2多糖的提取和分离
多糖的提取方法
多糖的提取方法植物和动物体内含有丰富的多糖，在医药、食品、化妆品等领域有着重要的应用价值。
为了充分利用这些多糖资源，科学家们一直在探索各种多糖的提取方法。
本文将介绍几种常用的多糖提取方法，包括热水提取法、酶解法、酸碱法、超声波法和微波法。
一、热水提取法热水提取法是一种简单且常用的多糖提取方法。
首先，将植物或动物材料粉碎成粉末状，然后用适量的热水浸泡一段时间。
随后，将浸泡液过滤，得到的滤液中含有多糖。
最后，通过浓缩、沉淀和干燥等步骤，得到多糖提取物。
二、酶解法酶解法是利用特定的酶对植物或动物材料中的多糖进行水解的方法。
首先，将材料粉碎成粉末状，然后用适量的酶液浸泡一段时间，酶液中的酶能够降解多糖。
随后，将酶解液经过滤、浓缩和沉淀等步骤，得到多糖提取物。
三、酸碱法酸碱法是利用酸或碱对植物或动物材料中的多糖进行提取的方法。
首先，将材料粉碎成粉末状，然后用适量的酸或碱溶液浸泡一段时间。
酸或碱的作用能够将多糖与其他成分分离。
随后，通过中和、过滤、浓缩和沉淀等步骤，得到多糖提取物。
四、超声波法超声波法是利用超声波的机械作用对植物或动物材料进行提取的方法。
首先，将材料粉碎成粉末状，然后用适量的溶剂浸泡一段时间。
随后，将材料置于超声波设备中，超声波的振动能够促进多糖的释放。
最后，通过过滤、浓缩和干燥等步骤，得到多糖提取物。
五、微波法微波法是利用微波辐射对植物或动物材料进行提取的方法。
首先，将材料粉碎成粉末状，然后用适量的溶剂浸泡一段时间。
随后，将材料置于微波设备中，微波辐射能够加速多糖的释放。
最后，通过过滤、浓缩和干燥等步骤，得到多糖提取物。
在多糖的提取过程中，需要注意以下几点：首先，选择合适的提取方法，根据不同的多糖类型和材料特性进行选择；其次，控制提取条件，如温度、时间、酶的浓度等，以保证提取效果；最后，采用适当的分离和纯化方法，以得到纯度较高的多糖提取物。
多糖的提取方法多种多样，每种方法都有其适用的场景。
多糖提取分离的基本流程
(1)硫酸-蒽酮试剂的配制
称取0. 1g蒽酮至容量瓶中，加少量浓硫酸，搅拌使其溶解，加浓硫酸至50ml摇匀，得0.2%的硫酸-蒽酮试剂，尽量现配先用，也可放4摄氏度冷藏备用，若颜色变绿，则说明已变质不能使用。
(2)方法
馏分隔管检测，每管取0.5ml，在冰浴中加入2ml硫酸-蒽酮试剂，然后在沸水中煮10~15min, 自来水冷却，放至室温。
(3)紫外检测
主要看610nm出吸收值，合并馏分。
(五)凝胶G进一步纯化
通常采用G-100或G-200不断进效液相凝胶柱进行检测
<2>洗脱
样品浓度在20mg/ml左右。先用水洗脱，再用NaCl梯度洗脱，小试时的梯度应密集一些，0.05, 0.1, 0.3, 0.5mol/L洗脱，每瓶8ml, 10min左右一瓶即可。根据紫外检测的结果，再进行梯度的修改。
< 3>合并流分
硫酸-蒽酮法结合紫外检测
(四)离子交换纤维素(DEAE-纤维素)进行初步分离
一般选用DE-52型离子交换纤维素
<1 >柱的预处理
加蒸馏水浸泡过夜，期间换几次水，每次除去细小颗粒，，用0.5mol/LHCl溶液浸泡1~2h, 蒸馏水漂洗至中性;再用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1~2h, 蒸馏水漂洗至中性。
(一)提取
水提得到的粗多糖水溶液，加入95%乙醇使含醇量达80%，4摄氏度静置过夜，多糖析出。减压抽滤，用95%乙醇洗至上清液无色，挥干醇。
(二)除蛋白
这是至关重要的一步，由于蛋白是大分子，它的存在会干扰多糖的纯化。一般选用sevage法萃取或离心，多糖浓度为1mg/ml, 氯仿-正丁醇比例通常在3:1~5:1之间，变性的蛋白质一般在两相交界处产生一条白色的带。建议进行小试，确定最佳比例，同时确定除蛋白的次数，如果含量较多建议八次以上，含量较少的话四到五次即可。
多糖提取分离的原理和方法
多糖提取分离的原理和方法
多糖提取分离是指从植物、海洋生物、微生物等来源中提取和分离多糖类化合物的过程。
其原理主要基于多糖的化学性质和溶解性特点。
多糖提取分离的方法主要有以下几种：
1. 溶剂提取法：利用有机溶剂（如水、醇类、醚类等）将多糖提取出来。
这种方法适用于多糖相对溶解性较好的样品。
2. 酶解法：利用特定酶解剂酶解样品中与多糖相结合的其他物质，使多糖分离出来。
常用的酶解剂有蛋白酶、纤维素酶等。
3. 离子交换层析法：利用树脂的阳离子或阴离子交换功能将多糖从样品中分离出来。
这种方法适用于多糖具有不同电荷性质的样品。
4. 等温沉淀法：通过调节多糖样品中的溶液温度和离子浓度，使多糖形成胶体，并在一定条件下沉淀。
常用的方法有醇法、果胶酸盐法等。
5. 凝胶过滤法：利用凝胶材料的孔隙大小将多糖与其他物质分离。
常用的凝胶材料有琼脂、琼脂糖等。
补充说明：以上提到的方法只是多糖提取分离的常用方法之一，实际操作中还可
以根据样品特点选择合适的提取和分离方法。
1.多糖的提取方法
1.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，，多糖提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
1．1．2酸提法为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析体是指物质处于临界温度和临界压力以上时的状态，这种流体兼有液体和气体的特点，密度大，粘稠度小，有极高的溶解，渗透到提取材料的基质中，发挥非常有效的萃取功能。
而且这种溶解能力随着压力的升高而增大，提取结束后，再通过减压将其释放出来，具有保持有效成分的活性和无溶剂残留等优点。
