小麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳操作程序

数取小麦种子，用钳子逐粒夹碎（夹种子时垫上小片清洁的纸，以便于清理钳头和防止样品之间的污染），放入离心管中，加入蛋白
一、样品醇溶蛋白提取 质提取液200μl，充分摇动混合，在室温下提取24h，然后在18000×g条件下离心15min，取其上清液用于电泳。
不同小麦品种由于遗传基础不同，种子内所含的蛋白质种类也有差异，这种差异可利用电泳图谱加以鉴别，从而对品种真实性和纯度 进行鉴定。 1、将胶板小心地取下，在染色液中染色1~2d。 1、在前后槽注入电极缓冲液（前槽浸没样品槽，后槽超过铂丝）。 小心抽出样品梳，用滤纸或注射器吸去样品槽里中多余的水，然后用微量进样器吸取10~20μl样品加入样品槽中（每加一次，用去离子 水冲洗进样器两次）。 1、将胶板小心地取下，在染色液中染色1~2d。 1、在前后槽注入电极缓冲液（前槽浸没样品槽，后槽超过铂丝）。 吸取45ml凝胶溶液，加入3滴0. 数取小麦种子，用钳子逐粒夹碎（夹种子时垫上小片清洁的纸，以便于清理钳头和防止样品之间的污染），放入离心管中，加入蛋白
谱带类型。
液用于电泳。 不同品种的电泳图谱可按其数目、宽窄、颜色、深浅、相对迁移率等进行鉴别。
不同品种的电泳图谱可按其数目、宽窄、颜色、深浅、相对迁移率等进行鉴别。 小麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳操作程序 不同品种的电泳图谱可按其数目、宽窄、颜色、深浅、相对迁移率等进行鉴别。 1、在前后槽注入电极缓冲液（前槽浸没样品槽，后槽超过铂丝）。 2、一般情况下不需要脱色，但为使谱带清晰，可用清水冲洗。 从小麦种子中提取的醇溶蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应和电泳系统的电荷效应作用下得到良好的分离，通过显色显示蛋白质 谱带类型。 1、将胶板小心地取下，在染色液中染色1~2d。 2、打开电泳仪电源，将电压调到500v。 6%过氧化氢，快速摇匀后迅速倒入封口处，稍加晃动，使整条缝口充满胶液，让其在5~10min内聚合封好。 3、电泳时，要求在15~20℃温度下进行。 1、将胶板小心地取下，在染色液中染色1~2d。 不同小麦品种由于遗传基础不同，种子内所含的蛋白质种类也有差异，这种差异可利用电泳图谱加以鉴别，从而对品种真实性和纯度 进行鉴定。
一、样品醇溶蛋白提取
二、凝胶制备
1、组装电泳槽（前槽接正极，后槽接负极）。 2、封底缝 从冰箱中取出凝胶溶液和过氧化氢溶液，吸取10ml凝胶溶液，加 入1滴0.6%过氧化氢，快速摇匀后迅速倒入封口处，稍加晃动，使整 条缝口充满胶液，让其在5~10min内聚合封好。 3、灌分离胶 吸取45ml凝胶溶液，加入3滴0.6%过氧化氢，迅速摇匀，倒入凝 胶板之间，马上插好样品梳，让其在5~10min聚合。
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3、灌分离胶
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小麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳操作程序
从小麦种子中提取的醇溶蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶的分子筛 效应和电泳系统的电荷效应作用下得到良好的分离，通过显色 显示蛋白质谱带类型。
不同小麦品种由于遗传基础不同，种子内所含的蛋白质种 类也有差异，这种差异可利用电泳图谱加以鉴别，从而对品种 真实性和纯度进行鉴定。
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四、电泳
五、染色
1、将胶板小心地取下，在染色液中染色1~2d。 2、一般情况下不需要脱色，但为使谱带清晰，可用清水冲洗。
六、鉴定
不同品种的电泳图谱可按其数目、宽窄、颜色、深浅、 相对迁移率等进行鉴别。
根据醇溶蛋白谱带的组成和带型的一致性，并与标准样 品电泳图谱相比较，鉴定种子真实性以及测定品种纯度。
二、凝胶制备
三、进样
小心抽出样品梳，用滤纸或注射器吸去样品槽里中多余的水，然后 用微量进样器吸取10~20μl样品加入样品槽中（每加一次，用去离子 水冲洗进样器两次）。
四、电泳
1、在前后槽注入电极缓冲液（前槽浸没样品槽，后槽超过 铂丝）。
2、打开电泳仪电源，将电压调到500v。 3、电泳时，要求在15~20℃温度下进行。 4、电泳时间一般为60~80min，具体时间可按甲基绿（电 泳的前沿指示剂）迁移时间来推算，电泳时间为甲基绿移至前沿 所需时间的倍。