橙皮素胶束溶液的制备及透明质酸对其稳定性和经皮渗透作用的影响

橙皮素胶束溶液的制备及透明质酸对其稳定性和经皮渗透作用
的影响
张晓宇;侯彩平;赵丽萍;谢茵;刘丽清;何亚丽;田青平
【摘要】制备橙皮素胶束溶液，并以Zeta电位和经皮渗透速率为指标，考察透明质酸对胶束溶液稳定性和经皮渗透活性的影响。

结果表明，透明质酸可显著提高橙皮素胶束溶液的稳定性和经皮渗透活性，当其质量分数为0．5％时，胶束溶液透明稳定、无不良气味，室温下pH平均值为5．4±0．1，Zeta电位平均值为-32．62 mV，橙皮素经豚鼠皮肤的稳态渗透速率常数J s 达7．4758μg／
（cm2·h），为对照组的1．5倍。

橙皮素胶束溶液耐寒和耐热实验均表现出良好的稳定性。

%Pseudo solution of hesperetin micelle was prepared,and influence of hyaluronic acid on its stability and percutaneous osmosis activity was investigated using Zeta potential and percutaneous osmosis rate as the respective indices. Experimental results showed that hyaluronic acid can significantly enhance the stability and percutaneous osmosis activity of hesperetin micelle pseudo solution. When the mass fraction of hyaluronic acid achieves 0. 5%,the micelle pseudo solution becomes transparent,stable and without unpleasant odor. Under room temperature condition,its average pH value is 5. 4 ± 0. 1 and average Zeta potential is - 32. 62 mV. The steady osmosis rate constant Js of hesperetin through cavy skin a chieves 7. 475 8 μg /(cm2 ·h),which is 1. 5 multiples as compared with that of the control group. The micelle pseudo solution shows good stability in cold resistance test and heat resistance test.
【期刊名称】《日用化学工业》
【年(卷),期】2016(000)002
【总页数】5页(P92-96)
【关键词】护肤化妆品添加剂;橙皮素;胶束;透明质酸;稳定性;经皮渗透活性
【作者】张晓宇;侯彩平;赵丽萍;谢茵;刘丽清;何亚丽;田青平
【作者单位】山西医科大学药学院，山西太原030001;山西医科大学药学院，山
西太原030001;太原市第二人民医院药剂科，山西太原030001;山西医科大学药
学院，山西太原030001;太原市第二人民医院药剂科，山西太原030001;太原市
第二人民医院药剂科，山西太原030001;山西医科大学药学院，山西太原030001【正文语种】中文
橙皮素是一种天然黄酮类化合物，存在于芸香科植物枸橘的果实中，来源丰富，成本低廉，具有抗炎[1-3]、抗氧化[4，5]、减少黑色素沉着[6，7]等功效，被冠以“迄今为止最有效的植物美白成分之一”。

橙皮素难溶于水，在水中溶解度仅为273 mg/L，因此在上市产品中常将其加入以油脂类物质为基质的护肤品如乳、霜、精华素中，但其不易被皮肤吸收，常会以颗粒状的形式在皮肤表面析出。

水性介质有助于难溶性药物的经皮吸收，为此本文采用胶束增溶技术将橙皮素制备成以水为介质的溶液，以期更好地发挥橙皮素的美白、抗炎功效。

笔者拟在橙皮素胶束溶液制备过程中加入透明质酸(HA)，通过Zeta电位测定和离体经皮渗透实验考察HA对所制备的橙皮素胶束溶液的稳定作用和促渗效果。

1.1 主要仪器与试剂
FA1104N型分析天平，上海民桥精密仪器厂；恒温磁力搅拌器，上海闵行红浦仪
器厂；KQ-100型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；马尔文激光散射粒径测试仪，马尔文仪器有限公司；RYJ-6A型药物透皮扩散试验仪，上海黄海药检仪器有限公司；Agilent1200型高效液相色谱仪，美国Agilent公司。

橙皮素、橙皮素标准品，阿拉丁化学试剂公司；透明质酸，格雷西亚化学技术有限公司；聚氧乙烯氢化蓖麻油RH40，北京风礼精求商贸有限责任公司；无水乙醇，分析纯，天津市北辰方正试剂厂；甘油，分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司；甲醇，色谱纯，山东禹王实业有限公司。

40只健康豚鼠，雄性，体重300～350 g，山西
医科大学动物中心，批号140906。

1.2 橙皮素胶束溶液的制备
以乙醇为助溶剂，聚氧乙烯氢化蓖麻油RH40为表面活性剂，甘油为保湿剂，HA 为稳定剂和保湿剂制备橙皮素胶束溶液。

按表1称量各原料，并按下述步骤进行
制备：先将橙皮素加入乙醇中，超声使之溶解后加入表面活性剂RH40，混合均匀后得醇相；将甘油溶入纯净水中，得水相；将醇相和水相混合，在70 ℃下恒温搅拌20 min后冷却至室温，然后加入一定量的质量分数为2%的HA储备液，搅拌15 min，用纯净水补足余量即得橙皮素胶束溶液。

