ARMS法检测非小细胞肺癌EGFR基因位点不同的比较性分析
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展机制 的深入 研究 。 目前检 测 ＥＧＦＲ基 因突变 状态 的试 剂 广泛应用 于临床 ，其 不但 可 以有 效指 导 分子 靶 向 药物 的 使 用 ，也可 以为肺癌发生 机制的研究及 ＥＧＦＲ基 因突变状况 提 供重要 的信息 。 目前艾 德 ＥＧＦＲ基 因突变检 测试 剂 已被 我 国批准用于临床 ＥＧＦＲ基 因突变 检测 ，在 市场上有 ２种不 同 位点检测 试剂 盒供 临床使 用 ，即 ＥＧＦＲ基 因 ４位点及 ２９位 点检测 ，前者费用低 ，后 者费用较高 ，但检测位点 较多 。本 文 回顾分析 ＮＳＣＬＣ石蜡包埋 组织 ＡＲＭＳ法检 测 ＥＧＦＲ基 因突 变情况 ，旨在 了解艾 德 ＥＧＦＲ基 因 ４位点 及 ２９位点 试剂 突 变检出率 的差异性 ，以供 临床参 考。
１ 材 料 与方 法
１．１ 材料 收集 漳州市医 院 ２０１５年 ５月 ～２０１６年 １２月 行 原 发肺 癌手术切除 或活检 连续 检测 病例 ３７３例 。其 中男 性 ２４７例 ，女性 １２６例 ；年 龄 ３０—８３岁 ，中位 年 龄 ５７岁 。行 ＥＧＦＲ基 因 ４位点检测病 例 １５１例 ，行 ＥＧＦＲ基 因 ２９位点 检 测 病例 ２２２例 。所有标本 均经 １０％中性缓 冲福 尔马林 固定 ， 常规石蜡包埋 。病理 类 型 ：（１）行 ＥＧＦＲ基 因 ４位点 检测 病 例 病理类型包括 ：肺腺癌 １２１例 （包 括原位 腺癌 ）、肺 鳞癌 ｌ８ 例 ，腺鳞癌 ９例 ，神经 内分泌 癌 ３例 ；（２）行 ＥＧＦＲ基因 ２９位 点检测病例病理类 型包 括 ：肺腺癌 １９２例 （包 括原 位腺 癌 ）、 肺 鳞癌 １５例 ，腺鳞癌 １０例 ，神经 内分 泌癌 ５例 。 １．２ 主要试剂与 仪器 ＤＮＡ提取试 剂 盒 （厦 门艾 德公 司 ） 及 ＥＧＦＲ ４种 热 突 变 检 测 试 剂 盒 及 ＥＧＦＲ ２９种 突 变 检 测 试 剂 盒 （厦 门艾德 公 司 ）。Ｃｏｂａｓ Ｚ４８０ ＰＣＲ仪 ；微 型 干式 恒 温 器 （ＧＹ２１０１）；ＮＤ２０００微 型紫外分光光度仪 。 １．３ 方 法 １．３．１ ＤＮＡ提取 严格按 照 ＤＮＡ提取试剂盒 说明书操作 ， 紫外分光光度仪测 定提取 样本 ＤＮＡ的纯 度和 浓度 ，纯 度 在 １．８—２．０之间的样本为好 。 １．３．２ ＡＲＭＳ法 采用 ＥＧＦＲ基 因突变 ４种及 ２９种检测 试 剂盒 （厦 门艾德 公司 ），提取 ＤＮＡ产物 为模 板 ，ＤＮＡ稀 释 浓 度为 ２—３ ｎｇ／ｔｘＬ；其 中，ＥＧＦＲ基 因热 点突 变 ４种 ，包 括 ＥＧ— ＦＲ 基 因 的 １９、２０及 ２１外 显 子 ，位 点 包 含 Ｅｘ１９ Ｄｅｌ（２２３５— ２２４９ｄｅｌ１５、２２３６－２２５０ｄｅｌ１５）、Ｅｘ２０．Ｔ７９０Ｍ 及 Ｅｘ２１一Ｌ８５８Ｒ ４ 个热点突 变 ；ＥＧＦＲ基 因 突 变 ２９位 点 ，包 括 ＥＧＦＲ 基 因 的 １８、１９、２０及 ２１外显 子 ，位 点 包含 除 了含有 ２２３５—２２４９ｄｅ１１５ 和 ２２３６—２２５０ｄｅ１１５，还 有 其 他 １７ 种 Ｅｘｌ９Ｄｅｌ以 及 Ｅｘ２０一 Ｔ７９０Ｍ、Ｅｘ２１一Ｌ８５８Ｒ、３ 种 Ｅｘ２０一ｉｎｓ、Ｅｘｌ８一Ｇ７１９Ｘ （Ｇ７１９Ａ、 Ｇ７１９Ｓ、Ｇ７１９Ｃ）、Ｅｘ２０一￥７６８Ｉ、Ｅｘ２１一Ｌ８６１Ｑ等 ２９种突变 ，具 体 碱基变化及 Ｃｏｓｍｉｃ ＩＤ可以参考说 明书。４种 热点突变及 ２９
