断标准[J].中国癌症杂志,1996,6(4):229-231.［7］何新明,顾霞,郭文婷,等.免疫组织化学染色存在的问题及解决方案[J].实用医技杂志,2017,24(8):871-872.。
不同的抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响
【 关键词】免疫组织化学；抗原修复
中图 分类 号 ：Ｒ ４ ． ４ ６６ 文 献标 识码 ：Ａ
文章编号：１７ －６ ９ （０ ９ ３０ ６ —３ ６４４ ５ ２ ０ ）０—０ ２０
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不同抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响
Ｂ ｌ 用 ｐ ９ ０ ｆ —Ｅ Ｔ ｅ一２ Ｈ ．Ｔ ｓ Ｄ Ａ热修 复表达 效果好 ： ｉ Ｃ—ｅ Ｂ一２ 、 Ｄ １ ｒ ｂ 、 Ｃ ［７用 １ｒｒ ｌ． ６ ０柠檬 酸盐缓 冲液热修 复 ０ ａ ／ｐ ． ｒ￣ ＩＨ
效果好 ； 用 ０ １５ ａ（ ．２ ％胰 蛋 白酶 修复表 达效果 好 ； Ｄ ４修 复后表 达过 强； Ｒ、Ｒ、￣ ３ Ｂ ｌ 、（一ｅｂ Ｃ３ Ｅ Ｐ １ 、 ｃ一２ ： ｒＢ一２ Ｐ Ａ ３ 、Ｓ 、 Ｃ３１ 用水浴热修 复的表 达效果均优于微波热修复法。结论 Ｊ１７
［ 键词 ］ 免疫组化 ； 原修 复 关 抗
免 疫组化的 染色质昂 受不 同抗原 修 复方法的影 响。
掌握抗体最佳 的修 复方法能极大提高免搜组 化结果的 阳性率 及准确率 。 ［ 中图分类号］ Ｒ ４ ，１ ４６ ６ ［ 文献标识码 ］ Ａ
Ｔｈ ｆｅ ｔｏ ａ ｉｓ ａ ｔｇ ｎ ｒ ｐａｒｎ ｅｈ ｄ ｎ ｔ ｅ ｒ ｓ ｌｓｏ ｍ ｍ ｕ ｈｓｏ ｈｅ ｉｔ ｙ ｓａｎｉ ｅ ｅ ｃ ｆｖ ｒｃ ｎ ｉｅ ｅ ｉｉｇ ｍ ｔ ｏ ｓ ｏ ｈ ｅ ｕｔ ｆｉ ｎｏ ｉｔ ｃ ｍ ｓｒ ｔ ｉ ｎｇ
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抗原修复方法及注意事项
柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法(强烈推荐)1.适用范围：适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果优于微波修复法和直接煮沸修复法,使得免疫组化结果更加可靠2.仪器设备：市售不锈钢家用压力锅，大小尺寸可根据需要而定(内径18cm为好)；1000-1500W电炉一台；不锈钢或耐高温塑料切片架。
3.所需试剂：0.01M柠檬酸型缓冲液，pH=6.0±0.14.操作步骤：(1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。
(2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液(800-1500ml)于压力锅中，大火加热直至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。
盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷汽，从喷汽开始计时，1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温(稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却)，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS(pH=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分钟(2×3')。
(3)按有关试剂盒的操作步骤执行。
5.注意事项：(1)加热时间长短的控制很重要，从组织切片放入缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5-8分钟为好，时间过长可能会使染色背景加深。