1.3 橙皮素胶束溶液理化性质的测试
1.3.1 外观性状
用目测法观察所制橙皮素胶束溶液的透明度，若澄清透明则表示胶束的增溶效果好，制剂稳定。

1.3.2 Zeta电位和粒径
按照1.2制备100 g橙皮素胶束溶液，在制备过程中分别加入5，10，15，20和25 g质量分数为2%的HA储备液，得编号分别为1，2，3，4和5的橙皮素胶束溶液样品，样品中HA的质量分数分别为0.1%，0.2%，0.3%，0.4%和0.5%。

以不加HA的溶液为对照品(编号为0)。

采用马尔文激光粒度仪在待测温度为25 ℃，
测试角度为90°的条件下，测量橙皮素胶束的平均粒径(d)及Zeta电位，从而考察HA的质量分数对橙皮素胶束溶液稳定性的影响。

粒径越小、Zeta电位绝对值越大，表明制剂越稳定。

1.3.3 室温稳定性和耐寒、耐热性
按最终配方制备9批橙皮素胶束溶液，每批分为3份，装于西林瓶中，密封。

1，2和3批于室温下放置30 d；4，5和6批置于4 ℃冰箱中30 d，到期取出；7，8和9批置于40 ℃恒温箱中10 d，到期取出。

考察其外观、气味、pH、平均粒径、Zeta电位及橙皮素含量，求出每批相关数据平均值，用以说明其室温稳定性及耐寒、耐热性。

1.4 橙皮素胶束溶液经皮渗透活性的测定
1.4.1 鼠皮的制备
将豚鼠脱颈椎处死，迅速将其腹部毛剃净，剥离腹部皮肤并除去皮下脂肪和血管，用蒸馏水反复冲洗至净，再用生理盐水冲洗数遍，置于-20 ℃冰箱中冷藏备用。

1.4.2 标准曲线的绘制
参照文献[9，10]中的HPLC法，结合橙皮素的理化性质，通过实验筛选出橙皮素检测的色谱条件：色谱柱为Kromasil 100A C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为V(甲醇)∶V(水)=55∶45的混合溶液；流速1.0 mL/min；检测波长288 nm；柱温25 ℃；进样量20 μL。

用甲醇配制0.1 g/L的橙皮素标准品储备液，精密量取0.5，2.5，5，10，20，30和40 mL储备液，分别置于50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到橙皮素质量浓度分别为1，5，10，20，40，60和80 mg/L的供试液。

分别吸取20 μL进样分析，以橙皮素质量浓度(ρ)为横坐标、峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，用最小二乘法进行回归运算，得线性方程为A=59.052ρ+7.861 2，
R2=0.999 8 。

橙皮素质量浓度在1～80 mg/L 范围内线性关系良好，且辅料、接
收液及鼠皮对HPLC法测定橙皮素含量无干扰。

1.4.3 Franz扩散池透皮吸收实验
将制备好的鼠皮固定在扩散池的供给室和接受室之间，角质层面向供给室。

在接受室内加入6 mL接收液(V(乙醇)∶V(生理盐水)=2∶8)，在供给室内分别加入2 mL 1.3.2中制备的HA质量分数分别为0，0.1%，0.2%，0.3%，0.4%和0.5%的橙皮素胶束溶液，以保鲜膜封住上口，于(37±1) ℃下开启磁力搅拌，转速为300 r/min。

当样品渗透1，2，4，6，8，10，12和24 h时，分别吸取接受室内的溶液1 mL置于具塞离心管中，每次取样的同时向接受池中补充等量的接收液并排除池中的气泡。

取出的接收液经0.45 μm微孔滤膜过滤，按照之前确定的HPLC条件测量橙皮素的峰面积，进而由标准曲线求出其中橙皮素的质量浓度，根据式(1)计算出累积渗透量Q。

式中Q为累积渗透量(μg/cm2)，S为透皮扩散面积(扩散池r=0.9 cm，S=2.543 4 cm2)，V1为Franz扩散池接收液体积(V1=6 mL)，ρn为第n次取样点的质量浓度(mg/L)，ρi为第i次取样点的质量浓度(mg/L)，V2为取样体积(mL)。