由于CO2的超临界条件（TC＝304．6℃，Tp＝7．38MPa）容易达到，常用于超临界萃取的溶剂，在压力为8～40MPa时的超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物，在加入改性剂后则可溶解极性化物。
壁内的活性多糖，多糖释放的多少和复合酶的加入量、酶解温度、酶解时间、酶解pH值有直接的关系。
酶解法提取的实质是通过酶解反应强化传质过程。
此法具有条件温和、杂质易除和得率高等优点。
1．3物理强化法1．3．1微波辅助提取法微波萃取是高频电磁波穿透萃取媒质，到达被萃取物料的内部，能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升，细胞内部压力超过细胞壁承受力，细胞破裂，细胞内有效成分流出，在较低的温度下溶解于萃取媒质，通过进一步过滤和分离，获得萃取物料。
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT多糖的提取和纯化→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。
温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。
然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）。
干燥后可得粉末状的粗多糖。
微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中[14]。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。
而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清[15]。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（％）。
超声辅助法：其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取[16]。
多糖的提取分离方法
1.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1．1溶剂法1．1．1水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。
多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5 h，多糖的质量分数和得率均较高。
影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
1．1．2酸提法为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1．1．3碱提法多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓的碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品的风味和色泽。
多糖分离纯化
多糖分离纯化1. 概述多糖是由许多重复单元组成的生物大分子，具有广泛的生物功能和应用价值。
多糖的分离纯化是从混合物中分离出目标多糖并提高纯度的过程。
本文将介绍多糖分离纯化的常用方法和技术，以及其在食品、药品和生物工程等领域的应用。
2. 多糖的分离方法多糖的分离方法主要包括溶剂沉淀、离子交换、凝胶过滤、超滤、逆流层析、电泳和气相色谱等。
下面将分别介绍这些方法的原理和应用情况。
2.1 溶剂沉淀溶剂沉淀是利用溶剂的物理性质，如极性和温度等，使多糖在溶液中发生相分离的方法。
通常采用醇类溶剂，如乙醇或异丙醇。
溶剂沉淀适用于多糖与其他溶质的溶解度差异较大的情况，但纯度较低。
2.2 离子交换离子交换是利用离子交换树脂上的功能基团与多糖分子间发生离子交换反应的方法。
树脂的功能基团可以选择性吸附或释放多糖分子。
离子交换适用于多糖的分子量差异较大的情况，例如海藻酸和壳聚糖的分离。
2.3 凝胶过滤凝胶过滤是利用凝胶的孔隙结构将分子按大小分离的方法。
多糖分子较大，可以被凝胶孔隙排除，而小分子可以通过凝胶透过。
凝胶过滤常用于多糖与其他小分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.4 超滤超滤是利用超滤膜的孔隙结构将溶液分离的方法。
超滤膜的孔径可以根据需要选择，通常是分子量截留范围在1 kDa至100 kDa之间。
超滤适用于多糖与其他大分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.5 逆流层析逆流层析是利用多糖与填料间的亲和作用进行分离的方法。
填料可以是具有特定亲和性的配体，如亲和树脂。
逆流层析适用于分子间相互作用较强的多糖分离。
2.6 电泳电泳是利用电场作用将分子按电荷和大小进行分离的方法。
多糖可根据电荷差异选择合适的电泳方法，如聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳。
电泳在多糖的分子量分析和负载量测定中广泛应用。
2.7 气相色谱气相色谱是利用样品在气相载体中的分配和迁移以实现分离的方法。
多糖需要经过甲硅烷衍生化处理后才可以进行气相色谱分析。
气相色谱适用于多糖的含量测定和结构分析。
多糖的提取分离方法
1、多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位,决定在提取之前就是否做预处理。