(2)必须使用不锈钢或耐高温塑料切片架，不能使用铜架，以防缓冲液pH值增高而导致掉片。
(3)高压锅离开火源后必须等缓冲液冷切后，才能把切片取出。
(4)为防止组织脱落，玻片必须经清洁处理后，涂覆Poly-L-Lysine((5)缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。
EDTA抗原热修复法1.适用范围：适用于部分中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复。
2.仪器设备：电磁炉、不锈钢锅和耐高温塑料染色架。
3.所需试剂：EDTA抗原修复液，pH9 .04.操作步骤：(1)抗原修复液的配制：根据所需工作液的量，取迈新公司产品MVS-0098适量，按1:50的比例稀释。
抗原修复技术及其在免疫组化中的应用
抗原修复技术及其在免疫组化中的应用福尔马林固定时，组织中的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成了醛键，使得不少抗原决定簇被封闭。
同时，由于甲醛的聚合作用，使蛋白质分子间相互交联形成大分子网络，也导致了抗原决定簇被掩盖，这就使得相当部分的抗原不能与抗体很好是进行反应。
因此，抗原修复也是影响免疫组化染色结果的基本因素。
抗原修复(Antigen retrieval ，AR)技术，建立在Fraenkel-conrat等人[1]一系列生物化学研究，经1991年shi等人[2]发展。
抗原修复是指石蜡、冰冻、火棉胶、塑料切片免疫组织化学（IHC）前用胰蛋白酶、尿素、表面活性剂、微波缓冲液和金属盐等，使被掩盖的抗原决定簇或变性的抗原重新暴露或抗原性得到一定程度的恢复过程。
抗原修复能最大程度地恢复在制片等过程中损失的抗原性，使原来认为不能在石蜡切片上进行IHC的许多抗体获得了良好的染色结果，成为一种有效的补救措施。
本文的目的是概述AR-HIC的发展、应用和标准化。
一、AR技术加热AR技术微波加热方法. 在传统标准方法,经脱蜡、脱水和用3%H2O2阻断内源性过氧(化)物酶，石蜡切片经蒸馏水冲洗，放置在塑料Coplin缸中。
加入AR液，如蒸馏水、缓冲液、金属盐液、尿素等，盖上并置家用微波炉加热5或10分钟（注意防止切片干躁）。
有时在加热5分钟后，间隔1分钟，再加热5分钟（在第一个5分钟后检测液体高度）。
加热后，从微波炉取出塑料Coplin缸，冷却15分钟。
片子经蒸馏水冲洗二次后在PBS液中浸5分钟，才进行IHC染色。
为了保持一致的加热条件，必须设定靠近微波炉中心相同的位置及同一编号的Coplin缸，按照不同的抗体设定不同的加热时间，尽可能的建立标准的加热条件。
微波（MW）加热过程如下：在专用盒内放入200ml柠檬酸缓冲液（PH6.0±0.1），并盖上带有小孔的盖子，微波加热至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架中，放入已沸腾缓冲液中，有作者提供做免疫组化时采用微波炉中等功率800W[3]，微波炉选用解冻档的国产家用微波炉(根据目前的研究,建议用医用微波炉)，中档继续处理10-20分钟；取出微波塑料缸冷却至室温，从缓冲液中取出玻片，片子经蒸馏水冲洗二次，之后用PBS（PH7.2-7.4）冲洗两次，每次3分钟。
不同抗原修复液和固定时间对免疫组化结果的影响
不同抗原修复液和固定时间对免疫组化结果的影响【摘要】目的针对不同的抗原修复液与时间对免疫组化所产生的影响进行探讨。
方法取出26例乳腺浸润性导管癌标本试样。
其中的每例中附着4个时间点，这四个时间点组分别为：立即固定组，延迟12小时固定组，延迟24小时固定组和延迟48小时固定组。
依次对所选取4块肿瘤组织，在肿块部位进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋和切片等相关操作，利用行he染色方法验证试验中的肿瘤组织，再通过抗原修复液展开免疫组化验证实验。
结果ck7、er和c-erbb-2在4组试样在不等的时间和不同的抗原修复液的乳癌组织间表现出了不同的效果，并且结果的差异可以从统计学角度进行分析。
