乳与乳制品微生物检验鲜乳中抗生素残留检测

乳与乳制品微生物检验鲜乳中抗生素残留检测
YLNB 3.5
方法一：
1. 引用依据：GB/T4789.27-2003
2. 范围
本方法适用于能杀灭嗜热乳酸链球菌的各种常用抗生素的检验
3. 仪器及器材
2.1 冰箱：4℃～-20℃；
2.2 恒温培养箱：36±1℃；
2.3 恒温水浴锅：36±1℃、79±1℃；
2.4 天平；
2.5 灭菌吸管：1ml、10 ml；
2.6 灭菌试管：16mm×160mm；
2.7 100 ℃温度计；
2.8 蜡笔；
2.9 灭菌广口瓶或三角烧瓶：容量为500ml；
2.10 灭菌玻璃珠：直径约5mm；
2.11 酒精灯；
2.12 试管架；
2.13 灭菌刀、剪子、灭菌镊子等。

4. 菌种、培养基和试剂
3.1 菌种：嗜热乳酸链球菌。

3.2 脱脂乳：经113℃灭菌20min 。

3.3 4％2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC ）水溶液：称取1gTTC ，溶于5ml 灭菌蒸馏水中，装褐色瓶内于7℃冰箱保存，临用时用灭菌蒸馏水稀释至五倍。

如遇溶液变为玉色或淡褐色，则不能再使用。

5. 检验程序
鲜乳中抗生素残留检验程序见下图。

报告
不显色
加TTC 指示剂，36±1℃水浴30min
红色
抗生素阴性
检样
80℃，加热5min
加菌液，36±1℃水浴2h
冷却37℃以下
报告
不显色者 抗生素阳性
显色者 抗生素阴
36±1℃水浴30min
6. 方法
6.1 菌液制备：将菌液移种脱脂乳，经36±1℃培养15h后，以灭菌脱脂乳1：1稀释待用。

6.2 取检样9ml于试管内，80℃水浴加热5min冷却37℃以下，加菌液1ml，36±1℃水浴培养2h，加TTC 0.3ml, 36±1℃水浴培养30min,观察如为阳性，再于水浴中培养30min 作第二次观察，每份检样作两份，另外再作阴性和阳性对照各一份，阳性对照管用无抗生素的乳8ml加抗生素及菌液和
TTC。

阴性对照管用无抗生素乳9ml加菌液和TTC。

7. 判断方法：准确培养30min观察结果，如为阳性，再继续培养30min作第二次观察。

观察时要迅速，避免光照过久发生干扰。

乳中有抗生素存在，则检样中虽加菌液培养物，但因细菌的繁殖受到抑制，因此指示剂TTC不还原，不显色。

与此相反，如果没用抗生素存在，则加入菌液即行增殖，TTC 被还原而显红色，也就是说检样呈乳的原色为阳性，呈红色为阴性。

具体内容见表1和表2。

表1 显色状态判断标准
显色状态判断
未显色者
微红色者桃红色－红色阳性可疑阴性
表2检测各种抗生素的灵敏度
抗生素名称最低捡出量
青霉素链霉素庆大霉素卡那霉素0.004单位0.5单位0.4单位5单位
方法二：抗生素检测试剂盒
具体操作请参照试剂盒说明书。