接 受 日期 ：２０１８—０１—１２ 基 金项 目：福建漳州市 自然科学基金 （ＺＺ２０１２Ｊ３３） 作者单位 ：福建 医科大学附属漳州市 医院病理科 ，漳 州 ３６３０００ 作者简介 ：陈顺平 ，男 ，主管技师 。Ｅ—ｍａｉｌ：４７１２３１６８２＠ｑｑ．ｔｏｍ
苏海燕 ，女 ，副主任 医师 ，通讯作 者 。Ｅ—ｍａｉｌ：ｓ￣ｉｎ００００６４
· ３２２ ·
临床 与 实验 病 理 学杂 志 Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｐａｔｈｏｌ ２０１８ Ｍａｒ；３４（３）
网络 出版 时 间 ：２０１８—３—２９ １４：００ 网络 出版 地 址 ：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０１８０３２９．１４００．０１９．ｈｔｍｌ
ＡＲＭＳ法检 测 非 小 细 胞 肺癌 ＥＧＦＲ基 因位 点不 同的 比较 性 分析
陈顺 平 ，苏海 燕 ，翁剑 鸣 ，吴文 乔 ，沈 洪武
摘 要 ：目的 分析 扩增 阻滞 突变 系统 （ＡＲＭＳ）法检 测 ＥＧＦＲ 基 因不 同位 点 数 的 突变 检 出率 差 异 。方 法 回顾 性 分 析 ＡＲＭＳ法 对 非 小 细 胞 肺 癌 （ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ， ＮＳＣＬＣ）石蜡包埋组 织标 本 ＥＧＦＲ基 因 ４位点 突 变及 ２９位 点 突变检测 情况 。结果 ＡＲＭＳ法 检测 ＮＳＣＬＣ ＥＧＦＲ基 因 （１９、２０、２１号 外显子 ）４位点 突变 的 突变率 为 ２９．１４％ ，ＥＧ— ＦＲ基 因（１８、１９、２０、２１号外显子 ）２９位点 突变率为 ４４．６０％ 。 ＮＳＣＬＣ中 ＥＧＦＲ基 因突变率在 ４位 点与 ２９位点差异 具有显 著性 （Ｐ＜０．００１）；ＥＧＦＲ基 因 ４位 点在 ＮＳＣＬＣ腺 癌 中 的突 变率为 ３２．２３％ ，而 ２９位 点 的突 变率 为 ４６．８８％ ，两者 突变 率差异 有显 著性 （Ｐ＜０．００１）；但 １９Ｄｅｌ与 Ｌ８５８Ｒ点突 变各 自在两种不 同位 点试 剂检测 中 ＮＳＣＬＣ突变率 及腺癌 突变率 差异无统计学 意义 （Ｐ＞０．０５）。ＥＧＦＲ ２９位点 试剂 检 测 中 女性患 者 与 男 性 患 者 的 突变 率 差 异 有 统 计 学 意 义 （Ｐ ＜ ０．００１），但 ４位点试 剂检 测差 异无 统计 学 意义 （Ｐ＞０．０５）； 男 性患者检测 ＥＧＦＲ基 因 ２９位点的突变率 高于 ４位 点突变 率 ，但差异无 统计学 意义 （Ｐ＞０．０５），女 性 患者 表现 出更 高 的突变 率 ，且 ２９位 点 与 ４位 点 突变 率差 异 有 显著 性 （Ｐ＜ ０．