姜黄素激活nrf2抗氧化系统缓解百草枯诱导的胰岛素抵抗
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nomenexluna(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(55∶43.5∶1∶0.5)为流动相,检测波长为279nm,柱温30℃,理论板数按主成分色谱峰计算不低于3000,主成分色谱峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
精密量取本品1mL,置于100mL容量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,取稀释液10μL注入液相色谱仪,记录色谱图,另精密称取达克
罗宁标准品适量,用流动相溶解并稀释成约50μg・mL-1
,同
法测定。
按外标法以峰面积计算,即得〔2〕。
3 临床应用
3.1 病例选择 取本院2014年1月至8月门诊确诊病例1512例,其中男703例,女809例,平均年龄43.6岁。
3.2 治疗方法外用,涂擦患处,1日3次。
用前摇匀,1周为1个疗程。
3.3 治疗效果 复方氧化锌洗剂对于亚急性湿疹、急性皮炎(糜烂渗出期)、激光术后、皮肤黏膜细菌感染、单纯疱疹及瘙痒症的效果均明显,总有效率达到95.63%。
未见明显不良反应,有较高临床应用价值(见表1)。
表1
亚急性湿疹急性皮炎(糜烂渗出期)
激光
术后皮肤黏膜
细菌感染单纯
疱疹瘙痒
症总例数18614775811921785治愈及好转17312375611621563无效132423222总有效率/%
93.01
83.67
99.74
97.48
99.08
74.12
4 讨论
氧化锌具有较弱的杀菌、收敛、保护皮肤作用,其作用机
理主要是通过毛囊吸收到细胞核内,被细胞所摄取的锌能促进核酸和蛋白质的合成,参与细胞的能量代谢,起到促进组织修复的作用,氧化锌于空气中能缓缓吸收二氧化碳生成碱式碳酸盐而变质,刺激性增加。
制备前宜在160℃干燥1h后使用。
滑石粉主要成分为硅酸镁,化学性质不活波,用于局部有吸附、润滑、保护作用,可减少上述碱式碳酸盐对皮肤的刺激
性。
甘油为增稠剂,起助悬作用,又有润肤作用〔3〕。
盐酸达克罗宁有表面麻醉作用,外用穿透力强,作用迅速,止痛、止痒效果明显,并有杀菌作用。
依沙吖啶为抗菌药,能抑制革兰氏阳性球菌与某些革兰氏阴性菌,其原理是其阳离子部分与细菌蛋白质或酶系统的羟基结合,干扰细菌代谢而杀菌,对表皮深部感染有显著消毒作用,在蛋白质及血清存在下亦不减轻效力,并且对组织几乎没有刺激性;用于继发感染的皮炎、湿疹及痱子等,对小脓疱、脓性丘疹、脓痂疹等皮肤病疗效好〔4〕
,其溶液不稳定,易避光密闭保存。
本文结果显示该工艺制备简单,上述诸药联合应用,杀菌、收敛、止痛止痒功效确切,应用范围广泛,临床疗效明显。
参考文献
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.北京:中国医药科技出版社,2010,附录18.
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术出版社,1999,72-73.
〔4〕刘丽娟,魏爱英.实用医院外用制剂手册〔M〕.济南:山东科学技
术出版社,1999,84.