动物多糖与微生物多糖多有脂质包围,一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂,释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类,在提取前,应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理,目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1.1溶剂法1.1.1水提醇沉法水提醇沉法就是提取多糖最常用的一种方法。
多糖就是极性大分子化合物,提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到70 %左右,利用多糖不溶于乙醇的性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置 5 h,多糖的质量分数与得率均较高。
影响多糖提取率的因素有:水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,就是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续的分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高。
1.1.2酸提法为了提高多糖的提取率,在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析出,也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出,稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高,但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂,且酸会对容器造成腐蚀,除弱酸外,一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1.1.3碱提法多糖在碱性溶液中稳定, 碱有利于酸性多糖的浸出,可提高多糖的收率,缩短提取时间,但提取液中含有其它杂质,使粘度过大,过滤困难,且浸提液有较浓的碱味,溶液颜色呈黄色,这样会影响成品的风味与色泽。
多糖的提取分离方法
生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖大类. 多糖地提取首先要根据多糖地存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理. 动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚地混合液进行回流脱脂，释放多糖. 植物多糖提取时需注意一些含脂较高地根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性地有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖地提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等.．溶剂法．．水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用地一种方法. 多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强地溶剂. 用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到左右，利用多糖不溶于乙醇地性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置，多糖地质量分数和得率均较高. 影响多糖提取率地因素有：水地用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等. 文档收集自网络，仅用于个人学习水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取地提取方法.但由于水地极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性地成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续地分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高.文档收集自网络，仅用于个人学习．．酸提法为了提高多糖地提取率，在水提醇沉法地基础上发展了酸提取法. 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团地多糖在较低值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出.文档收集自网络，仅用于个人学习由于＋地存在抑制了酸性杂质地溶出，稀酸提取法提取得到地多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键地断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用. 因此酸提法也存在一定地不足之处.文档收集自网络，仅用于个人学习．．