００１）。结论 艾 德公 司设计 ＥＧＦＲ基 因 ２９种 检测位 点在 ＮＳＣＬＣ或腺癌或女性患者 中的突变率明显高 于 ＥＧＦＲ基 因 ４ 位 点突变率 ；同时 ，通过了解这两种不 同位点检测试剂所体 现 出不 同突变检 出率 ，还有助 于不 同情 况下不 同人群 ＥＧＦＲ靶 点检测选择提供 了数据支持 ，具有较高的临床意义 。 关键词 ：肺 肿瘤 ；非 小细胞肺癌 ；ＥＧＦＲ；ＡＲＭＳ 中图分类号 ：Ｒ ７３４．２ 文献标 志码 ：Ｂ 文 章 编 号 ：１００１—７３９９（２０１８）０３—０３２２—０４ ｄｏｉ：１０．１３３１５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｃｅｐ．２０１８．０３．０１９
ＥＧＦＲ被认 为是最有效 的肺 癌靶点 之一 ，它是 一种 跨细 胞膜糖蛋 白 ，属于酪氨 酸 酶 ，其 突变及 过表 达与 肿瘤 细胞 的增殖 、活动 性 、粘 连 性 、侵 袭性 、凋 亡 抑 制 和 血 管生 成 相 关 … 。近年来 ，以吉非替尼 （Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）为代 表 的酪氨酸 激酶 抑制剂在非小细胞 肺癌 （ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ，ＮＳＣＬＣ） 靶 向药物抑制肿瘤 细胞生长起 了积极 的疗 效 。 ，得 助于近 年来以 ＥＧＦＲ基 因为 首 的信 号传 导通 路在 ＮＳＣＬＣ发 生 、发
展机制 的深入 研究 。 目前检 测 ＥＧＦＲ基 因突变 状态 的试 剂 广泛应用 于临床 ，其 不但 可 以有 效指 导 分子 靶 向 药物 的 使 用 ，也可 以为肺癌发生 机制的研究及 ＥＧＦＲ基 因突变状况 提 供重要 的信息 。 目前艾 德 ＥＧＦＲ基 因突变检 测试 剂 已被 我 国批准用于临床 ＥＧＦＲ基 因突变 检测 ，在 市场上有 ２种不 同 位点检测 试剂 盒供 临床使 用 ，即 ＥＧＦＲ基 因 ４位点及 ２９位 点检测 ，前者费用低 ，后 者费用较高 ，但检测位点 较多 。本 文 回顾分析 ＮＳＣＬＣ石蜡包埋 组织 ＡＲＭＳ法检 测 ＥＧＦＲ基 因突 变情况 ，旨在 了解艾 德 ＥＧＦＲ基 因 ４位点 及 ２９位点 试剂 突 变检出率 的差异性 ，以供 临床参 考。
１ 材 料 与方 法
１．１ 材料 收集 漳州市医 院 ２０１５年 ５月 ～２０１６年 １２月 行 原 发肺 癌手术切除 或活检 连续 检测 病例 ３７３例 。其 中男 性 ２４７例 ，女性 １２６例 ；年 龄 ３０—８３岁 ，中位 年 龄 ５７岁 。行 ＥＧＦＲ基 因 ４位点检测病 例 １５１例 ，行 ＥＧＦＲ基 因 ２９位点 检 测 病例 ２２２例 。所有标本 均经 １０％中性缓 冲福 尔马林 固定 ， 常规石蜡包埋 。病理 类 型 ：（１）行 ＥＧＦＲ基 因 ４位点 检测 病 例 病理类型包括 ：肺腺癌 １２１例 （包 括原位 腺癌 ）、肺 鳞癌 ｌ８ 例 ，腺鳞癌 ９例 ，神经 内分泌 癌 ３例 ；（２）行 ＥＧＦＲ基因 ２９位 点检测病例病理类 型包 括 ：肺腺癌 １９２例 （包 括原 位腺 癌 ）、 肺 鳞癌 １５例 ，腺鳞癌 １０例 ，神经 内分 泌癌 ５例 。 １．２ 主要试剂与 仪器 ＤＮＡ提取试 剂 盒 （厦 门艾 德公 司 ） 及 ＥＧＦＲ ４种 热 突 变 检 测 试 剂 盒 及 ＥＧＦＲ ２９种 突 变 检 测 试 剂 盒 （厦 门艾德 公 司 ）。Ｃｏｂａｓ Ｚ４８０ ＰＣＲ仪 ；微 型 干式 恒 温 器 （ＧＹ２１０１）；ＮＤ２０００微 型紫外分光光度仪 。 １．３ 方 法 １．３．１ ＤＮＡ提取 严格按 照 ＤＮＡ提取试剂盒 说明书操作 ， 紫外分光光度仪测 定提取 样本 ＤＮＡ的纯 度和 浓度 ，纯 度 在 １．８—２．０之间的样本为好 。 １．３．２ ＡＲＭＳ法 采用 ＥＧＦＲ基 因突变 ４种及 ２９种检测 试 剂盒 （厦 门艾德 公司 ），提取 ＤＮＡ产物 为模 板 ，ＤＮＡ稀 释 浓 度为 ２—３ ｎｇ／ｔｘＬ；其 中，ＥＧＦＲ基 因热 点突 变 ４种 ，包 括 ＥＧ— ＦＲ 基 因 的 １９、２０及 ２１外 显 子 ，位 点 包 含 Ｅｘ１９ Ｄｅｌ（２２３５— ２２４９ｄｅｌ１５、２２３６－２２５０ｄｅｌ１５）、Ｅｘ２０．Ｔ７９０Ｍ 及 Ｅｘ２１一Ｌ８５８Ｒ ４ 个热点突 变 ；ＥＧＦＲ基 因 突 变 ２９位 点 ，包 括 ＥＧＦＲ 基 因 的 １８、１９、２０及 ２１外显 子 ，位 点 包含 除 了含有 ２２３５—２２４９ｄｅ１１５ 和 ２２３６—２２５０ｄｅ１１５，还 有 其 他 １７ 种 Ｅｘｌ９Ｄｅｌ以 及 Ｅｘ２０一 Ｔ７９０Ｍ、Ｅｘ２１一Ｌ８５８Ｒ、３ 种 Ｅｘ２０一ｉｎｓ、Ｅｘｌ８一Ｇ７１９Ｘ （Ｇ７１９Ａ、 Ｇ７１９Ｓ、Ｇ７１９Ｃ）、Ｅｘ２０一￥７６８Ｉ、Ｅｘ２１一Ｌ８６１Ｑ等 ２９种突变 ，具 体 碱基变化及 Ｃｏｓｍｉｃ ＩＤ可以参考说 明书。４种 热点突变及 ２９
接 受 日期 ：２０１８—０１—１２ 基 金项 目：福建漳州市 自然科学基金 （ＺＺ２０１２Ｊ３３） 作者单位 ：福建 医科大学附属漳州市 医院病理科 ，漳 州 ３６３０００ 作者简介 ：陈顺平 ，男 ，主管技师 。Ｅ—ｍａｉｌ：４７１２３１６８２＠ｑｑ．ｔｏｍ
苏海燕 ，女 ，副主任 医师 ，通讯作 者 。Ｅ—ｍａｉｌ：ｓ￣ｉｎ００００６４
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临床 与 实验 病 理 学杂 志 Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｐａｔｈｏｌ ２０１８ Ｍａｒ；３４（３）
网络 出版 时 间 ：２０１８—３—２９ １４：００ 网络 出版 地 址 ：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０１８０３２９．１４００．０１９．ｈｔｍｌ
ＡＲＭＳ法检 测 非 小 细 胞 肺癌 ＥＧＦＲ基 因位 点不 同的 比较 性 分析
陈顺 平 ，苏海 燕 ，翁剑 鸣 ，吴文 乔 ，沈 洪武
