版微生物限度检查法与应用指导原则总体介绍

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• (5)检查方法及结果判断:按培养基种类用相应的 试验菌采用平皿浇注法与对应的对照培养基比较, 菌落数相比大于70%,且菌落形态大小应与对照培 养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合 规定。—说明:微生物限度检查法应用指导原则 1.ppt
增、修订内容(4)-细菌、霉菌
及酵母菌计数
• 2、计数方法的验证中增加“常见干扰物的中和剂或灭活方
1、表面活性剂、中和剂或灭活剂,应证明对微生物的生长
和存活无影响
无毒性
2、控制菌培养温度:
35 ~ 37℃
30 ~最小包装单位报告
• 指导原则对总则部分的说明:微生物限度 检查法应用指导原则1.ppt
增、修订内容(2)-检验量
• 1、要求检查沙门菌的供试品:其检验量 应增加20g或20ml(其中10g或10ml用于 阳性对照试验)。
的试验菌(见表2)于被检培养基中,在相应控 制菌检查规定的培养温度及最长时间下培养, 试验菌应不得生长。
增、修订内容(6)-控制菌检查
• 1、增加“控制菌检查用培养基的适用性检查”
• (7)固体培养基指示能力检查: 取试验菌各0.1ml(含菌数不大于100cfu)(见表2)
分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上,在相应 控制菌检查规定的培养温度及时间下培养。被检培养 基中试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应 情况等应与对照培养基一致。
镁或钙离子 对氨基苯甲酸(PABA) ß-内酰胺酶
增、修订内容(4)-细菌、霉菌
及酵母菌计数
• 3、增加了“没有办法消除供试品中的抑菌作用 的情况及相关 规定”
若没有适宜的方法消除供试品中的抑菌作用,那么验证试验中 微生物回收的失败可看成是因供试品的抗菌活性引起的,同时 表明该供试品不能被试验菌污染。然而,供试品也可能仅对试 验用菌株具有抑制作用,而对其他菌株没有抑制作用。因此, 根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则,在不影 响检验结果判断的前提下,应采用能使微生物生长的更高稀释 级的供试液进行方法验证试验。若验证试验符合要求,应以该 稀释级供试液作为最低稀释级的供试液进行供试品检验。
0.1ml(含菌数50~100cfu)分别涂布于被检培 养基和对照培养基平板上,在相应控制菌检查 规定的培养温度及最短培养时间下培养。被检 培养基与对照培养基生长的菌落大小、颜色、 形态特征应一致。
增、修订内容(6)-控制菌检查
• 1、增加“控制菌检查用培养基的适用性检查” • (6)培养基抑制能力检查:接种不少于100cfu
• (1)培养基种类:成品培养基、由脱水培养基 或按培养基处方配制的培养基均应检查;
• (2)检查项目:培养基的促生长、指示和抑制 特性能力;(表2中p110)
• (3)菌种:CMCC(B )44 102、26 003、50 094、10 104、64 941、 CMCC(F) 98 001
增、修订内容(6)-控制菌检查
• 增加:以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值 报告1g、1mL或10cm2供试品中所含的菌数。 如各稀释级的平板均无菌落生长,或仅最低 稀释级的平板有菌落生长,但平均菌落数小于 1时,以<1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。
• 删除:比值计算等计数详细规定
增、修订内容(5)-供试品检查
• 5、增加了有关滤膜直径的规定: 采用薄膜过滤法,滤膜孔径应不大于0.45μm, 直径约一般为50mm,若采用其它直径的滤膜, 冲洗量应进行相应的调整。
的说明 (3)方法选择的原则及离心沉淀法的说
明 (4)对照培养基概念、用途及分发
(5)对“无法消除抑菌作用”情况的说明 (6)控制菌检查确证方法的选择原则 (7)微生物限度标准如何制定和执行? (8)化学药制剂微生物限度检查如何执行? (9)如何确定一个药品的微生物检测项目? (10)制定药品的微生物限度标准的依据。
2010年版《中国药典》微 生物