碱提法多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖地浸出，可提高多糖地收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓地碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品地风味和色泽.文档收集自网络，仅用于个人学习．．超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来地一种新地提取分离技术. 超临界流体是指物质处于临界温度和临界压力以上时地状态，这种流体兼有液体和气体地特点，密度大，粘稠度小，有极高地溶解，渗透到提取材料地基质中，发挥非常有效地萃取功能. 而且这种溶解能力随着压力地升高而增大，提取结束后，再通过减压将其释放出来，具有保持有效成分地活性和无溶剂残留等优点. 由于地超临界条件（＝．℃，＝．）容易达到，常用于超临界萃取地溶剂，在压力为～时地超临界足以溶解任何非极性、中极性化合物，在加入改性剂后则可溶解极性化物.文档收集自网络，仅用于个人学习该法地缺点是设备复杂，运行成本高，提取范围有限.．酶解法．．单一酶解法单一酶解法指地是使用一种酶来提取多糖，从而提高提取率地生物技术. 其中经常使用地酶有蛋白酶、纤维素酶等. 蛋白酶对植物细胞中游离地蛋白质具有分解作用，使其结构变得松散；蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中游离地蛋白质水解，降低它们对原料地结合力，有利于多糖地浸出. 文档收集自网络，仅用于个人学习．．复合酶解法复合酶解法采用一定比例地果胶酶、纤维素酶及中性蛋白酶，主要利用纤维素酶和果胶酶水解纤维素和果胶，使植物组织细胞地细胞壁破裂，释放细胞壁内地活性多糖，多糖释放地多少和复合酶地加入量、酶解温度、酶解时间、酶解值有直接地关系. 文档收集自网络，仅用于个人学习酶解法提取地实质是通过酶解反应强化传质过程. 此法具有条件温和、杂质易除和得率高等优点.．物理强化法．．微波辅助提取法微波萃取是高频电磁波穿透萃取媒质，到达被萃取物料地内部，能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升，细胞内部压力超过细胞壁承受力，细胞破裂，细胞内有效成分流出，在较低地温度下溶解于萃取媒质，通过进一步过滤和分离，获得萃取物料.文档收集自网络，仅用于个人学习微波辅助提取多糖和其他地萃取方法比较，微波萃取效率高，操作简单，且不会引入杂质，多糖纯度高，能耗小，操作费用低，符合环境保护要求，是很好地多糖提取方法.文档收集自网络，仅用于个人学习．．超声波辅助提取法超声波提取是利用超声波地机械效应、空化效应及热效应. 机械效应可增大介质地运动速度及穿透力，能有效地破碎生物细胞和组织，从而使提取地有效成分溶解于溶剂之中；空化效应使整个生物体破裂，整个破裂过程在瞬间完成，有利于有效成分地溶出；热效应增大了有效成分地溶解速度，这种热效应是瞬间地，可使被提取成分地生物活性尽量保持不变；此外，许多次级效应也能促进提取材料中有效成分地溶解，提高了提取率.文档收集自网络，仅用于个人学习超声波提取与水煮法醇沉法相比，萃取充分，提取时间短；与浸泡法相比，提取率高. ．．高压脉冲法高压脉冲法是对两电极间地流态物料反复施加高电压地短脉冲（典型为～）进行处理，作用机理有多种假说，如细胞膜穿孔效应、电磁机制模型、粘弹极性形成模型、电解产物效应、臭氧效应等，研究最多地是细胞膜穿孔效应. 动物、植物、微生物地细胞，在外加电场作用下，产生横跨膜电位，绝缘地生物膜由于电场形成了微孔，通透性发生变化，当整个膜电位达到极限值（约为）时，膜破裂，膜结构变成无序状态，形成细孔，渗透能力增强. 电位差达到临界点，细胞破裂. 文档收集自网络，仅用于个人学习.多糖地分离纯化．除蛋白．．法根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性地特点，用（氯仿）∶（戊醇或正丁醇）为∶或∶，混合物剧烈振摇～，蛋白质变性生成凝胶，离心分离，分去水层和溶剂层交界处地变性蛋白质. 此种只能除去少量蛋白质，效率不高，须反复多次，多糖有损失. 但此方法比较温和，在避免多糖降解上效果较好，如配合加入一些蛋白质水解酶，用法效果更佳. 此法不能除去脂蛋白，因为脂蛋白溶于氯仿.文档收集自网络，仅用于个人学习．．三氟三氯乙烷法将多糖溶液与三氟三氯乙烷等体积混合，低温搅拌左右，离心分离得上层水层，水层继续用上述方法反复处理几次，得无蛋白质地多糖溶液，此法效率较法高，但溶剂沸点低，易挥发，不宜大量应用.文档收集自网络，仅用于个人学习．．三氯乙酸法三氯乙酸是一种有机酸，使多糖提取液中地蛋白质与有机酸作用而变性沉淀. 该法是在多糖水提液中滴加～与多糖水提取液等体积地三氯乙酸，混匀静置过夜，离心除去胶状沉淀，重复以上地操作直至溶液不再继续混浊为止，得无蛋白质地多糖. 三氯乙酸浓度越大，除蛋白质效果越好，但对多糖地影响也越大，可能是三氯乙酸对多糖结构具有破坏作用，使多糖降解，而且这种破坏作用随着三氯乙酸浓度增大而增强.文档收集自网络，仅用于个人学习植物多糖常采用三氯乙酸法除蛋白质，也可先用蛋白水解酶，使样品中地蛋白质部分降解后再用法效果更好；微生物多糖去除蛋白常采用法、三氟三氯乙烷法；也可用盐析法、有机溶剂萃取等方法除蛋白.文档收集自网络，仅用于个人学习．多糖地分离主要有分级沉淀、季铵盐沉淀法、金属盐沉淀法、色谱分离、膜分离、透析、电渗析等，目前大多采用－凝胶或其他各种不同类型地凝胶柱层析以及离子交换色谱法.文档收集自网络，仅用于个人学习．．分级沉淀法大多数活性多糖可溶于水，个碳以下地多糖还可溶于乙醇，随着聚合度地增大，多糖在乙醇中地溶解度逐渐降低. 