以Q对取样时间t做线性回归，所得直线的斜率即为稳态渗透速率常数Js
(μg/(cm2·h))。

ER为增渗倍数，用式(2)来计算，其中J0(μg/(cm2·h))为未添加HA的橙皮素胶束溶液的稳态渗透速率常数。

ER=Js/J0
1.5 统计学方法
应用SPSS13.0软件对透皮数据的稳态渗透速率常数进行方差分析。

2.1 橙皮素胶束溶液的制备工艺
若将甘油直接溶入醇相，不能制得稳定透明的溶液。

因此，按照配方比例，将溶解了橙皮素和表面活性剂的醇相加入到溶解了甘油的水相当中，搅拌混匀制备橙皮素胶束溶液。

升高温度有利于减小RH40中聚氧乙烯基的水化程度，使胶束聚集数增多，增溶程度明显增加。

实验结果表明，醇相和水相混合后，在70 ℃下搅拌可提高橙皮素胶束溶液的稳定性。

胶束为热力学不稳定体系，冷却静置后会出现混浊，加入足量的大分子化合物后可在胶粒的表面形成一层亲水性的保护膜从而提高其稳定性。

HA是高端化妆品中常常加入的一种大分子化合物，多个HA的一端可吸附在同一个溶胶粒子的表面，或环绕在粒子的周围，形成水化外壳，从而起到保护溶胶的作用。

HA结构中含有大量的羟基和羧基，可以吸收比自身重500～1 000倍的水分，因而被用作化妆品中的保湿剂[8]。

此外，HA可以在皮肤表面形成可使角质层水合软化的水化膜，使角质层的水合结构发生改变，影响药物的经皮吸收。

加入HA可极大提高胶束的稳定性，但加热和超声会导致HA的降解，因此选择在冷却后的胶束溶液中加入HA的方法制备稳定透明的橙皮素胶束溶液。

2.2 HA的质量分数对橙皮素胶束溶液稳定性的影响
表面活性剂与水界面形成的双电层结构是维持胶束稳定的重要因素，因此以Zeta 电位为评价指标考查HA质量分数对橙皮素胶束溶液稳定性的影响。

Zeta电位绝对值越大，表明其稳定性越好。

另一方面，对于非均相体系，粒径越小，其布朗运动抵抗重力沉降表现出的动力学稳定性越好，为此粒径也是评价胶束溶液稳定性的一个指标。

HA的质量分数对橙皮素胶束溶液稳定性的影响结果见表2。

由表2可知，对照组样品在比较短的时间内便出现混浊，3～7 d内会出现白色沉淀，表明有橙皮素析出，且粒径超过了胶束分散范围。

1～5组样品的外观性状均为澄清透明，粒径在17.5～19.4 nm范围内，多分散指数PDI均小于0.3，符合胶束的特征。

1～5号样品的粒径无显著差异，当HA的质量分数为0.3%时，Zeta电位绝对值大于30 mV，继续增加HA的质量分数，Zeta电位变化不大，表明HA的质量分数大于
0.3%时，橙皮素胶束溶液更稳定。

2.3 HA的质量分数对橙皮素胶束溶液经皮吸收的影响
化妆品中的功能性成分只有渗透进皮肤才能发挥功效，为此本文以豚鼠为模型动物，通过离体经皮渗透实验考查HA的质量分数对橙皮素经皮渗透速率的影响。

在24 h内样品0，1，2，3，4和5组的平均累积渗透量如表3所示，稳态渗透速率常
数Js及其方差分析结果见表4。

表4结果表明，对照组的Js为4.953 5 μg/(cm2·h)，随着HA的加入，橙皮素的Js逐渐增大，当HA质量分数为0.5%时，与对照组相比增渗倍数达到1.5以上。

通过对各组的Js进行方差分析，可知加入HA后橙皮素的Js与对照组相比均有极显著的差异(P<0.01)。

HA质量分数分别为0.1%和0.2%时，Js与各组均存在显著差异(P<0.05)。

HA质量分数为0.3%和0.4%的2组之间，橙皮素的Js并未表现
出显著差异。

当HA的质量分数为0.5%时，橙皮素的Js明显高于其他各组。

可见，HA能显著提高橙皮素的经皮渗透速率。

由于HA是大分子物质，能够在水中形成致密的水溶性聚合网状结构，其水溶液能保持较高的黏性和弹性。

综合考虑HA对橙皮素胶束溶液黏度、粒径、Zeta电位，尤其是Js的影响，最终确定HA的较佳质量分数为0.5%。

2.4 橙皮素胶束溶液的理化性质
按照1.3的方法考察橙皮素胶束溶液的外观、气味、pH、平均粒径、Zeta电位以及橙皮素质量分数，研究其室温稳定性和耐寒、耐热性，实验结果如表5所示。

由表5可知，HA质量分数为0.5%时所制备的样品为澄清透明的液体，气味清新，无不良气味，pH=5.2～5.5。

耐寒和耐热实验表明，在高温(40 ℃)放置10 d和低温(4 ℃)放置30 d后，橙皮素胶束溶液外观性状和理化指标均无明显变化。

HA质量分数大于0.3%时，橙皮素胶束溶液的Zeta电位绝对值大于30 mV，胶
束制剂稳定。

当橙皮素胶束溶液中HA的质量分数为0.5%时，橙皮素经豚鼠皮肤
的稳态渗透速率Js达7.475 8 μg/(cm2·h)，为对照组的1.5倍，表明HA具有良好的促进橙皮素经皮吸收的作用。

HA质量分数为0.5%的橙皮素胶束溶液，室温
下pH平均值为5.4±0.1，Zeta电位平均值为-32.62 mV，制剂透明稳定、无不
良气味。

【相关文献】
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