芥子中总芥子碱类成分的含量测定

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大连大学学报
芥子中总芥子碱类成分的含量测定
杨雪萍,王惠国,冯宝民*
,史丽颖,唐玲,王永奇
(大连大学生物工程学院,大连116622)
摘 要:采用甲醇、乙醇和水体系提取白芥子和黄芥子药材中总芥子碱类成分,以氯化胆碱做对照品,用比色法测定提取物中总芥子碱的含量。

结果表明,白芥子中总芥子碱类成分的含量最高为2.75%,最低为0.52%;黄芥子中总芥子碱类成分的含量最高为1.29%,最低为0.70%。

用乙醇-水体系提取得到的总芥子碱类成分含量较高,且不同产地的药材总芥子碱类成分的含量差异较大。

关键词:白芥子;黄芥子;芥子碱类;比色法;含量测定
中图分类号:O157.5 文献标识码:A 文章编号:1008-2395(2009)06-0053-03收稿日期:2009-09-14
基金项目:国家自然科学基金项目(30600802);辽宁省高等学校优秀人才支持计划项目(2008RC03)作者简介:杨雪萍(1985-),女,硕士研究生;冯宝民(1975-),男,Em ai:l gengzhong m i ng @
芥子为十字花科植物白芥Sinapis alba L .和黄芥B rassica juncea 的干燥成熟种子,其中含有大量的芥子碱类成分。

芥子碱类成分为一类季铵盐生物碱,属于胆碱衍生物,广泛存在于十字花科植物中,代表性分是芥子碱,芥子碱多以硫氰酸盐形式存在(图1)。

该类成分在十字花科植物的生理代谢调控方面具有非常重要的作用,而且具有抗辐射、抗氧化、抗衰老、抗雄激
素、降血压等多种生物活性[1-5]。

因而芥子碱作为芥子质量控制的一种指标成分。

中华人民共和国药典 规定芥子的质量鉴定是采用H PLC 法测定芥子碱的含量[6]。

但芥子碱不是芥子中唯一的胆碱衍生物,有报道从白芥子中分离得到了4种芥子碱类成分,分别是芥子碱,3-羟基-4甲氧基桂皮酰胆碱,4-羟基苯甲
酰胆碱,3,4-甲氧基苯甲酰胆碱[7]。

这几种成分结构相似,可能具有相似的生物活性。

因此,芥子中总芥子碱类的含量更能反映出芥子药材的质量测定,在评价芥子药材质量时更有意义。

本文采用雷氏盐沉淀法对芥子中总芥子碱类成分进行了含量测定,对不同溶剂提取方法进行了比较,且对四川和河北产的白芥子中总芥子
碱类成分的含量进行了比较。

图1 芥子碱硫氰酸盐的结构式
1 材料与方法
1.1实验材料
白芥子分别购自河北安国,四川成都;黄芥子购自河北安国。

经沈阳药科大学中药学院孙启时教授鉴定为白芥子和黄芥子。

1.2药品
雷氏盐(国药集团化学试剂有限公司生产,分析纯);氯化胆碱(自制);丙酮(分析纯);正丙醇(分析纯);1:5硝酸水溶液(自制)。

1.3仪器
W FJ7200型可见分光光度计(尤尼柯仪器有限公司);SH Z-CA 型循环水式多用真空泵(河南巩义市英峪予华仪器厂);BP210s 1/10000电子天平(Sartorius 公司);BP211s 1/100000电子天平(Sarto ri u s 公司);Laborato 4000旋转蒸发仪(H e i d olph 公司)
1.4方法1.4.1对照品溶液的制备
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二!!九年第六期
称取标准品氯化胆碱400.7m g ,加蒸馏水溶解,定容至200.00mL 容量瓶中,得浓度为
2.0035m g ∀mL-1的对照品溶液,备用。

1.4.2供试品溶液的制备
分别称取不同产地的白芥子和黄芥子各五份,每份50g ,筛去灰屑及杂质,粉碎,置具塞瓶中,加入石油醚脱脂,然后分别用95%乙醇,50%乙醇/水,水,甲醇,50%甲醇/水回流提取三次,合并提取液;浓缩至无醇味,得浸膏,备用。

1.4.3波长确定和标准曲线绘制
1.4.3.1波长确定取标准品氯化胆碱水溶液,加入适量5%的雷氏铵盐甲醇溶液,静置,待析出结晶,滤取结晶,以丙酮溶解并定容至25mL 容量瓶中,紫外-可见分光光度计在200-800nm 波长范围扫描,经测定,在波长520nm 处有较大吸收,故确定测定波长为520nm 。

1.4.3.2标准曲线绘制精密吸取氯化胆碱标液5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0,15.0mL ,分别移入锥形瓶中,各加入5mL 5%的雷氏铵盐
甲醇溶液,置冰箱中过夜,滤取红色片状不溶物,以丙酮溶解不溶物并定容至25mL 容量瓶中,以试剂空白作参照,在波长520nm 处测其吸光度。

以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,得回归方程为Y =0.8537X +0.0647,r =0.9992;线性范围0.4007m g ∀mL -1
-1.2021mg
∀mL -1。