结论在本实验中，所进行延迟固定的组织，在通过充分固定和进行选取抗原修复液a[高温高压edta（ph9.0）缓冲液修复）]、抗原修复液b[高温高压edta（ph8.0）缓冲液修复]、抗原修复液c[高温高压柠檬酸盐（ph6.0）缓冲液修复]和抗原修复液d[微波炉edta（ph9.0）缓冲液修复法]的前提下能够进行免疫组化检测，但需要注意的是尽量减少和避免延迟固定时间。
【关键词】抗原修复液；固定时间；免疫组化doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.089 文章编号：1004-7484（2012）-08-2487-02随着医学技术和相关领域的不断发展，免疫组织化学技术作为一门新兴的学科出现了。
它是一门基于免疫和分子生物学与病理形态学等学科综合的技术，主要是通过已知抗体或抗原进行对实验中的组织细胞中探测的抗原或抗体检测。
典型特征包括操作易于实现，准确性高和特异性强，并且能够将形态和机能相互整合。
该种技术已在实际中能够进行病理和鉴别诊断，组织胚胎和神经解剖等相关领域的实验研究[1]。
通常情况下，只有在正确及时的固定离体组织前提下，免疫组化技术才能得出精确度高的实验结果。
但是，由于实际操作中存在大量的影响因素造成不能正确及时的固定离体组织，特别是在进行尸检标本时，对实验的要求更高。
不同方式的抗原修复对免疫组化结果的影响
不同方式的抗原修复对免疫组化结果的影响目的：探讨免疫组织化学中不同抗原修复方式对染色结果的影响。
方法：采用高温高压修复法、微波修复法和酶消化法对病理科采用的四项免疫组织化学标记（p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1）进行染色，在显微镜下对染色阳性率进行比较。
结果p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1四项标记在三种修复方法下均具有较高的阳性率。
高温高压修复法、微波修复法的染色结果阳性率较高，与酶消化法相比，有统计学意义（P＜0.05）。
结论：三种修复方法均有实用性，三者相比，高温高压修复法、微波修复法修复效果更好，对病理诊断指导意义较大。
标签：免疫组化；抗原修复；方法对比免疫组化技术是病理科常见鉴别技术，在病理诊断中发挥显著作用。
石蜡切片由于在制作过程中使用大量有机溶剂（酒精、二甲苯）和包埋过程中加热处理使抗原活性丧失，所以通常采用抗原修复方法来提高石蜡切片免疫组化反应的敏感性。
抗原修复的质量在一定程度上决定了染色结果的好坏，从而影响诊断结果的判定[1]。
目前，抗原修复的方法有酶修复法、高温高压修复法、微波修复法等。
本科室采用不同抗原修复法对p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1进行比较获取最佳抗原修复方法。
1 材料1.1 材料：选用新疆医科大学第二附属医院病理科2010年3月-2016年6月期间手术切除的经病理证实为食管鳞癌的石蜡包埋组织共150例。
经两位病理医师诊断确诊，组织直径在3cm以上，苏木精-伊红染色法（HE）染色切片细胞清晰，对比度明显、颜色鲜艳。
1.2 主要试剂：即用型p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1一抗，二抗，DAB 试剂，高压锅、微波炉。
2 方法2.1 染色方法：组织经4%甲醛固定，常规石蜡包埋，3～5μm连续切片，60℃烤箱烤片过夜备用。
抗原修复法分三组：①将切片置于盛有柠檬酸盐缓冲液的高压锅内高压修复3min；②用柠檬酸盐缓冲液微波加热10min；③或用胰酶或胃酶消化15min。
抗原修复方法及注意事项
抗原修复方法及注意事项柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法(强烈推荐)1.适用范围：适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果优于微波修复法和直接煮沸修复法,使得免疫组化结果更加可靠2.仪器设备：市售不锈钢家用压力锅，大小尺寸可根据需要而定(内径18cm为好)；1000-1500W电炉一台；不锈钢或耐高温塑料切片架。
3.所需试剂：0.01M柠檬酸型缓冲液，pH=6.0±0.14.操作步骤：(1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。