作者简介:杨含艳,女(1988.11-)。
硕士研究生。
研究方向:中药药理学。
联系电话159****1462,E-mail:1799825770@qq.com通讯作者:于志文,男(1961.09-)。
教授,硕士生导师。
E-mail:yuzhiwen@yahoo.com基金项目:国家自然科学基金(No81270886)
・药理・
姜黄素激活Nrf2抗氧化系统缓解百草枯诱导的胰岛素抵抗
杨含艳,展 平,任丽伟,于志文(福建中医药大学药学院福建福州350122)
摘要:目的 观察姜黄素是否具有改善百草枯(paraquat,PQ)所致氧化应激诱导的胰岛素抵抗作用并探讨其改善胰岛素抵抗的效应机理。
方法 将实验小鼠随机分成对照组(Control组),百草枯组(PQ组)以及PQ加姜黄素组(Cur组)。
PQ和Cur组连续腹腔注射百草枯7天造模成
功后。
Cur组继续Cur灌胃干预。
7天后,取胰岛素敏感组织肌肉,用蛋白免疫印迹方法(Westernblot,WB)检测蛋白水平和磷酸化变化,并检测脂质过氧化指标MDA。
结果 在PQ诱导的小鼠胰岛素抵抗模型中,姜黄素可改善小鼠葡萄糖耐量并对抗PQ所致的胰岛素信号蛋白PKB-
Ser473磷酸化损害;姜黄素还可明显降低肌肉MDA水平,激活小鼠Nrf2系统,促进Nrf2核转位和NQO-1的表达,同时能增强IкBα的水平,缓解
氧化应激及炎症反应。
结论 姜黄素通过增强内源性Nrf2系统功能和胰岛素信号水平,对抗PQ诱导的氧化应激,是其缓解胰岛素抵抗的重要
机理。
关键词:姜黄素;PQ;Nrf2;抗氧化作用;胰岛素抵抗
中图分类号:R969.4 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2015)-03--0024-04
・
42・
Curcumin-induced Activation of the Nrf2Antioxidant System Attenuates Paraquat-induced InsuIin Resistance
YANG Han-yan,ZHAN Ping,REN Li-wei,YU Zhi-Wen(CoIIege of Pharmacy,Fujian University of Tradi-tionaI Chinese Medicine,Fuzhou,350122,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE Toexaminetheeffectofcurcuminontheparaquat-mediatedoxidativestressandinsu-linresistance,andtofurtherexploretheworkingmechanismunderlyingitseffect.METHODS Thirtymicewererandomlydividedinto3groups:controlgroup,paraquatgroupandcurcumininterventiongroup.Paraquatgroupandcurcumininterventiongroupwerecontinuouslyintraperitonealinjectionofparaquatfor7daystoinducethemodelsofinsulinresistance.Thecurcumininterventiongroupwascontinuouslygavagedwithcurcuminforanother7days.Then,allmicewereeuthanizedformusclecollection.TheproteinandphosphorylationlevelsinmuscletissuewereexamedbyWesternblotandthecontentofmalonaldchyde(MDA)indicatedforlipidperoxidationwasdeter-mined.ResultsCurcuminimprovedtheglucosetoleranceinparaquat-inducedinsulinresistanceinmicetogetherwithattenuationofPQ-causedimpairmentinPKBSer473phosphorylation.CurcuminalsosignificantlyreducedmuscularMDAlevel,promotingtheNrf2translocationintonucleus,alongwiththeenhancedexpressionofquinineoxi-doreductase1(NQO-1).CurcuminalsoincreasedIкBαcontent.ConclusionCurcuminenhancesthefunctionofendog-enousNrf2systemandinsulinsignalingtoagainstPQ-inducedoxidativestressandinflammationwhichmaybethemechanismsofcurcumintoattenuateinsulinresistance.