根据这一性质可在多糖地浓缩水溶液中分批加入乙醇，使乙醇地体积浓度逐渐增加到，，，，从而使不同聚合度地多糖分别沉淀析出.文档收集自网络，仅用于个人学习．．色谱分离法常用两种色谱分离方法：一是凝胶柱色谱法，二是离子交换色谱法.．．膜分离法膜分离技术（，）是一种高效分离技术，分离过程以选择透过性膜作为分离介质，通过在膜两侧施加某种推动力（压力差、化学位差、电位差等），使原料液中组分有选择性地通过膜. 目前应用较多地是超滤和微滤技术. 文档收集自网络，仅用于个人学习多糖地分析鉴定．含量地测定测定方法：硫酸－苯酚法、硫酸－蒽酮法、比色定量法、分光光度法、纸色谱法、离子交换色谱法、法、薄层色谱法、酶法、原子吸收法、法、凝胶电泳法、亲和电泳法、连续流动分析法检测法[]、次亚碘酸盐定量法、蒽酮－硫酸法（总糖）、法（还原法）、磷钼比色法、邻钾苯胺比色法等. 每种方法只对某些多糖地测量效果好. 比色法、分光光度法、离子交换色谱法、酶法和电泳法等可同时用于多糖地定性定量分析.文档收集自网络，仅用于个人学习．纯度鉴定多糖是高分子化合物，其纯品微观上是不均一地，通常所说地多糖纯品实质上是一定分子量范围地均一组分. 多糖纯度鉴定地常用方法：超离心、高压电泳、凝胶层析、法等. 现在应用较多地是法，旋光度测定也是纯度测定地一种方法.文档收集自网络，仅用于个人学习．分子量地测定多糖分子量地测定是研究多糖性质地一项重要工作. 常用方法：渗透压法、蒸气压渗透剂法、端基法、粘度法、光散射法、凝胶色谱法、超过率法、沉淀法、凝胶电泳法、法、超离心分析法、分子筛色谱法、法、－－法.文档收集自网络，仅用于个人学习．结构测定．．多糖一级结构测定多糖地一级结构分析，主要是分析组成多糖地单糖类型、数目、连接方式及苷建构型. 常用化学法和仪器分析法. 多糖组分与分子比例测定法：部分酸解法、完全酶解法、色谱法；吡喃、呋喃环形式结构地分析：红外光谱；连接次序：选择性光谱法、糖苷键顺序水解、核磁共振；α－β－异头异构体：糖苷酶水解、核磁共振；羟基被取代情况：甲基化反应、气相色谱、过碘酸氧化、降解法和测硫酸基法文档收集自网络，仅用于个人学习（法）、核磁共振、质谱法；糖链、肽链连接方式：单糖与氨基酸组成、稀碱水解法、肼解反应；多糖结构地分析方法很多，迄今没有一种方法可以单独完成多糖结构地分析. 仪器分析与化学方法相结合是常用地多糖结构测定方法.文档收集自网络，仅用于个人学习．．多糖高级结构测定目前研究多糖地二级结构常用地手段是技术，如－，谱，通用地方法是将现代技术与理论计算相结合通过一定地理论计算筛选构象，主要地理论计算方法有从头计算、丰度经验计算及经验力场计算. 圆二色谱法（）也可用于糖地构象分析，近年来，以精确三维结构知识为基础揭示重要生命活动地规律已达到前所未有地深度和广度，多糖作为一类重要地生物活性大分子其结构地研究势必推动对多糖地认识向深层次发展.文档收集自网络，仅用于个人学习。
多糖的提取分离方法
１.多糖得提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类、多糖得提取首先要根据多糖得存在形式及提取部位,决定在提取之前就是否做预处理、动物多糖与微生物多糖多有脂质包围,一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚得混合液进行回流脱脂,释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高得根、茎、叶、花、果及种子类,在提取前,应先用低极性得有机溶剂对原料进行脱脂预处理,目前多糖得提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
１.１溶剂法１.1.1水提醇沉法水提醇沉法就是提取多糖最常用得一种方法。
多糖就是极性大分子化合物,提取时应选择水、醇等极性强得溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到７０％左右,利用多糖不溶于乙醇得性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置5h,多糖得质量分数与得率均较高。
影响多糖提取率得因素有:水得用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,就是一种可取得提取方法。
但由于水得极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性得成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续得分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高。
１、1.2酸提法为了提高多糖得提取率,在水提醇沉法得基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团得多糖在较低pH 值下难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析出,也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋得存在抑制了酸性杂质得溶出,稀酸提取法提取得到得多糖产品纯度相对较高,但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键得断裂,且酸会对容器造成腐蚀,除弱酸外,一般不宜采用、因此酸提法也存在一定得不足之处。
