DIC-CK工作规范

DC-CIK自体免疫细胞治疗流程
1、主管医师与患者谈话，患者同意接受该治疗后，签署知情同意书。

2、必须完善检查项目：血常规、各种肝炎病毒标记物、肝肾功能、抗HIV、梅毒抗体、肝脏B超或CT。

3、主管医师填写DC-CIK自体免疫细胞治疗申请单送细胞免疫实验室。

4、实验室收到申请后，书面通知患者本人采血时间与采血量。

5、患者采集前一天晚上勿进食荤腥油腻，饮食以清淡素食为主，勿劳累、饮酒。

采血前一天、当天早餐可正常饮食。

6、采集细胞，培养12到16 天行DC-CIK 静脉输注。

7、输注前1-2天，实验室通知科室或者患者本人，提醒做好回输前准备工作。

8、回输细胞的运输条件：温度在4-37℃常温条件下，1小时内可不用特殊处理。

若时间超过1小时或者37℃，应冷藏运输；若温度≤4℃时，需要保温运输。

运输过程中应尽量避免剧烈震荡。

9、经静脉回输细胞使用输血器（9号针头），事先输注50ml生理盐水引导，可是当使用抗过敏药物。

输注过程中注意速度，总量大约200ml，一般40-60滴/分，大约耗时60分钟。

回输液出现絮状现象属于正常，原则上隔天回输一次，共计4次为一疗程。

一般可进行1-2疗程，间隔1-2个月。

比较严重的患者，或治疗后化验指标下降不明显，可适当延长到3-4个疗程。

10、回输过程中注意观察，出现过敏及时处理。

回输完成后，继续观察患者6小时左右，并注意生命征的变化和其他各方面的反应，作好记录。

大约15%患者出现发热反应，绝大多数为轻-中度发热，多2-6小时恢复正常。

少数体温超过38.5℃，可给予药物或物理降温，禁用皮质激素类药物。

如有胸闷、气喘、血压改变，可立即予皮质激素、抗过敏药物。

如有皮疹、瘙痒等，可予抗过敏药物治疗至皮疹消失。

DC-CIK 细胞培养方案
1.将采集的外周血收集到2 支离心管中，2000r/min 离心5min，弃上清，将沉淀细胞混合，到加生理盐水至25mL，使沉淀细胞充分悬浮。

另取 1 支离心管，加入淋巴细胞分离液20mL，用滴管将血细胞悬液缓慢转移至淋巴细胞分离液的表面，使二者之间形成清晰的界面。

2. 2000r/min 离心20min 后，从管底到液面分为 4 层，依次为红细胞和粒细胞层、淋巴细胞分离液层、外周血单个核细胞层（PBMC 层）、血浆层。

用吸管将PBMC 层吸出，转移至另一支离心管中。

3.加生理盐水至40mL，1500r/min 离心5min，结束后弃上清，将沉淀细胞悬浮，加入生理盐水至40mL，充分混匀后，1500r/min 离心5min。

如此共离心洗涤 3 次。

4.最后一次离心结束后，弃上清，将沉淀细胞均分为 3 份，分别转移到 3 个培养瓶中，各加入40mL 的AIM-V 培养液培养，分别记为A1、A2、A3。

5. 2h 后取出培养的细胞，分别将A1、A2 和A3 中悬浮的淋巴细胞转移至另3 个培养瓶中，分别记为B1、B2、B3。

3 个 B 瓶中加入IFN-γ，第二天加入IC 因子（含有IL-2 和抗CD3 单抗），诱导培养CIK；3 个含有贴壁细胞的 A 瓶中各加入40mL 的AIM-V 培养液和H1、Hb 因子，诱导培养DC。

6.DC 培养过程中，如有发黄，则换液，补加H1 和Hb 因子。

7.CIK 培养过程中，如发现培养液发黄，则换液，换液后补加IL-2。

如发现有细胞团块结为不良絮状，则用离心管收集后静置沉降5min 左右，待絮状物沉淀后，小心将上清细胞悬液倒回培养瓶中。

8.DC 于第7 天加入肿瘤抗原和TNF，第8 天铲下收集后与相应的CIK 混合共培养。

DC 瓶弃去。

如果总的细胞量过于庞大，也可将DC 和CIK 混合后均分到 A 和 B 瓶中。

9.共培养的DC-CIK 于第10 天做微生物检测，第13、14、15 天连续3 次回输。

1500r/min，5min 离心洗涤 3 次，将25 毫升白蛋白加入250ml 盐水中，终浓度1%，加入细胞沉淀，配成细胞悬液后静脉回输。