摘 要 ：目的 分析 扩增 阻滞 突变 系统 （ＡＲＭＳ）法检 测 ＥＧＦＲ 基 因不 同位 点 数 的 突变 检 出率 差 异 。方 法 回顾 性 分 析 ＡＲＭＳ法 对 非 小 细 胞 肺 癌 （ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ， ＮＳＣＬＣ）石蜡包埋组 织标 本 ＥＧＦＲ基 因 ４位点 突 变及 ２９位 点 突变检测 情况 。结果 ＡＲＭＳ法 检测 ＮＳＣＬＣ ＥＧＦＲ基 因 （１９、２０、２１号 外显子 ）４位点 突变 的 突变率 为 ２９．１４％ ，ＥＧ— ＦＲ基 因（１８、１９、２０、２１号外显子 ）２９位点 突变率为 ４４．６０％ 。 ＮＳＣＬＣ中 ＥＧＦＲ基 因突变率在 ４位 点与 ２９位点差异 具有显 著性 （Ｐ＜０．００１）；ＥＧＦＲ基 因 ４位 点在 ＮＳＣＬＣ腺 癌 中 的突 变率为 ３２．２３％ ，而 ２９位 点 的突 变率 为 ４６．８８％ ，两者 突变 率差异 有显 著性 （Ｐ＜０．００１）；但 １９Ｄｅｌ与 Ｌ８５８Ｒ点突 变各 自在两种不 同位 点试 剂检测 中 ＮＳＣＬＣ突变率 及腺癌 突变率 差异无统计学 意义 （Ｐ＞０．０５）。ＥＧＦＲ ２９位点 试剂 检 测 中 女性患 者 与 男 性 患 者 的 突变 率 差 异 有 统 计 学 意 义 （Ｐ ＜ ０．００１），但 ４位点试 剂检 测差 异无 统计 学 意义 （Ｐ＞０．０５）； 男 性患者检测 ＥＧＦＲ基 因 ２９位点的突变率 高于 ４位 点突变 率 ，但差异无 统计学 意义 （Ｐ＞０．０５），女 性 患者 表现 出更 高 的突变 率 ，且 ２９位 点 与 ４位 点 突变 率差 异 有 显著 性 （Ｐ＜ ０．００１）。结论 艾 德公 司设计 ＥＧＦＲ基 因 ２９种 检测位 点在 ＮＳＣＬＣ或腺癌或女性患者 中的突变率明显高 于 ＥＧＦＲ基 因 ４ 位 点突变率 ；同时 ，通过了解这两种不 同位点检测试剂所体 现 出不 同突变检 出率 ，还有助 于不 同情 况下不 同人群 ＥＧＦＲ靶 点检测选择提供 了数据支持 ，具有较高的临床意义 。 关键词 ：肺 肿瘤 ；非 小细胞肺癌 ；ＥＧＦＲ；ＡＲＭＳ 中图分类号 ：Ｒ ７３４．２ 文献标 志码 ：Ｂ 文 章 编 号 ：１００１—７３９９（２０１８）０３—０３２２—０４ ｄｏｉ：１０．１３３１５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｃｅｐ．２０１８．０３．０１９
ＥＧＦＲ被认 为是最有效 的肺 癌靶点 之一 ，它是 一种 跨细 胞膜糖蛋 白 ，属于酪氨 酸 酶 ，其 突变及 过表 达与 肿瘤 细胞 的增殖 、活动 性 、粘 连 性 、侵 袭性 、凋 亡 抑 制 和 血 管生 成 相 关 … 。近年来 ，以吉非替尼 （Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）为代 表 的酪氨酸 激酶 抑制剂在非小细胞 肺癌 （ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ，ＮＳＣＬＣ） 靶 向药物抑制肿瘤 细胞生长起 了积极 的疗 效 。 ，得 助于近 年来以 ＥＧＦＲ基 因为 首 的信 号传 导通 路在 ＮＳＣＬＣ发 生 、发