(2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液(800-1500ml)于压力锅中，大火加热直至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。
盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷汽，从喷汽开始计时，1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温(稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却)，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS(pH=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分钟(2某3')。
(3)按有关试剂盒的操作步骤执行。
5.注意事项：(1)加热时间长短的控制很重要，从组织切片放入缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5-8分钟为好，时间过长可能会使染色背景加深。
(2)必须使用不锈钢或耐高温塑料切片架，不能使用铜架，以防缓冲液pH值增高而导致掉片。
(3)高压锅离开火源后必须等缓冲液冷切后，才能把切片取出。
(4)为防止组织脱落，玻片必须经清洁处理后，涂覆Poly-L-Lyine((5)缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。
EDTA抗原热修复法1.适用范围：适用于部分中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复。
2.仪器设备：电磁炉、不锈钢锅和耐高温塑料染色架。
3.所需试剂：EDTA抗原修复液，pH9.04.操作步骤：(1)抗原修复液的配制：根据所需工作液的量，取迈新公司产品MVS-0098适量，按1:50的比例稀释。
比较不同抗原修复液对免疫组化结果的影响
ｍｏ ｎ ｇ Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｓ ｏ ｆ Ａｃ ｉ ｎ ｅ ｔ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｂ ａ ｕ ｍａ ｎ ｎ ｉ ｉ ｉ ｎ Ｔ ｅ ｈ ｒ ａ ｎ［ Ｊ ３ ．
箱 中烘烤 ２ ｈ以增 强 吸附力 。
１ ． ２ 试 剂
用 哪种缓 冲体 系 ， 阴性对 照均 背景 清晰 ； 比较 不 同公 司两 种抗 体 的染 色 结 果 ， 我们很容易看 出 Ｂ Ｄ 公 司
ＭＵＣ １抗体 分别 购 自 Ｂ Ｄ公 司 （ ５ ５ ０ ４ ８ ６ ） 和 Ａｂ — ｃ ａ ｍ公司（ ａ ｂ １ ０ １ ２ ０ ） ， 使 用前 按适 当 比例 稀 释 。免疫
选 择 不 同的缓 冲液 ， 可 能 对 免 疫组 化结 果 产 生 不 同
ｍｉ ｎ ， 水洗 ， 每 例切 片均 经 上 述两 种 不 同抗 原 修 复 液 高 压处 理 ２ ． ５ ｍｉ ｎ（ 排 气 后 开始 计 时 ） ， 之后 冲 凉水 去压， 开 盖后 自然冷 却 至室 温 。修 复 后 按 照试 剂 盒 说 明书 进行 操作 ， 最终 脱水后 进 行封 片镜 检 。
复 技术 发现 以来 ， 该 过 程 已经 成 为 免 疫 组 化 中必 经 的一步口 。据 文 献 报 道 ， 在 福 尔 马 林 固定 的 组 织
中， 大约 有 ８ ５ 的抗 原经 过优 化 的 抗原 修 复 都会 得 到 较好 的免疫 组化 结果 口 。
目前 研 究 者 对 于抗 原 修 复 的 具 体 机 理 尚不 清 楚， 且抗 原修 复方 式不 同 ， 结 果也 各不 相 同 。在 本文
2021不同抗原修复方法对食管癌免疫组化染色的影响范文3
2021不同抗原修复方法对食管癌免疫组化染色的影响范文 免疫组化染色主要通过利用抗原抗体特异性反应，对细胞或组织内抗原物质作定位或定性标记的方案，其操作相对简单，且灵敏度、特异性均比较高，在临床病理诊断中有较高的应用价值。
