HPLC流动相使用注意事项总结

HPLC流动相使用注意事项总结
流动相相当于液相的血液，在使用过程中会有各种需要注意的事项。

其中有些“坑”千万要注意。

01、加入有机溶剂之后测量移动相酸碱度
如果你用有机添加剂测量pH值，得到的pH值会与添加有机溶剂之前的值不同。

然而，最重要的一点是要保持一致。

如果你总是在加入有机溶剂之后测量pH值，那么务必保证在使用的方法中陈述你的步骤，这样的话其他人就会按照统一方式进行。

这种方式并不保证百分百准确，但是至少可以保持方法的前后统一。

这也许会比得到精准的pH值更加重要。

02、没有使用缓冲液
缓冲剂的作用就是用来控制PH值并阻止其发生变化。

很多其他方法会改变流动相的PH值，会引起停留时间、峰形以及峰值响应的漂移。

甲酸、TFA等不是缓冲剂
03、没有在正常酸碱度范围内使用缓冲液
每个缓冲盐有2个pH单位范围宽度，在这个范围内可以提供稳定性最佳的pH值。

窗口之外的缓冲盐不具备有效的抗pH值变化能力。

要么在正确的范围内使用缓冲剂，要么选择一种缓冲剂可以涵盖你所需要的pH 值。

04、向有机溶液中加缓冲液
将缓冲溶液与有机相混合，会极有可能引起缓冲液沉淀。

在很多情况下，即使沉淀现象已经发生了，但仍很难被发现。

记住，一定要将有机溶液加入到水相当中，这可以很好的降低缓冲液沉淀的几率。

05、从0%用泵混合浓度梯度
现在使用的泵可以有效的混合流动相并实现在线脱气，但并不是使用你的方法的任何人都会配有高质量的泵。

将A和B混合到一个单独的溶液中，在100%线上运行。

比如说通过用50ml水混合制备有机950ml起始混合物。

这样做的好处就是可以减少HPLC之间的可变性，减少系统中产生气泡和沉淀的可能。