1.4.4精密度试验
精密吸取氯化胆碱对照品溶液5.0m L ,按标准曲线项下方法操作,平行做5次实验,测定吸光度,测其吸光度的RSD 为1.36%。

1.4.5重现性试验
精密称取同一批号的四川白芥子5份,按样品测定项下方法测定样品中的总芥子碱类成分的含量,平均结果为2.10%,RSD 为1.2%。

1.4.6稳定性试验
取供试品溶液,在0,30,60,90,120m i n 内依法测定,结果120m i n 内RSD 为2.2%。

1.4.7加样回收率试验取四川白芥子6份,每份50g ,,分别精密加入5.0m g 氯化胆
碱,测其加样回收率。

结果见表1。

表1 加样回收率试验结果
取样量/g
样品中含量/m g
测得量/mg 回收率/%平均回收率/%
R SD /%
501.0655.88296.34501.0655.82995.28501.0655.59390.5694.65
2.6
501.0655.79694.62501.0655.73893.4650
1.065
5.948
97.66
1.4.8样品测定称取0.5g 白芥子和黄芥子的不同提取物浸膏,置250mL 圆底烧瓶中,加入1:5硝酸水溶液40mL ,加热回流5小时,过滤,滤液用40%Na OH 调p H 为8-9,加入等体积甲醇,置冰箱中过夜,次日取出过滤,收集滤液,浓缩至20-25mL,冷却,加5mL 5%的雷氏铵盐甲醇溶液,置冰箱中放置两个小时以上,待生成胆碱雷氏盐结晶,抽滤,再用正丙醇洗涤沉淀多次(洗至滤液无色),用丙酮溶解沉淀并定容至25mL 容量瓶中,在520nm 处测其吸光度,结果见表2。

2 结果
对不同产地的白芥子和黄芥子采用不同提取方法所得浸膏时药材中总芥子碱类成分的含量见表2。

从表2中可以看出,多种溶剂提取方法中乙醇-水提取得到的总芥子碱类成分含
量较高。

3 讨论
不同产地的药材总芥子碱类成分的含量差异较大,四川产的白芥子相对于河北产的芥子碱类含量较高。

芥子碱易溶于水,甲醇,热乙醇,不溶于氯仿,乙醚,苯。

一般文献
[8-9]
中报
道芥子中芥子碱含量是0.4-1.31%,而我们测得总芥子碱类含量远远高于单一的芥子碱含量,说明芥子总碱中除芥子碱外还含有大量的其它的芥子碱类成分。

中国药典 [6]
中对芥子药材的质量检测
是通过H PLC 法测定芥子碱的含量,但据文献
报道
[7]
,白芥子中存在4种芥子碱类成分,都属
于胆碱衍生物,可能具有相似的活性。

所以只检测芥子碱一种成分的含量不能反映出芥子中总碱的情况。

因而建立一种芥子中总芥子碱类
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成分的含量测定方法,对芥子药材质量评价具
有重要意义。

表2 采用不同提取方法时药材中总芥子碱类成分的含量
产地种类提取方法总芥子碱类成分的含量/%
河北
白芥子
甲醇0.87甲醇-水1.31乙醇0.52乙醇-水
1.75水1.30四川白芥子
甲醇2.34甲醇-水2.30乙醇2.13乙醇-水
2.75水1.91河北黄芥子
甲醇1.29甲醇-水1.01乙醇1.24乙醇-水
1.06水
0.70
芥子碱具有多种生物活性,在新药开发领域具有重要意义,且价格低廉,来源广泛。

大量文献中芥子碱的含量测定多采用高效液相色谱法,但此法仪器价格昂贵,不适用于基层实验室的广泛使用。

本实验采用的比色法掌握好除杂和正丙醇洗涤过量雷氏盐沉淀剂两步,便可得到较纯净的晶体。

该法简单易行,无需贵重仪器。

因此,此法是一般实验室的较佳选择。

参考文献:
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Deter m i nation of the Total Si napi noi ds Content i n
the seeds Si napis al ba.L and Brassica Juncea
YANG Xue-ping ,WANG H ui-guo ,FENG Bao-m i n *
,S H I L i-y i n g ,TANG Li n g ,WANG Yong-qi
(Coll ege of B i oengi neeri ng ,Dali an Universit y ,Dali an 116622Ch i na )
Abstract :The tota l si napino i ds was extracted w ithm ethano,l et hanol and w ater .Co l or m i etry method was used t o de t er m i ne the tota l si napi noids i n the article .It was s ho w ed from the results tha,t t he max m i u m total si napi noi ds content in the seeds o f Si nap i s a l ba .L.i s 2.75%and t he m i nm i u m content i s 0.52%,and that those i n t he Brassi ca j uncea are 1.29%and 0.70%
res pecti vel y .T he content o f total si nap i no i ds i s hi gher by ex tracti on w it h Et OH and it also showed great var i ati on for diff erent
habitats .
KeyW ords :si napi s seeds ;brassi ca j uncea ;tota l si nap i no i ds ;co l o rm i etry method ;content deter m i nati on。