但有研究表示，在病理诊断中常用的福尔马林来固定石蜡包埋组织，通常可能产生蛋白交联反应，对组织、细胞内部某些蛋白抗原可能产生遮蔽影响，阻断了抗体与抗原之间的结合，为充分暴露被封闭的抗原，一般需使用抗原修复技术[1].且研究显示，不同抗原修复方法可能对免疫组化染色结果产生直接性影响[2].基于此，为分析不同抗原修复方法对食管癌免疫组化染色的影响，本文作者选取4种不同抗原作染色标记，并选用微波及高压抗原修复方案作对比研究，现报道如下。
1材料与方法 1.1材料 于我院病理科收集食管癌组织标本12 例。
所有组织标本均经福尔马林固定，石蜡包埋，并连续切片，厚度为4um,放于载玻片内，在温度为 50 ℃烤箱内过夜，避免脱片。
1.2仪器与试剂 仪器：微波炉1 台，压力锅 1 只，电磁炉 1 台。
试剂：CD4（1:40），鼠抗人CD4T 细胞单克隆抗体。
CD8（1:250），兔抗人单克隆抗体。
IL17（1:500），羊抗人IL17 抗体。
Ki67（1:100），兔抗人单克隆抗体。
枸缘酸盐CB,PBS 磷酸盐缓冲液，试剂盒。
1.3方法 将组织切片放入二甲苯内作脱蜡处理，使用梯度乙醇作水洗处理，放于过氧化氢中，浸泡10 min,清除过氧化物酶活性。
抗原修复。
（1）高压修复法。
将 2000 mL 左右的柠檬酸盐缓冲液放入高压锅，使用电磁炉将其煮沸，导入耐高温塑料切片架，脱蜡水化后，将组织切片缓慢放入高压锅，使其位于液面下，随后加热，待高压锅盖开始喷气，控制加热时间为 15 min,关闭电磁炉。
将高压锅放于水下冷却冲洗5 min,打开锅盖，继续冷却。
随后使用 PBS 缓冲液冲洗，使用试剂盒作抗体孵育，作 DAB 显色，复染，封片。
高pH值抗原修复液在免疫组化组织脱蜡和修复中的应用
高pH值抗原修复液在免疫组化组织脱蜡和修复中的应用罗小平;赖均鹏【摘要】目的探讨高pH值抗原修复液在免疫组化组织脱蜡和修复中的应用效果.方法选取CK、CEA、ER、PR、Ki-67、P53、CerbB-2、COX-2、LCA、L26、UCHL-1等常用检测项目,应用高pH值抗原修复液作为免疫组化组织脱蜡、抗原修复剂,并进行组织脱蜡、水化、抗原修复.结果使用高pH值抗原修复液修复的组织脱蜡干净,背景清晰,着色均匀,阳性定位准确,无非特异性着色.结论高pH值抗原修复液可以组织脱蜡、水化、抗原修复一体完成,缩短时间,取代二甲苯脱蜡,减少二甲苯对操作人员的危害,有利于身体健康和环境保护.【期刊名称】《现代医院》【年(卷),期】2011(011)012【总页数】2页(P50-51)【关键词】二甲苯;脱蜡;抗原修复;免疫组化【作者】罗小平;赖均鹏【作者单位】佛山市第一人民医院,广东佛山,528000;佛山市第一人民医院,广东佛山,528000【正文语种】中文免疫组织化学技术是一种综合性技术，它包括组织切片、二甲苯脱蜡、抗体稀释与保存、抗原修复、内源性酶的处理、显色系统及衬染剂等。
组织脱蜡干净，使得背景清晰，着色均匀，抗原修复使得细胞内抗原决定簇重新暴露［1］，提高抗原检测率。
因此组织切片脱蜡是否干净，抗原修复效果的好坏直接影响着免疫组化染色的质量。
目前，大多数医院都采用传统的二甲苯脱蜡，柠檬酸抗原修复，我们使用一种高pH值抗原修复液同时进行组织脱蜡、水化、抗原修复，获得满意结果，现介绍如下。
1 材料与方法1.1 材料选取我院病理科2011年6～7月检测的免疫组化项目，包括有 CK、CEA、ER、PR、Ki－67、P53、CerbB－ 2、COX－2、LCA、L26、UCHL－1等常见抗体100多种，KJ23B－DE微波炉由广东美的微波炉有限公司生产，一抗、高pH值EnVisionTM FLEX检测试剂盒、Autostainer(Plus)自动免疫组化染色仪均为丹麦Dako公司生产。
3种抗原修复法对免疫组化结果的影响