限度检查法及应用指导原 则介绍
2010.5
内容提要
• 1、起草的指导思想 • 2、增、修订内容主要内容 • 3、药品微生物检测工作展望
起草的指导思想
• 微生物限度检查法: 1、基本维持2005年版检查法的体系(检查
项目、检查方法、培养基、试验菌、结果 判断等)。 2、完善检查法、 增加试验的可操作性、 使 方法更具科学性,保证检验、结果的准确 性。 3、增、修订内容: 尊重科学,以试验为基础。
起草的指导思想
• 微生物限度检查法应用指导原则 : 为更好应用微生物限度检查法(附录 ⅩⅢC),特制定本指导原则。 对标准和方法中的特定内容及标准的应 用做进一步的说明。
微生物限度检查法应用指导原则
主要说明的内容有(P219) (1)微生物限度检查法适用范围的说明 (2)关于表面活性剂、灭活剂及中和剂
1、亚碲酸盐培养基
2、卵黄氯化钠琼脂培养基或甘 露醇氯化钠琼脂培养基 1、梭菌增菌培养基 2、哥伦比亚琼脂培养基
1、促生长能力 2、 抑制能力 3、促生长能力 4、 抑制能力 5、促生长+指示能力
1、促生长能力 2、 抑制能力 3、促生长+指示能力 4、 抑制能力
1、促生长能力 1、促生长能力
白色念珠菌
• 1、增加“控制菌检查用培养基的适用性检查” • (4)液体培养基促生长能力检查:分别接种不
大于100cfu 的试验菌(见表2)于被检培养基和 对照培养基中,在相应控制菌检查规定的培养 温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管 比较,被检培养基管试验菌应生长良好。
增、修订内容(6)-控制菌检查
• 1、增加“控制菌检查用培养基的适用性检查” • (5)固体培养基促生长能力检查:取试验菌各
• 6、增加了薄膜过滤法每张滤膜冲洗量的规定: 每张滤膜每次冲洗量不超过100ml,总冲洗量 不得超过1000ml,以避免膜上微生物受损伤。 7、强调水溶性供试液冲洗时应先润湿滤膜,油 类供试品滤膜滤器应充分干燥,滤膜的滤材应 保证微生物的充分截留。
增、修订内容(6)-控制菌检查
• 1、增加“控制菌检查用培养基的适用性检查”
法”
干扰物
可选用的中和剂或灭活方法
戊二醛
亚硫酸氢钠
酚类、乙醇、吸附物
稀释剂
醛类
稀释剂、甘氨酸、硫代硫酸盐
季铵类化合物(QACs)、对羟基苯甲酸酯 卵磷脂、聚山梨醇酯
汞类制剂
亚硫酸氢纳、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐
双胍类化合物
卵磷脂
碘酒、洗必泰类
聚山梨醇酯
卤化物
硫代硫酸盐
乙二胺四乙酸(EDTA) 磺胺类 ß-内酰胺类抗生素
药品微生物实验室规范
• 指导原则(P219) • 用于指导微生物检验实验室的质量控制 • 1、人员的要求 • 2、培养基的制备及贮存 • 3、菌种的制备存放管理 • 4、实验室的布局和运行 • 5、实验室设备 • 6、文件及实验记录 • 7、结果的判断
增、修订内容(1)-总则
• 检查法中总则部分(p107二部):
• 2、删除“采用平皿法进行菌数测定时,应取 适宜的连续2 ~ 3个稀释级的供试液”
• 3、菌落培养和计数时间: 细菌:由48小时 3天, 霉菌、酵母菌:由72小时 5天, 延长培养时间:由5 ~ 7天 7天
强调:逐日观察计数,蔓延成片不易计数
增、修订内容(5)-供试品检查
• 4、平皿法菌数报告规则: 细菌、酵母菌:由30 ~ 300之间 平均菌落 小于300cfu,报告两位有效数字 霉菌:由30 ~ 100之间 小于100cfu
1、白色念珠菌 2、白色念珠菌 3、白色念珠菌 4、大肠埃希菌 5、白色念珠菌
溴化十六烷基三甲铵琼脂促生长能力 、 甘露醇盐琼脂促生长能力+指示能力试
验结果:
哥伦比亚琼脂培养基促生长能力 试验结果(生孢梭菌 )
增、修订内容(6)-控制菌检查
• 2、删除“控制菌验证时的阴性菌对照组”
• 3、控制菌判断:由“应进行分离、纯化、染色
化钠溶液 含0.05%(v/v)聚山梨酯 80的0.9%无菌氯化钠溶液洗脱孢子
增、修订内容(4)-细菌、霉菌 及酵母菌计数
• (4)菌液使用时间:
• 菌悬液制备后室温放置应在2小时内使用,
• 若保存在2 ~ 8℃的菌悬液可以在24小时内使用。
• 黑曲霉也可制成稳定的孢子悬液保存在2 ~ 8℃,在 验证过的贮存期内替代对应量的新鲜孢子悬液使用;
增、修订内容(4)-细菌、霉菌 及酵母菌计数
• 1、增加“计数培养基的适用性检查”