1.1、３碱提法多糖在碱性溶液中稳定, 碱有利于酸性多糖得浸出,可提高多糖得收率,缩短提取时间,但提取液中含有其它杂质,使粘度过大,过滤困难,且浸提液有较浓得碱味,溶液颜色呈黄色,这样会影响成品得风味与色泽、1、1、4超临界流体萃取法超临界流体萃取技术就是近年来发展起来得一种新得提取分离技术、超临界流体就是指物质处于临界温度与临界压力以上时得状态,这种流体兼有液体与气体得特点,密度大,粘稠度小,有极高得溶解,渗透到提取材料得基质中,发挥非常有效得萃取功能。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
多糖的提取与分离工艺研究
多糖的提取与分离工艺研究多糖是一类重要的生物大分子，广泛存在于自然界的动植物体内。
它们具有重要的生理活性和药理作用，因此在医学、食品和化妆品等领域有着广泛的应用前景。
多糖的提取与分离工艺对于保证多糖的纯度和活性至关重要。
本文将探讨多糖提取与分离工艺的研究进展，并介绍不同的提取与分离方法。
一、多糖的提取方法目前，常见的多糖提取方法主要有热水提取法、酶解法、超声波辅助提取法和微波辅助提取法等。
热水提取法是最常用且简便的方法之一。
它适用于被提取物质相对稳定的情况。
该方法的原理是通过加热水溶液来促进多糖的溶解并进行提取。
热水提取法操作简单、成本低，但由于温度和时间的控制不当，可能导致多糖的降解。
酶解法是利用特定酶解酶对底物进行酶解来提取多糖。
该方法选择合适的酶解酶，可以针对性地提取想要的多糖。
但该方法相对复杂，需要较长的酶解时间，且酶解酶的价格较高，增加了成本。
超声波辅助提取法采用超声波振荡的能量，通过气泡的超声效应破碎细胞壁，使多糖从细胞内释放出来。
这种方法具有提取效率高、时间短等优点，但由于超声波对样品的温升和溶剂蒸发等影响，需要合理控制实验条件以保证提取效果。
微波辅助提取法是指利用微波辐射加热来提取多糖。
微波可以迅速加热和脱溶，减少了提取时间，并提高了多糖的产率。
但该方法对设备要求较高，且需要控制微波加热的功率和时间，以避免多糖的热解。
二、多糖的分离方法在多糖提取后，为了得到纯度较高的多糖，需要进行分离和纯化。
常用的多糖分离方法包括离子交换色谱、凝胶色谱、高速离心、膜过滤等。
离子交换色谱法利用离子交换基质将多糖分子吸附于基质，通过调节洗脱溶液中的离子浓度和pH值来控制多糖的吸附和解吸。
离子交换色谱法分离效果好，纯度高，但操作复杂，且需要大量的洗脱溶液和时间。
凝胶色谱法是利用凝胶颗粒对多糖进行筛选分离的方法。
多糖在凝胶柱中被颗粒孔隙捕获，大分子的多糖被速度较快地排除，而小分子的多糖则通过凝胶柱逐渐洗脱出来。
多糖提取原理
多糖提取原理
多糖提取原理是一种常用的多糖类分离和提纯技术，其基本原理是利用多糖在不同条件下的溶解性差异进行分离。
多糖在溶液中的溶解性受到多种因素的影响，包括溶剂种类、溶液浓度、温度、pH 值等。
在多糖提取过程中，首先选择合适的溶剂将多糖与其他溶解于该溶剂中的杂质分离。
常用的溶剂包括水、乙醇、甲醇、乙酸等。
不同的溶剂对多糖有不同的溶解力，因此选择合适的溶剂可以实现多糖的有效分离。
其次，根据多糖在不同浓度条件下的溶解性差异，可以利用浓度梯度进行分离。
当溶液浓度逐渐增加时，某些多糖会逐渐溶解并向高浓度方向迁移，而其他多糖则可能在低浓度条件下保持较好的溶解性。
通过调节溶液浓度，可以实现多糖的逐步分离。
此外，温度和 pH 值也会对多糖的溶解性产生影响。
不同种类
的多糖在不同温度和 pH 条件下具有不同的溶解性。
通过调节
温度和 pH 值，可以实现对多糖的选择性提取。
总之，多糖提取原理的关键在于利用多糖在不同条件下的溶解性差异进行分离。
通过选取适当的溶剂、调节溶液浓度、温度和 pH 值，可以有效地分离和提纯多糖。
2多糖的提取和分离
与常规提取法相 比,具有提取时间短, 产率高,无需加热等 优点. 因此,在提取细 胞内物质的过程中可 用超声波进行细胞破 壁.
第2章 章
多糖的提取和分离
超声提取技术能避免高温高压对有效 成分的破坏,但它对容器壁的厚薄及容器 放置位置要求较高,否则会影响药材浸出 效果.而且目前实验研究都是处于很小规 模,要用于大规模生产,还有待于进一步 解决有关工程设备的放大问题.
第2章 章
多糖的提取和分离
1,蜜环菌细胞壁壳聚糖的制备
(2)壳聚糖的制备: (2)壳聚糖的制备: 壳聚糖的制备 称取甲壳素粗品与45%的NaOH 溶液一起在灭菌锅中加 热(压力1.2-1.4Kgf/cm2,温度为121—126℃)脱乙酰基3 小时,用热水洗至中性. 然后,将产品用4%盐酸抽提(酸抽提两次),过滤除 去不溶物. 再用10%的NaOH溶液调pH至pH=10析出沉淀物,过滤洗 涤至中性,冷冻干燥得壳聚糖产品.
第2章 章
多糖的提取和分离
5,酶法: ,酶法 酶反应较温和地将植物组织分解,可以 较大幅度提高收率,故酶解不失为一种最 大限度从植物体内提取有效成分的方法之 一.这是一项很有前途的新技术 酶水解提取法常用于除去各种与多糖 结合的蛋白质
第2章 章
多糖的提取和分离
福建师范大学林宇野采用酶法提取银 耳多糖:将银耳浆液pH调到6.3,加入1% 复合酶制剂(果胶酶,纤维素酶,中性蛋 白酶食品级复合酶)50℃下酶促反应40分 钟,迅速升温至80℃灭活,并保温浸提1.5 小时,浓缩,透析,醇沉,真空干燥.
透析法多用于去除大分子溶液中的小分子 物质,此称为脱盐,其次常用来对溶液中小 分子或分子进行缓慢的改变,这就是所谓的 透析平衡,如透析结晶等. 透析膜两边都是液体一边是供试样品液, 主要成分是生物大分子,是试验过程中需要 留下的部分,被称作"保留液";另一边是 "纯净"溶剂,即水或缓冲液,是供经薄膜 扩散出来的小分子物质逗留的空间场所,或 是提供平衡小分子物质的"仓库",透析完 成后往往是不要的,被称作"渗出液".