3种抗原修复法对免疫组化结果的影响刘宙;杨伟明;刘华庆;王超宇;赵洪远;邬江华;黄琴【期刊名称】《贵州医药》【年(卷),期】2009(33)11【摘要】目的采用微波加热、高温加热和酶消化进行组织抗原修复的免疫组织化学技术,比较三种抗原修复方法暴露抗原之间的区别,寻求最佳的免疫组化方法.方法微波修复组、高压加热组和酶消化组,各组用Envision试剂盒.检测Ki-67、CDla、CD 83、CD 3、CD 4、CD 8、CD 45 RO染色结果.结果三种抗原修复方法有明显差异,高压加热最佳,微波加热其次,酶消化效果最差.结论高压加热组织抗原修复方法经济、操作简单,适合大量标本使用.【总页数】3页(P970-972)【作者】刘宙;杨伟明;刘华庆;王超宇;赵洪远;邬江华;黄琴【作者单位】遵义医学院附属医院甲乳科,563003;遵义医学院附属医院甲乳科,563003;遵义医学院附属医院病理科,563003;遵义医学院附属医院甲乳科,563003;遵义医学院附属医院甲乳科,563003;遵义医学院附属医院甲乳科,563003;遵义医学院附属医院甲乳科,563003【正文语种】中文【中图分类】R392.11【相关文献】1.抗原修复法和固定液pH值对切创皮肤免疫组化染色的影响 [J], 杜宇;官大威;赵锐;吴旭;胡更奕2.胰酶修复法、高压修复法和微波修复法对免疫组化结果的影响分析 [J], 韦翠容;3.不同抗原修复法对免疫组化HBcAg染色结果的影响 [J], 黄建平;杨映红;吴雪晶4.三种不同抗原修复法对二种免疫组化染色法的影响 [J], 刘俊;陈宣世;龙汉安5.两种抗原修复法对牙-牙周免疫组化切片的影响 [J], 史金娜;李永恒;马肃;赵尔扬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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柠檬 酸缓 冲液 （ ｐ Ｈ ６ ． ０ ） 、 Ｔ Ｅ缓 冲液 （ ｐ Ｈ ７ ． ６ ） 。
１ ． ４ 免 疫 组化染 色方 法 将组 织 切 片脱 蜡 入 水 ， 滴加 ３ Ｈ Ｏ 孵 育 １ Ｏ
修 复是 免疫 组化 实 验 中 的关 键 步 骤 ， 已有 文 献 针 对 现 有 的修复 方式 做 了 一个 初 步 的 比较 ， 结 果 显 示 微 波 高压 修复 、 微 波热 修 复 以及 高压 热 修 复 在 相 同 的 条件 下具有 相似 的结 果 ］ 。然 而 ， 抗原修复过程 中
２ ． １ 柠檬 酸缓 冲液 Ｖ Ｓ Ｔ Ｅ缓 冲液 ， 肺 癌 在肺 癌组 织切 片 中 ， 结果 如 Ｆ ｉ ｇ １ 所示 ， 无 论 采
福尔 马林 固定 石蜡 包埋 的肺 癌组织 切 片及结 肠 癌组 织切 片均 来 自吉 林 大 学 中 日联 谊 医 院 ， 切 片 厚 度为 ３ ｍ， 每个 蜡块 连续切 取 多张并 贴 附在 商用 硅 包 被 的载玻 片 （ 世 通公 司 ） 上， 切 片 吸附 后 在 ６ ５ ℃烤
Ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ａ ｎ ｄ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ， ２ ０ ０ ８， ５ ３ （ １ ）： １ ４ ０ ．
［ － ９ ３ Ａｂ ｄ ｉ — Ａ ｌ ｉ Ａ， Ｈｅ ｎ ｄ ｉ ａ ｎ ｉ Ｓ ， Ｍｏ ｈ ａ ｍｍａ ｄ ｉ Ｐ， ｅ ｔ ａ １ ． Ａｓ ｓ ｅ ｓ ｓ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｂ ｉ ｏ —
箱 中烘烤 ２ ｈ以增 强 吸附力 。
免疫组织 化学 （ Ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ｈ ｉ ｓ ｔ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ， Ｉ ＨＣ）
技术 公 司 。 １ ． ３ 修 复 液
是 一种 通过 抗原 抗体 特异 性反 应来 检测 并定 位蛋 白
的方法 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 目前 广泛 应 用 于 组 织病 理 学 诊 断 Ｉ １ ］ 。抗 原
ｆ ｉ ｌ ｍ Ｆｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｒｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｔ ｏ Ｉ ｍｉ ｐ ｅ ｎ ｅ ｍ ａ ｎ ｄ Ｃｉ ｐ ｒ ｏ ｆ ｌ ｏ ｘ ａ ｃ ｉ ｎ ａ —
