高效液相色谱法测定黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量

高效液相色谱法测定黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量
取黄芪250g，用60%的乙醇，分别以12倍量，10倍量，10倍量提取三次，每次1.5小时。

精制的药液在旋转蒸发仪中，旋转蒸干乙醇，将浓缩药液置于已干燥至恒重且称重的2号蒸发皿中,水浴蒸干,置烘箱中干燥3h(105℃),取出,置于干燥器中放置30min,称重，并记录重量。

2号蒸发皿重：213.9g，皿与药物总重：304.7g，提取药材：90.8g 测定黄芪药粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为1790.35μg/g。

含量测定方法与结果：
仪器：美国SSI高效液相色谱仪
色谱柱：BonChrom-c18,4.6*250mm,5μg,100A
流动相：乙腈：水：甲酸=17：83：0.4；检测波长：260nm;流速:1ml/min;进样量:20ul；柱温:常温。

对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品约 1.15mg，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加流动相制成每lml含46μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：
取提取的黄芪细粉（过80目)约0.025g ,精密称定，置5ml量瓶中,加流动相至刻度,超声10min，摇匀,取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得。

线性关系考察
精密吸取上述对照品溶液，分别配制成含毛蕊异黄酮葡萄糖苷2.76，
4.6，9.2，18.4，36.8，46μg/ml 的标准溶液,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液按上述色谱条件分析。

以峰面积为纵坐标(Y),浓度为横坐标(X)作图。

毛蕊异黄酮葡萄糖苷质量浓度在2.76-46mg/L 间与峰面积有良好的线性关系。

回归方程y=41784x-694.99(r=0.9992,n=6)。

精密度试验
取9.2μg/ml毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液 , 按上述色谱条件连续进样5次,测得阿魏酸的峰面积的RSD为0.46%。

结果表明本法精密度良好。

峰面积（mvo/ts）平均值 RSD %（n=5) 417389
415344
418151.6 0.46%
418197
419690
420138
稳定性试验
取含量测定的溶液，分别于 0，2，4，6，8，12 h 进行测定，得出毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD为1.15%。

结果表明,在室温条件下,供试品溶液12h内稳定性良好。

峰面积（mvo/ts ） 平均值
RSD %（n=6)
374750 377540 383793
373160 383275 377655 378362.2
1.15%
重现性试验
取黄芪约 0.025 g ,6份,精密称定,按上述方法制备供试品溶液,在上述色谱条件下吸取供试液20μl, 进样分析并计算含量。

得到含量平均值为1790.35μg/g 。

样品质量（g ）
峰面积 含量(μg/g) RSD%
0.0251 374750 1789.92 1.54% 0.0249 370277 1782.80 0.0253 367105 1739.61 0.0247 372956 1810.21 0.0252 380628 1810.72 0.0252 380232
1808.84
回收率试验
取6份已知含量的黄芪药粉0.025 g,精密称定,分别置5ml 量瓶中 , 精密加入46ug 的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，加流动相至刻度，按供试品溶液制备方法操作，并测定含量，计算回收率。

见以下表格。

样品质量/g
加入毛蕊
异黄酮葡萄糖苷量/μg
测定结果
/μg
回收率/%
平均回收 率/%
RSD/% (n =6)
0.02644 46 94.19 101.86% 101.05%
1.77%
0.02783 46 96.79 102.10% 0.02572 46 92.75 101.53%
0.02703 46 93.89 98.91% 0.02700 46 93.77 98.77% 0.02591
46
93.82
103.12%
毛蕊异黄酮葡萄糖苷样品
毛蕊异黄酮葡萄糖苷标品
阴性对照。