KEY WORDS:Curcumin;PQ;Nrf2;Anti-oxidativefunction;Insulinresistance
现代社会糖尿病发病与高热量摄入及体力活动减少导致能量过剩性肥胖有关,但农药使用所致环境污染与糖尿病患病的关系及有效防治药物方面的研究较少。
百草枯(pa-
raquat,PQ)又称对草快、克芜踪,是目前世界范围广泛使用的有机杂环类接触性脱叶剂及除草剂〔1〕。
百草枯可造成线粒体过氧化物(ROS)大量产生并诱导胰岛素抵抗及血糖代谢紊乱〔2,3〕。
姜黄素是中医姜黄中存在的一种多酚类化合物,具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等药理作用〔4,5〕。
近年发现,它还具有缓解胰岛素抵抗及糖脂代谢紊乱的作用〔4〕。
本次研究通过百草枯诱导胰岛素抵抗模型,观察小鼠肌肉组织和线粒体丙二醛(MDA)含量的变化以及肌肉组织核因子E2相关因子2转录因子(Nrf2)的表达及下游调控蛋白醌氧化还原酶-1(NQO-1)水平、炎症信号IкBα及胰岛素信号系统(PKBSer473及其调控蛋白PTEN水平),探讨姜黄素对百草枯氧化应激诱导小鼠胰岛素抵抗的作用和药理作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂 葡萄糖、姜黄素、百草枯(paraquat,PQ)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)购自美国Sigma公司;生理盐水购自福州海王福药制药有限公司;胰岛素(insulin,IN)购自诺和诺德公司;血糖测定仪购自上海鱼跃医疗设备有限公司;BCA蛋白浓度测定盒、细胞裂解液购自上海碧云天生物技术有限公司;脂质过氧化丙二醛试剂购自南京建成公司;IкBα、NQO-1抗体购自美国ProteinTech公司;PKBSer473、PKB、PTEN、Histone3及β-actin抗体均购自美国CellSignaling公司;Nrf2抗体、鼠抗兔IgG二抗抗体购自美国SantaCruz公司。
1.2 胰岛素抵抗模型的诱导及姜黄素干预 6周龄SPF级雄性C57BL/6J体重15-18克小鼠,(广东省医学实验动物中心,生产许可证号:SCXK(粤)2013-0002),实验时动物随机分为对照组(Control组),百草枯组(PQ组)和PQ加姜黄素干预组(Curcumin,Cur组),每组10只。
PQ组、Cur组采用5mg/kg剂量连续7天腹腔注射造模,诱导小鼠胰岛素抵抗。
对照组腹腔注射等量生理盐水。
葡萄糖耐量实验证实小鼠胰岛素抵抗模型成功后,给予姜黄素组〔50mg/(kg?d)〕Cur(1%CMC-Na配制)灌胃治疗,而PQ组和对照组给予等量
CMC-Na灌胃。
姜黄素治疗干预7天后,再次进行葡萄糖耐量测定。
实验方法和组织取材同前报告〔6〕。
1.3 细胞核和线粒体的提取 取小鼠肌肉组织70mg,参照本课题组原有实验方法进行提取〔6〕。
1.4 脂质过氧化(丙二醛,MDA)测定 肌肉组织及线粒体MDA检测采用试剂盒进行,操作步骤按说明书进行。
1.5 蛋白提取及免疫印迹检测 取肌肉组织,加入冰上预冷的细胞裂解液匀浆,然后4℃,12000r・min-1离心5min。
取上清液,按Bradford法测定蛋白浓度。
取30μg样本进行电泳,电泳结束后湿转移法将蛋白转移到NC膜上,8%脱脂奶粉封闭,分别加入相应的一抗,4℃过夜。
TBST洗膜后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗(1∶2000)室温反应2h。
TBST洗涤,ECL化学发光试剂显影。
1.6 统计学分析 所有数据采用SPSS18.0统计软件分析,计量资料以均数±标准差(x±s),采用方差分析检验组间差异,以P≤0.05为差异有统计学意义。
・52
・
2 结果2.1 Cur干预缓解胰岛素抵抗作用 小鼠PQ注射7天后,糖耐量明显损害(见图1);而Cur干预治疗7d后,小鼠血糖水平显著降低(P <0.05,图2)此外,对胰岛素信号蛋白PKB-Ser473的检测结果表明,PQ明显损害PKB磷酸化,而Cur则具有增强磷酸化的作用(图3);相应地,PQ组胰岛素信号抑制蛋白PTEN水平明显增高,
而姜黄素则抑制之一变化。
图1 PQ腹腔注射造模7
天糖耐量实验
图2 Cur干预7
天糖耐量实验
图3 小鼠肌肉胰岛素信号变化
2.2 Cur对抗PQ所致小鼠肌肉组织及其线粒体MDA水平升高作用(见图4) 如图4所示,PQ组小鼠肌肉组织及线粒体MDA水平均明显增高,而Cur干预组MDA水平基本恢复
到对照组水平(*
P <0.
