HPLC法同时测定止血宝片中绿原酸、蒙花苷和芹菜素的含量

甘肃医药2018年37卷第5期Gansu Medical Journal ,2018,Vol.37,No.5
能孤立地以R avR ≥0.5mv 来诊断右心室肥大，因为正常情况下，右心室壁本来就比左心室壁薄得多，右心室即使有轻度的肥厚，左心室的除极电势仍然占优势，综合向量的改变就不明显。

只有当右心室壁肥厚明显时，才会较显著地影响心电综合向量的方向，从而使心电图产生特征性的改变。

再由解剖学上左右心室相互间的位置关系，右心室肥厚时横面心电向量环的改变突出，因而诊断右心室肥厚的一些重要依据更多地表现在胸壁导联心电图上。

因此，一定要综合分析其他导联QRS 波群。

综上所述，avR 导联在心电图诊断中不应忽视，应
充分发挥avR 导联QRS 波电压的增大对诊断心室肥大的作用，提高心电图诊断水平。

参考文献
［1］王双养，邬易琳.心电图avR 导联在心血管疾病中的诊断价值［J ］.现
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（本文编辑：马佰菁）
基金项目：甘肃省科技重大专项（项目编号：172D2FA009）第一作者：王福成，男，高级工程师，从事中药学研究工作
通信作者：张平，男，主管药师，从事中药检验、质量评价及资源开发利用研究工作。

E-mail ：58735870@
HPLC 法同时测定止血宝片中绿原酸、蒙花苷和芹菜素的含量
王福成1冯祥瑞1杨玲霞1张平1,2马潇1,2
1.甘肃省药品检验研究院，甘肃兰州730050；
2.甘肃省中藏药检验检测技术工程实验室，甘肃兰州730070
【摘要】目的：建立止血宝片中绿原酸、蒙花苷和芹菜素的测定方法。

方法：采用Agilent TC-C18（4.6mm ×250mm ，5μm ）色谱柱，以乙腈-0.5%冰醋酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速1ml/min -1，检测波长326nm ，柱温25℃，进样量10μl 。

结果：绿原酸、蒙花苷和芹菜素进样量分别在102.24~1022.43μg/ml （r =0.9989）、113.53~1135.32μg/ml （r =0.9966）和72.14~721.38μg/ml （r =0.9999）内与峰面积呈良好的线性关系；加样回收率分别为99.89%、99.66%和99.23%，RSD 分别为1.97%、2.28%和2.32%。

结论：该方法操作简便，重复性好，可用于止血宝片中绿原酸、蒙花苷和芹菜素的3种成分的同时测定。

【关键词】高效液相色谱法；止血宝片；绿原酸；蒙花苷；芹菜素中图分类号：R284.1
文献标识码：A
文章编号：1004-2725（2018）5-0449-03
止血宝片收载于《卫生部药品标准新药转正》第十册，有凉血止血，袪瘀消肿，用于衄血、吐血、尿血、血淋、便血、崩漏下血。

原质量标准应用分光光度法测定总黄酮的含量[1]，不利于该产品的质量控制。

本品为小蓟[2]经加工制成的糖衣片，为更好地控制止血宝片的质量，采用高效液相色谱法，同时测定止血宝片中绿原酸、蒙花苷和芹菜素，为有效控制该药品质量提供了参考。

1仪器与试药1.1仪器
Waters e2998高效液相色谱仪（2998DAD
检测器，Empower3工作站；美国Waters 公司）；MS205-DU 电子分析天平（METTLER TOLEDO ）；KQ-400E 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2试药止血宝片（甘肃皇甫谧制药有限公司生产，批号：20170802、20170912、20170914）。

绿原酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110752-201415，含量以96.2%计）；蒙花苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111528-200303，含量以94.8%计）；芹菜素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111901-
201603，纯度≥98.2%）；甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。

2方法与结果
2.1色谱条件及系统适用性实验色谱柱：Agilent
TC-C18（4.6mm ×250mm ，5μm ）；乙腈为流动相A ，以水
·药学·
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（含0.05%冰醋酸）为流动相B ，梯度洗脱：0~10min ，A18%→33%，10~17min ，A 33%→35%，17~40min ，
A35%→55%。

流速1ml/min ；检测波长326nm ；柱温25℃；进样量10μl 。

在上述条件下，对照品与相邻色谱峰分离度大于1.5，对称因子符合要求。

见图1。

2.2供试品溶液的制备取本品20片，除去糖衣后，精密称定，研细，过40目筛，取约0.4g ，精密称定，置于
100ml 三角瓶中，加入甲醇25ml ，称定重量，28℃以下超声提取35分钟，再称定重量，加甲醇补足减失重量，
摇匀，作滤过，滤液作为供试品溶液。