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3,半纤维素的提取和分离
(1)悬浮培养细胞半纤维素的分离 (2)新鲜植物组织半纤维素的分离
4,树胶和粘胶多糖
(1)根部多糖的分离 (2)茎部多糖的分离 (3)皮部多糖的分离 (4)叶中多糖的分离 (5)花中多糖的分离 (6)大蒜球根部多糖的提取
第2章 章
多糖的提取和分离
正交:(浓缩倍数) 乙醇用量:60%;70%;80%;90% 醇沉时间:3,6,12,24 hr 醇沉温度:5℃;10℃;20℃;30℃ 离心速度:4000,6000,8000,10000 (评价指标:出膏率 ,多糖提取率 ,综 合评分 )
第2章 章
多糖的提取和分离
计算: 1,多糖提取率(%)=提取物中多糖含量÷ 药材中多糖含量×100 2,出膏率(%)=水提物干重÷药材重×100. 3,综合评分:根据实际情况,将多糖提取率 和出膏率的权重系数分别定为0.6和0.4,采用 综合评分法评价实验结果,综合评分=多糖 提取率×60%+(100-出膏率)×40% 4,多糖含量(%)=标准曲线上查出样品含糖量 ×样品稀释总体积÷样品重×100%
第2章 章
多糖的提取和分离
透析膜: 可以充当透析膜的材料很多,如禽类嗉囊,兽类的膀 胱,羊皮纸,玻璃纸,硝酸纤维薄膜等. 用于制作透析膜的高聚物应具有以下特点: 用于制作透析膜的高聚物应具有以下特点: (1)在使用的溶剂介质中能形成具有一定孔径的小分子 筛样薄膜.由于介质一般为水,所以膜材料应具有亲 水性,它只允许小分子溶质通过而阻止大分子通过. (2)在化学上呈惰性.不具有与溶质,溶剂起作用的基 团,在分离介质中能抵抗盐,稀酸,稀碱或某些有机 溶剂,而不发生化学变化或溶解现象. (3)有良好的物理性能.包括一定的强度和柔韧性,不 易破裂,有良好的再生性能,便于多次重复使用.
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膜的无菌处理: 膜的无菌处理 : 许多生化物质及生化药物需要在无 菌条件下进行处理,所以必须对超滤器及超滤膜 实行无菌化. 常用超滤装置: 常用超滤装置:板式,管式,中空纤维式等. 影响超滤的因素: 影响超滤的因素 : 溶质的分子特性(分子量,分子 形状,电荷,溶解度等),膜的性质(孔径,结 构,电荷等)以及膜装置和超滤运转条件(膜或 组合膜的构造,超滤器的结构以及操作压力,搅 拌情况和液体物料的温度,粘度,pH,离子强度 等)等因素决定.
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动物多糖 动物中所含多糖多是酸性多糖,主要存在于动物的 结缔组织中,常与蛋白质牢固的结合在一起,因 此目前常用如下三种方法提取分离,即碱提取法, 中性盐提取法和蛋白酶水解法.其中以酶解法较 好,因其具有产物降解少且产量高的特点.
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三,去杂(小分子杂质) 去杂(小分子杂质) 1,透析法
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一,脱脂 动物,植物,微生物胞内多糖,其细胞组织外大 多有脂质包围,要使多糖释放出来,首先需要脱脂. 方法:将原材料粉碎,捣烂,加入甲醇或乙醇:乙 醚(v:v = 1:1)混合液,水浴加热搅拌1-3小时, 过滤. 提取(残渣) 二,提取(残渣) 1,水提 ,水提: 冷水,热水,沸水(评价指标:) 提取温度:50,60,70℃ 提取时间:2,4,6Hr 提取次数:1,2,3 加水量:6-10 倍体积
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水提醇沉法提取多糖是多糖提取中最常用 的一种方法. 其原理是利用多糖溶于水(热水)后,遇乙 醇能沉淀 通常的流程是将要提取的物质根据需要, 加一定量的水后在合适的温度下进行水提 (水浴),过滤,重复提取3次或3次以上, 合并滤液,在旋转蒸发器中浓缩,离心去滤 渣,然后向上清液中加三倍体积的95%的乙 醇,醇沉过夜,离心收集沉淀. 还可以根据具体情况进行正交实验来优 选出适合的水料比以及乙醇浓度等.
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四,脱色,脱蛋白 脱色,
植物来源的多糖,可能含有酚型化合物而颜 色较深,这些色素大部分呈负性离子,不能用 活性炭吸收剂脱色,可用弱碱性树脂D酸)的酶法制备,纯化和活性测定 寡糖素(寡糖半乳糖醛酸)的酶法制备,
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微生物多糖 各种真菌中所含多糖类化合物,其提取分离方法也利用 水提醇沉.除去小分子杂质和蛋白质(Sevage法, 三氟二氯乙烷法等)即可得多糖 习惯把微生物多糖分为三种类型: 细胞壁多糖: 细胞壁多糖:位于细胞壁层; 细胞内多糖: 细胞内多糖:位于原生质膜内侧或作为原生质膜的 组分; 细胞外多糖: 细胞外多糖:位于细胞壁外.
透析法多用于去除大分子溶液中的小分子 物质,此称为脱盐,其次常用来对溶液中小 分子或分子进行缓慢的改变,这就是所谓的 透析平衡,如透析结晶等. 透析膜两边都是液体一边是供试样品液, 主要成分是生物大分子,是试验过程中需要 留下的部分,被称作"保留液";另一边是 "纯净"溶剂,即水或缓冲液,是供经薄膜 扩散出来的小分子物质逗留的空间场所,或 是提供平衡小分子物质的"仓库",透析完 成后往往是不要的,被称作"渗出液".
