分光光度法测定蒙药耧斗菜中盐酸小檗碱的含量

分光光度法测定蒙药耧斗菜中盐酸小檗碱的含量
王文帅;云学英;赵兴亮;闫东升
【摘要】目的：建立蒙药耧斗菜中盐酸小檗碱的含量测定方法。

方法：以甲醇为
提取溶剂,采用超声法直接提取样品中的盐酸小檗碱,以蛮罕山产蒙药耧斗菜作为供
试品对本实验方法进行考察,以甲醇为空白,在348nm波长处用紫外分光光度法测
定盐酸小檗碱的含量。

结果：盐酸小檗碱浓度在0.0020-0.0140 mg/mL范围内
与吸光度呈良好的线性关系,平均加样回收率为96.77%（n=6）,小井沟、蛮罕山、三岔沟三不同产地蒙药耧斗菜中盐酸小檗碱的含量分别为6.259 mg/g、5.630
mg/g及5.960 mg/g。

结论：本法操作简便、重复性好,可用于中蒙药材中盐酸小檗碱的含量测定。

【期刊名称】《内蒙古医科大学学报》
【年(卷),期】2014(036)006
【总页数】4页(P502-504,508)
【关键词】耧斗菜;盐酸小檗碱;分光光度法;含量测定
【作者】王文帅;云学英;赵兴亮;闫东升
【作者单位】内蒙古医科大学药学院,内蒙古呼和浩特010110
【正文语种】中文
【中图分类】R291.2
蒙药耧斗菜(Aquilegia viridiflora Pall.)属毛茛科耧斗菜属植物,全草入药。

一般在
夏末、秋初之际采收,阴干备用。

蒙药名为:乌日乐其-额布斯、优木得金、扫高音-
伊得根、扫膏音-额莫、哈担都-乌日格胡-嘎布日。

生于海拔2000～2300m间的
山地路、河边的潮湿草地,产于锡林郭勒盟、兴安盟、呼伦贝尔市、乌兰察布市、
赤峰市、大青山、蛮罕山、乌拉山、贺兰山、龙首山等。

蒙药味苦,性重、稀、钝、凉、柔,有小毒。

具有通经活血,催产,下胎衣,愈伤,燥协日乌素,止痛等功效。

主治月
经不调,经血淋漓不止,胎盘滞留,腹痛,刃伤[1～3]。

盐酸小檗碱是蒙药耧斗菜的主要成分之一,它常用于治疗肠炎、细菌性痢疾、黄胆性肝炎、尿路感染、下肢湿热肿
痛等[4～6],具有清热解毒、泻火燥湿之功能。

有关蒙药耧斗菜中盐酸小檗碱含量
测定未见有文献报道,我们以甲醇为提取溶剂,采用超声法直接提取样品中的盐酸小
檗碱,在348nm波长处用分光光度法对其盐酸小檗碱的含量进行了测定,方法简便、快速、准确,结果较为满意。

1.1 仪器
TU-1901型双光束紫外可见分光光度计(北京普析仪器有限公司),TG 328 B型电子分析天平(上海天平厂),超声仪(天津奥特恩仪器有限公司 AS3120)。

1.2 试剂
盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所111622-200301);耧斗菜采于小井沟、蛮罕山、三岔沟三个产地,经药学院李骁博士鉴定为毛茛科植物耧斗菜(AquiLegia viridiflora Pall.)全草,甲醇及其他所用试剂均为分析纯。

2.1 对照品溶液的制备[7,8]
精密称量在60℃温度下干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品10.00mg于50mL带塞
锥形瓶中,加甲醇适量,超声振荡20min使之溶解,放冷后转移至50mL容量瓶中定容;精密吸取该溶液25mL于50mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,制成
0.1000mg/mL贮备液,备用。

2.2 供试品溶液的制备
称取耧斗菜粉末(过30目筛)1.0012g,置50mL锥形瓶中,加甲醇50.00mL,超声振
荡20min,放冷至室温,补足差量,过滤,取续滤液倒入容量瓶中,即制得供试品溶液。

2.3 测定波长的选择[9～11]
取2.1项下对照品贮备液3mL于50mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,制成
0.0060mg/mL的盐酸小檗碱溶液,将对照品溶液、供试品溶液与阴性对照样品溶液按照分光光度法,以甲醇为空白,在200～800nm波长范围内对其进行扫描,测定吸收值。

实验谱图表明,盐酸小檗碱在227,264,348,430nm波长处均有最大吸收,其中在430nm波长处的吸收比较小,为了避免杂质在短波长处的干扰,本实验选定348nm为盐酸小檗碱的测定波长。

2.4 线性关系考察
精密量取2.1项下对照品贮备液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0mL,分别置于50mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。

以甲醇作为空白,按照分光光度法,在348nm波长处测定其吸收值。

以测得的吸光度(A)对浓度(C)进行线性回归,得到回归方程为
A=70.73328C-0.0049,相关系数r=0.9999。

结果表明,盐酸小檗碱浓度在
0.0020～0.0140mg/mL范围内,浓度与吸光度呈良好的线性关系。

2.5 稳定性试验
精密吸取蛮罕山样品溶液2mL,于50mL容量瓶中加甲醇稀释至刻度,在常温下0、0.5、1、2、4、8、12h时测定其吸收值,结果见表1。

实验结果表明样品溶液在12h内稳定。

2.6 精密度试验
取盐酸小檗碱对照品溶液3份,分别稀释成浓度为0.0020,0.008,0.0140mg/mL溶液,分别测定吸收值5次。

RSD分别为0.38%,0.46%和0.25%(n=5)。

表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验
取蛮罕山产蒙药耧斗菜样品5份,按样品溶液的制备方法配制供试品溶液,精密吸取
2mL于50mL容量瓶中定容,测定吸收值,计算盐酸小檗碱的含量,结果见表3。

结果表明供试品重复性良好。

2.8 加样回收率试验
精密称取已知含量的蛮罕山耧斗菜(5.618mg/g ),共6份,分别置于50mL锥形瓶中,每个样品中分别加入适量盐酸小檗碱对照品,按2.2项下方法制得供试品溶液,按2.5项下方法操作测定吸收值,计算回收率,结果见表4。

其平均加样回收率为
96.41%。

2.9 样品含量的测定
取三个不同产地蒙药耧斗菜样品,按2.2项下方法制得供试品溶液,精密吸取2mL于50mL容量瓶中定容,以甲醇为空白,在348nm波长处测定吸收值,每个样分别测定两次,将测得的吸光度值分别代人回归方程计算样品中盐酸小檗碱的含量,结果见表5。

盐酸小檗碱属于季銨类生物碱,为黄色结晶性粉末,味极苦,易溶于甲醇与热水,微溶于乙醇,极微溶于氯仿,不溶于乙醚。

本实验通过提取试验及干扰试验证明:测定蒙药耧斗菜中盐酸小檗碱用甲醇作为提取溶剂、采用超声法直接提取效果较好,超声
20min就可使样品中的盐酸小檗碱完全提取出来。

本实验分别对大青山小井沟、蛮罕山与三岔沟三个不同产地的蒙药耧斗菜中的盐酸小檗碱含量进行了测定,结果证明大青山小井沟所产蒙药耧斗菜的盐酸小檗碱含量略高,其他两产地的含量较为接近。

通过对蒙药耧斗菜中盐酸小檗碱含量的研究可为临床用药提供理论依据,也可为进一步的深加工研究提供基础数据。

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