ｍｏ ｎ ｇ Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｓ ｏ ｆ Ａｃ ｉ ｎ ｅ ｔ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｂ ａ ｕ ｍａ ｎ ｎ ｉ ｉ ｉ ｎ Ｔ ｅ ｈ ｒ ａ ｎ［ Ｊ ３ ．
ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｙ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｏｆ Ａｃ ｉ ｎｅ ｔ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｂ ａ ｕ ｍａ ｎ ｎ ｉ ｉ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ
ｆ ｒ ｏ ｍ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｉ ｚ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｗｏ ｔ ｅ ｒ ｔ ｉ ａ ｒ ｙ ｃ ａ ｒ ｅ ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｓ ［ Ｊ ￣ ． Ｆ Ｅ ＭＳ
选 择 不 同的缓 冲液 ， 可 能 对 免 疫组 化结 果 产 生 不 同
ｍｉ ｎ ， 水洗 ， 每 例切 片均 经 上 述两 种 不 同抗 原 修 复 液 高 压处 理 ２ ． ５ ｍｉ ｎ（ 排 气 后 开始 计 时 ） ， 之后 冲 凉水 去压， 开 盖后 自然冷 却 至室 温 。修 复 后 按 照试 剂 盒 说 明书 进行 操作 ， 最终 脱水后 进 行封 片镜 检 。
我们 分 别对肺 癌 和结肠 癌两 类组 织切 片进 行免 疫 组化 染色 实验 ， 每类 组织 均设 有 阴性对 照 、 Ａｂ ｅ ａ ｍ 公 司抗 体组 和 Ｂ Ｄ 公 司抗 体 组 ， 每 组 切 片分 别 进 行 ＴＥ缓 冲体 系修 复 和柠 檬 酸 缓 冲体 系 修 复 。所 有 切 片均 由 Ｏ ｌ ｙ ｍｐ ｕ ｓ 成 像 系统拍 摄 。
２ 结 果
的影 响 。在本 文 中 ， 我们 选择 高压 热修 复方式 ， 研 究 两种 不 同抗 原 修 复液 ， 即柠 檬 酸缓 冲液 及 Ｔｒ ｉ ｓ — Ｅ Ｄ —
ＴＡ（ ＴＥ ） 缓 冲液 ， 对免疫 组 化结果 的影 响 。
１ 材 料 和 方 法
１ ． １ 组 织
Ｊ ｕ ｎ ｄ ｉ ｓ ｈ ａ ｐ ｕ ｒ Ｊ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ．， ２ ０ １ ４， ７ （ １ ）： ｅ ８ ６ ０ ６ ．
（ 收 稿 日期 ： ２ ０ １ ５ —０ ４ —２ ９ ）
文章编号 ： １ ０ ０ ７ —４ ２ ８ ７ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ８ —１ ２ ４ ６ —０ ３
Ｃｈｉ ｎ Ｊ Ｌａ ｂ Ｄｉ ａ ｇ ｎ， Ａｕ ｇ ｕ ｓ ｔ ， ２ ０ １ ５， Ｖｏ ｌ １ ９， Ｎｏ ． ８
［ － ８ ￣ Ｗｒ ｏ ｂ ｌ ｅ ｗｓ ｋ ａ Ｍ Ｍ， Ｓ ａ ｗｉ ｃ ｋ ａ — Ｇｒ ｚ ｅ ｌ ａ ｋ Ａ， Ｍａ ｒ ｃ ｈ ｅ ｌ Ｈ， ｅ ｔ ａ １ ． Ｂ ｉ ｏ ｆ ｉ ｌ ｍ
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比较 不 同抗 原 修 复液 对 免 疫 组 化 结 果 的影 响
王 琦 ， 王 一 鸣 ， 刘 铁 ， 郝 苗 ， 丛 宪玲。 ， 任 光旭”
（ １ ． 延边大学医学院 ， 吉林 延 吉 １ ３ ３ ０ ０ ０ ； ２ ． 吉 林 大 学 中 日联 谊 医 院 ， 吉林 长 春 １ ３ ０ ０ ３ ３ ； ３ ．延 边 大 学 附属 医 院 ， 吉林 延吉 １ ３ ３ ０ ０ ０ ）