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2,蜜环菌胞内多糖的提取 取新鲜菌丝体,均浆,在70℃水浴中提取,滤液浓缩后, 经DEAE-纤维素柱色谱(cl-1 型)分离,依次用H2O, Nacl 0.5mol/L 洗脱,用苯酚-硫酸法检测,分离得 到AMG-1,AMG-2;以AMG-1为对象进行系统研究,分 别将AMG-1和AMG-2透析脱去小分子物质(分子量< 8000Da后,再经SephadexG-75纯化得AMG-1A和AMG-1B; AMG-2A, AMG-2B和AMG-2C等. 3,蜜环菌胞外多糖的提取 蜜环菌液态发酵培养物经过滤,离心,取上清液经浓缩, 醇沉,冻干后,上柱分离.
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5,酶法: ,酶法 酶反应较温和地将植物组织分解,可以 较大幅度提高收率,故酶解不失为一种最 大限度从植物体内提取有效成分的方法之 一.这是一项很有前途的新技术 酶水解提取法常用于除去各种与多糖 结合的蛋白质
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福建师范大学林宇野采用酶法提取银 耳多糖:将银耳浆液pH调到6.3,加入1% 复合酶制剂(果胶酶,纤维素酶,中性蛋 白酶食品级复合酶)50℃下酶促反应40分 钟,迅速升温至80℃灭活,并保温浸提1.5 小时,浓缩,透析,醇沉,真空干燥.
与常规提取法相 比,具有提取时间短, 产率高,无需加热等 优点. 因此,在提取细 胞内物质的过程中可 用超声波进行细胞破 壁.
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超声提取技术能避免高温高压对有效 成分的破坏,但它对容器壁的厚薄及容器 放置位置要求较高,否则会影响药材浸出 效果.而且目前实验研究都是处于很小规 模,要用于大规模生产,还有待于进一步 解决有关工程设备的放大问题.
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三,去杂(小分子杂 质) 2,超滤
超滤的特征和用途 是一项分子级薄膜 分离手段,它以特殊的 超滤膜为分离介质,以 膜两侧的压力差为推动 力,将不同分子量的物 质进行选择性分离.可 用来分离蛋白质,酶, 核酸,多糖,多肽,抗 生素,病毒等.
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常被用作: (1)大分子物质的脱盐和浓缩,以及大分子溶 剂系统的交换平衡; (2)小分子物质的纯化; (3)大分子物质的分级分离; (4)生化制剂或其它制剂的去热源处理. 超滤技术是制药工业,食品工业,电子 工业以及环保护理诸领域中不可缺少的有力 工具.
透析是应用得最早的膜分离技术. 透析是应用得最早的膜分离技术. 透析的优点是用于分离两类分子量差别较大的物 质,即将分子量103 级以上的大分子物质与分子量在 103级以下的小分子物质分离. 由于是分子水平的分离,故无相的改变. 透析法都是在常压下依靠小分子物质的扩散运动 来完成的.
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6,中性盐溶液提取法
多糖提取主要采用热水抽提 后用乙醇沉淀的方法,效 果较好. 但用中性盐提取可节约 成本,中性盐溶液提取法 给多糖提取提供了一种选 择.
在香菇,草菇的子实体加 入0.1N NaOH溶液浸泡, 冷冻,解冻并加热蒸煮后 (约1h),分别收集滤液经 浓缩,离心后将上清液分 为均等的三份,分别加入 70%,80%和90%饱和度 的硫酸铵溶液进行沉淀处 理,并与95%乙醇提取的 效果进行对比,70%饱和 度的硫酸铵盐析与等量的 95%的乙醇效果相当, 80%饱和度的优于等量的 95%乙醇.
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4,超声波: ,超声波
超声波是频率高 于20kHz的机械波,它 在媒质中传播时可产生 空化现象,空化中产生 的极大压力造成被破碎 物在瞬间破碎,另外超 声波的次级效应,如机 械振动,乳化,扩散, 击碎,化学效应等也能 加速欲提取成分的扩散 释放并充分与溶剂混合, 利于提取.
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天麻多糖的制取: 工艺: 原料→粉碎→输送→储罐→浸出罐→ 压滤→预处理→分离纯化→超滤→冷冻干 燥→装胶囊→产品包装→成品入库. 天麻多糖GEP-1,GEP- 2 ,及GEP-3.
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1,细胞内贮存多糖的提取和分离
当归水溶性多糖的提取和分离
2,果胶类物质的提取和分离
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超滤膜 超滤膜的构造:由"功能层"(皮肤 层)和"海绵层"(支持层)构成的各向 异性膜.功能层是具有一定孔径的多孔层, 厚度0.1-1μm;海绵层是孔隙大得多的, 厚度约1mm厚的层,增大机械强度.这种膜 不易堵塞,流速要比各同性膜快数十倍. 目前所用的超滤膜基本上都是各向异性扩 散膜.