• (1)培养基种类:成品培养基、由脱水培养 基或按培养基处方配制的培养基均应检查;
• (2)菌种:同2005年版计数方法的验证用菌 种(5种5代),明确了干燥菌种为0代。
• (3)菌液制备:黑曲霉稀释液由0.9%无菌氯
1、促生长能力 2、促生长能力 3、抑制能力 4、促生长+指示能力
5、促生长+指示能力 6、指示能力
1、乙型副伤寒沙门菌 2、乙型副伤寒沙门菌 3、金葡菌 4、乙型副伤寒沙门菌
5、乙型副伤寒沙门菌 6、乙型副伤寒沙门菌
控制菌检查 培养基
特性
铜绿假单胞 菌
金葡菌
梭菌
1、胆盐乳糖培养基
2、溴化十六烷基三甲胺琼脂培 养基 3、绿脓菌素测定用培养基
表2(P110二部)
控制菌检查 培养基
大肠埃希菌 1、胆盐乳糖培养基
2、4-甲基伞形酮葡萄甘酸培养基 3、曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂培养基
特性
1、促生长能力 2、 抑制能力 3、促生长+指示能力
4、促生长+指示能力
实验菌株
1、大肠埃希菌 2、金葡菌 3、大肠埃希菌
4、大肠埃希菌
大肠菌群
1、乳糖胆盐发酵培养基
1、沙氏葡萄糖液体培养基 2、沙氏葡萄糖琼脂培养基 3、念珠菌显色培养基
4、1%聚三梨酯80-玉米琼脂培 养基
1、促生长能力 2、促生长+指示能力 3、促生长+指示能力 4、抑制能力 5、促生长+指示能力
实验菌株
1、铜绿假单胞菌 2、金葡菌 3、铜绿假单胞菌 4、大肠埃希菌 5、铜绿假单胞菌
1、金葡菌 2、大肠埃希菌 3、金葡菌 4、大肠埃希菌 1、生孢梭菌 2、生孢梭菌
述,但实际检验中不能仅限于此。
增、修订内容(3)-供试液制备
• 1、供试品检查时表面活性剂应证明对微生 物生长和存活无毒性,也就是说试验所使 用的任何有可能影响微生物活性的添加试 剂均需要验证,即使是药典允许使用的试 剂也应对使用量进行验证(含碘类样品使 用硫代硫酸钠中和的量)
• 2、供试品溶液的制备需加热时,可采用经 过验证的方法,但加热应均匀,温度不应 超过45℃
增、修订内容(3)-供试液制备
• 检查法中供试液制备: 1、离心沉淀法
500转/分钟离心3分钟,取全部上清混合。 用于细菌检查。主要去除大颗粒沉淀物。 • 指导原则对供试液制备等方法的说明:微生物限度
检查法应用指导原则1.ppt
增、修订内容(3)-贴剂供试液制 备P108
• 1、去掉保护层 • 2、用无菌的多孔材料覆盖粘贴面 • 3、置含有表面活性剂的稀释剂中 • 4、震荡至少30分钟 • 5、也可采用其他适宜的方法 • 对2005版难以检查的贴剂进行了详细的描
2、乳糖发酵培养基 3、曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂培养基
1、促生长能力 2、 抑制能力 3、促生长+指示能力 4、促生长+指示能力
1、大肠埃希菌 2、金葡菌 3、大肠埃希菌 4、大肠埃希菌
沙门菌
1、营养肉汤培养基 2、四硫磺酸钠亮绿培养基
3、胆盐硫乳琼脂培养基或沙门、志贺菌 属琼脂培养基 4、曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂培养基 5、三糖铁琼脂培养基
增、修订内容(6)-控制菌检查
• 1、增加“控制菌检查用培养基的适用性检查” • (8)液体培养基指示能力检查:
分别接种不大于100cfu 的试验菌(见表2)于 被检培养基和对照培养基中,在相应控制菌检 查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与 对照培养基管比较,被检培养基管试验菌生长 情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。
计数方法验证时,若采用上述计数方法总存在一株或多株试验菌 的回收率达不到要求,那么选择回收情况最接近要求的方法和 试验条件进行供试品的检测。—说明:微生物限度检查法应用 指导原则1.ppt
增、修订内容(5)-供试品检查
• 1、将“取按验证的方法制备的均匀供试液” “按计数方法的验证试验确认的程序进行供试 液制备”
镜检和适宜的生化试验”
“应进行分离、
纯化、染色镜检和适宜的鉴定试验”
• 4、大肠菌群检查用培养基:由胆盐乳糖发酵培
养基
乳糖胆盐发酵培养基(培养基的成
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