2.3阴性对照溶液的制备按工艺规定，依处方组成，
制成不含小蓟的阴性样品，按2.2项方法制备，作为阴性对照溶液。

2.4
对照品溶液的制备
分别精密称取绿原酸、蒙花
苷和芹菜素各13.31mg 、9.98mg 、9.09mg ，置于25ml 棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度分别为绿原酸0.1024mg/ml -1，蒙花苷0.1135mg/ml -1和芹菜素0.0721mg/ml -1溶液，作为对照品贮备液。

2.5方法学考察
2.5.1线性范围考察。

取对照品贮备液5.0、10.0、15.0、
20.0、25.0、30.0μl ，用甲醇稀释成6个浓度。

分别进样检
测，浓度为自变量x （mg ·ml -1），以峰面积为应变量，得绿原酸、蒙花苷和芹菜素浓度与峰面积的标准曲线方程分别为：Y =30332X +324986，r =0.9989（n =6）；Y =42728X +62772，r =0.9966（n =6）；Y =66876X +8026，r =
0.9999（n =6）。

表明三种成分的线性范围分别为0.1022~3.0667mg/ml 、0.1135~3.4059mg/ml 和0.0721~2.1642mg/ml 范围内线性良好。

见图2。

5
10
15
20
25
30
35
5
10
15
20
25
30
35
5
10
15
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25
30
35
图2对照品标准曲线
绿原酸标准曲线(C/V )芹菜素标准曲线(C/V )
蒙花苷标准曲线(C/V )A.对照品溶液
B.供试品溶液
C.阴性对照品溶液1.绿原酸
2.蒙花苷
3.芹菜素
图1止血宝片HPLC 色谱图
0.120.080.040.00
10
20
30
1
2
3
A
10
20
30
0.400.300.200.10
0.00
1
2
3
B
10
20
30
0.400.300.100.00
C
0.20
2.5.2精密度试验。

吸取上述混合对照品溶液适量，置
于10ml 量瓶中，配成不同浓度。

在2.1项色谱条件下，分别在日内连续进样，计算仪器精密度，结果：绿原酸、蒙花苷和芹菜素的RSD 值分别为1.01%、1.02和1.14%（n =5），在5日连续进样，计算仪器精密度，结果三种对照品的RSD 值分别为1.86%、1.88和2.04%（n =5），表明精密度良好。

2.5.3重复性试验。

取同一批（批号：20170802）止血
宝片，按2.2项方法平行制备供试品溶液，分别检测。

计算绿原酸、蒙花苷和芹菜素的色谱峰相对保留时间相对峰面积RSD 值分别为0.87%、0.94%和1.04%，表明方法重复性良好。

2.5.4加样回收率试验。

取已知含量的止血宝片6份，分别置于量瓶中，再加入绿原酸、蒙花苷和芹菜素对照品10.24、11.35、7.21μg ，混匀，按供2.2项方法制备，按2.1项色谱条件检测。

见表1。

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表1加样回收率试验结果（n =6）
测得量（μg ）74.8774.6473.9176.6471.1572.26255.94258.47256.05256.47259.59254.1451.5653.2655.3250.6250.0451.83
回收率（%）100.63102.82100.54100.6799.1198.7299.68100.0398.6398.83101.0998.6198.5599.61101.3998.3999.3698.07
加入量（μg ）10.2410.2410.2410.2410.2410.2411.3511.3511.3511.3511.3511.357.217.217.217.217.217.21
样品原有量（μg ）
64.1662.3563.2765.8961.5562.96
245.42247.05248.26248.15245.43246.38
45.1146.2647.3544.2443.1545.64
组分绿原酸
蒙花苷
芹菜素
平均回收率（%）
99.86
99.4899.23RSD （%）1.97
2.28
2.32
表2止血宝片中绿原酸、蒙花苷和芹菜素含量（n =3）
芹菜素含量（mg/片）
0.4510.4530.448
蒙花苷含量（mg/片）
2.4512.5202.487
绿原酸含量（mg/片）
0.0640.0620.065
批号201708022017091220170914
2.6
样品含量按2.2项供试品溶液的制备方法制
备3批止血宝片溶液，按2.1项色谱条件测定，每批次
进样（n =3），计算供试品含量。

见表2。

3讨论
止血宝片由单味药材小蓟制成，现代研究[5]小蓟中含有黄酮类、三萜类和有机酸类等成分，其中黄酮类成分为其止血、抗炎的主要活性成分，具有降血压、抗菌、抗氧化等多方面的药理活性。

为了更全面客观、准确地评价止血宝片的质量，本实验选择测定这3种成分的含量作为质量控制的指标。

绿原酸、蒙花苷和芹菜素极性相差较大，采用梯度洗脱，能使色谱峰分离度较好，曾对甲醇-水、乙腈-
0.5%磷酸水溶液等流动相进行考察，采用乙腈-0.5%冰醋酸水溶液进行梯度洗脱时，绿原酸、蒙花苷和芹菜素峰易分离且峰形好。

建立的控制止血宝片的含量测定
方法在国内未见报道，本实验方法灵敏、快速、专属性好，为该制剂含量测定方法制定提供了依据。

参考文献
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（本文编辑：姬晓虹）
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