05)。
图4 小鼠肌肉组织及其线粒体MDA水平
2.3 Cur激活肌肉Nrf2系统和抑制炎症信号作用。
见图5。
PQ组小鼠肌肉代表Nrf2活化的指标,即Nrf2细胞核转位及其特异性调控的NQO-1蛋白含量明显降低,而Cur则可翻转这一损害。
另外,炎性信号抑制性蛋白IкBα在PQ组明显降低,而Cur
干预组则有一定程度升高。
图5 小鼠肌肉Nrf2系统变化
3 讨论
本工作证实PQ作为典型的农药和环境污染物可以诱导氧化应激和胰岛素抵抗。
这一结果提示环境污染有可能是现代工业化社会糖尿病高发病的另一促进因素。
本研究发现肌肉作为胰岛素最重要的调控组织,其信号传导损害是PQ造成糖耐量损害的重要机理。
氧化应激作为胰岛素抵抗的重要
发病因素已有文献报告支持〔7-9〕
,但具体作用机理并不十分明确。
由于PTEN对于氧化状态敏感,氧化应激的激活作用
可以促进PTEN对胰岛素信号蛋白PI3激酶的抑制作用〔10〕。
在本研究中我们发现,PQ造成肌肉组织PTEN含量升高,而Cur抑制这一作用。
这些发现为PQ导致PKB信号传导损害和姜黄素的改善作用提供了可能的分子作用机制的阐释。
我们先前的研究发现,内源性抗氧化系统的抗氧化功能在胰岛素抵抗发病中有着重要作用。
在高脂肪饲喂的小鼠胰岛素抵抗模型Nrf2功能受到抑制,而用药物激活其功能可以
明显缓解胰岛素抵抗〔6,11〕。
Nrf2系统作为体内最重要的氧化应激保护机制,在正常生理情况下受氧化应激环境刺激可
以从细胞浆转位入核,启动一系列抗氧化酶的表达调控〔12〕。
本工作发现长期病理性的氧化应激反而损害Nrf2抗氧化功能。
炎症信号激活不仅与胰岛素抵抗密切相关,也受到氧化
还原状态的调控〔12〕。
我们未发表的资料显示,炎症刺激可以损害HepG2培养肝细胞的Nrf2系统。
因此,不排除PQ诱导炎性激活导致Nrf2功能抑制。
我们以往的研究还观察到姜黄素作为天然的Nrf2化学激动剂可以改善高脂肪摄入造成
的Nrf2系统功能抑制〔6,11〕
,但对于其它胰岛素抵抗模型的作用并无研究报告。
本工作进一步发现姜黄素对PQ诱导的氧化应激和Nrf2系统仍然具有明确改善作用,因此扩展了姜黄素作为激活Nrf2和防治胰岛素抵抗及其糖尿病药物的适用性,为其未来的临床转化和应用提供进一步的实验支持。
・
62・
综合上述研究结果提示,Cur可以对抗PQ环境污染物造成的糖代谢紊乱,其缓解小鼠胰岛素抵抗的效应与增强肌肉胰岛素信号及激活Nrf2抗氧化系统作用有关。
参考文献
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.TrendsBiochemSci,2014,39(4):199-218.
养血注射液血液流变学试验
侯 超(河南郑州市中医院制剂室郑州450000)
摘要:目的 观察养血注射液降低血液粘度的效果。
方法 选择老、中、幼年3组大鼠,每组又分为空白组和高、中、低剂量给药组,尾静脉注射高、中、低剂量养血注射液后(3天给药一次,共给药5次),观察血液低、中、高切全血粘度、血浆粘度、RBC、HGB等指标的变化。
结果 不同年龄组给药后各指标变化具有显著性差异。
结论 养血注射液对降低中、老年大鼠血液粘度效果较好,且量效关系明显。
关键词:养血注射液;血液流变学;血液粘度
中图分类号:R969 文献标识码:B 文章编号:1006-3765(2015)-03-044-0027-03
作者简介:侯 超(1986-),男,主要从事中药制剂与质量控制的研究。
E-mail:188****5935@163.com
ExperimentaI on HemorheoIogy of the Yangxue Injection
HOU Chao (Preparation Room ,Zhengzhou City HospitoI of TraditionaI Chinese Medicine ,Zhengzhou 450000,China )
ABSTRACT :OBJECTIVE ToinvestigatetheeffectsofYangxueInjectiontoreducebloodviscosity.METHODS Threegroupsofratsweredeterminedasold,middleandyounggroups,andeachagegroupswasdividedintohigh,middleandlowdosegroups(Atotalof5times,onesevery3days),thenthevarietyofindexesasbloodviscosityathigh-middle-lowshearrate,plasmaviscosity,RBCandHGBwereobserved.RESULTS Alltheindexsbetweenev-eryagegroupsweresignificantdifference.CONCLUSION YoungxueInjectioncanreducethebloodviscosityofoldandmiddleratswithobviousdose-effectrelationship.KEY WORDS :YangxueInjection;hemorheology;bloodviscosity
研究表明,随着年龄的增长,人体血液逐渐变得粘稠,到
中老年阶段尤为粘稠〔1-2〕。
在此背景下,福建中医药大学药剂
实验室开发出了养血注射液,其是由化学结构明确且来源于
中药材中的有效成分制得的组分中药制剂,具有养血、活血、调血的功效,通过降低血液粘度、改善血液状况,防治心脑血管疾病的发生。
为了验证其功效,本试验开展了血液流变学试验,由不同年龄段的大鼠模拟不同年龄阶段的人群,给予养
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72・。