HPLC法测定穿心莲丸中2种内酯的含量

HPLC法测定穿心莲丸中2种内酯的含量
吴福祥;张夙萍
【摘要】目的:建立高效液相色谱法测定穿心莲丸中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的方法.方法:以Agi-lent TC-C18柱(5μm,4.6mm×250mm)为色谱柱,以甲醇-水(55:45)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长为245 nm.结果:该方法线性关系良好,线性范围为穿心莲内酯0.022 4～0.224 0μg,脱水穿心莲内酯0.04～0.40μg.平均加样回收率(n=3)分别为97.51%(RSD=1.11%)和97.76%(RSD=1.31%).结论:高效液相色谱法分离度良好,结果准确可靠,为控制穿心莲丸质量提供了一定的依据.【期刊名称】《西部中医药》
【年(卷),期】2010(023)007
【总页数】3页(P23-25)
【关键词】穿心莲丸;高效液相色谱法;穿心莲内酯;脱水穿心莲内酯
【作者】吴福祥;张夙萍
【作者单位】定西市药品检验所,甘肃,定西,743000;定西市药品检验所,甘肃,定西,743000
【正文语种】中文
【中图分类】R282.5
穿心莲原产于印度、斯里兰卡、巴基斯坦、印尼、泰国、越南等国，我国于上世纪50年代在广东、福建南部有引种栽培，用于治疗多种感染性疾病及毒蛇咬伤［1］，近年来我国各地对穿心莲的栽培、化学成分、药理及临床方面进行了深入
的研究，目前已收载于《中国药典》2005年版一部［2］。

中国药典收载品种为
爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata( Burm.f.)Nees的干燥地上部分。

穿心莲具有解热、抗病原微生物、抗炎、增强免疫功能、抗蛇毒等多种药理作用［1］，穿心莲丸是以穿心莲药粉为原料制成的单方制剂，具有清热解毒，凉血消肿的功效，用于感冒发热、咽喉肿痛、口舌生疮、顿咳劳嗽、泄泻痢疾、热淋涩痛、痈肿疮疡、毒蛇咬伤等，收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第6册，标准
中未收载含量测定方法。

本文采用高效液相色谱法对其中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯同时进行了测定，并对色谱条件进行了考察，现将结果报道如下：
S P8810型高效液相色谱仪(山西太行药业股份有限公司提供)、S P200型检测器、S P4600型数据处理仪（美国光谱物理公司提供)；A UM-220D型电子天平(日本岛津国际贸易有限公司生产)；U-3900H型紫外-可见分光光度计(日本日立生产)；穿心莲内酯(110797-200307)和脱水穿心莲内酯(110854-200306)(供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供)；甲醇为色谱醇；重蒸水；其他试剂均为分析纯；穿心莲丸为市售品(广西玉林制药有限责任公司生产，批号：081216，090824，091006)。

2.1 色谱条件以Agilent TC-C18柱(5μm，4.6mm×250mm)为色谱柱；流动相：甲醇∶水(55∶45)；检测波长：245 n m；流速：1.0m L/m in；柱温：室温；理
论塔板数(n)按穿心莲内酯计不低于5 000；分离度大于1.5。

在此条件下，样品中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯与其他相关峰均能达到基线分离，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯色谱峰的保留时间分别为6.10分钟和18.52分钟。

有关色谱图见图1。

2.2 溶液制备
2.2.1 供试品溶液的制备取样品约2 g，精密称定,置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇100m L，超声处理30分钟，放冷，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液
20m L，用正已烷50m L，振摇提取，弃去正已烷液，乙醇液蒸干，残渣加甲醇
10m L使其溶解，加在中性氧化铝柱(5 g，200～300目，内径1.5 c m)上，用甲醇25m L洗脱，收集洗脱液，置25m L量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液，即得。

2.2.2 对照品溶液的制备取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1m L含穿心莲内酯56.0μg和脱水穿心莲内酯100.0μg混合溶液，取上述2种溶液各5m L混匀即得对照品溶液。

2.3 线性关系考察分别精密吸取对照品溶液2.0 m L、4.0m L、8.0m L、12.0m L、16.0m L、20.0m L，置25m L量瓶中，加甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件进样10.0μL分析，以进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，
其回归方程为：
穿心莲内酯：y=42 536 415.00x-2 615.34，r=0.999 8 (n=6)
脱水穿心莲内酯：y=4 789 386.32x-6 517.58，r=0.999 5 (n=6)
结果表明穿心莲内酯在0.022 4～0.224 0μg、脱水穿心莲内酯在0.04～0.40μg
范围内线性关系良好。

2.4 样品测定按2.2项下方法制备的供试品溶液和对照品溶液，经0.45μm微孔滤膜滤过,各精密吸取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标二点法计算含量，对某药厂3批穿心莲丸进行测定，结果见表1。

2.5 精密度试验取已制备好的对照品溶液，连续进样6次，进样量10.0μL，测定
其峰面积，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的RS D分别为0.96%和1.47%(n=6)。

2.6 稳定性试验取已制备好的供试品溶液，按2.4项下方法分别于0小时、1小时、3小时、5小时、10小时、12小时、24小时测定其含量，穿心莲内酯的RS
D=1.08%(n=7)，脱水穿心莲内酯的RS D=1.34%(n=7)，说明供试品溶液至少在24小时内稳定。

2.7 重复性试验分别精密量取供试品溶液(批号：070124) 1.0m L、
3.0m L、
5.0m L，置100m L量瓶中，用甲醇稀释至刻度，按2.4项下方法测定其含量，
每种溶液分别测定3次，结果：穿心莲内酯的RS D=1.46%(n=9)，脱水穿心莲内酯的RS D=1.91%(n=9)。

2.8 加样回收率试验取已知含量的供试品溶液(批号：070124)，并加入适量的对
照品，按2.4项下方法测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，分别计算回收率，结果见表2。

同一厂家不同批次的穿心莲丸中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量差异较大，这可能与穿心莲药材的产地、采收季节、加工方法有关［3］。

但2种内酯的含量有一定相关性，穿心莲内酯含量高的样品，其脱水穿心莲内酯的含量也较高，反之亦然。

本文采用H P L C法测定穿心莲丸中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，方法简便，分离度好，结果准确可靠，可有效控制药品的内在质量，可为该制剂质量标准的进一步修订提供实验依据。

Keywords ChuanXinLian Wan;andrographolide;dehydroandrographolide；HPLC
【相关文献】
［1］肖培根.新编中药志：第三卷［M］.北京：化学工业出版社,2002：250.
［2］中华人民共和国药典委员会.中国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2005：189.
［3］杨东升，陈松光，欧阳惠芳.穿心莲流膏中穿心莲内酯类成分在烘干过程中的变化［J］.中成药,2003,25(11)：868
Abstract Objective:To establish the assay of andrographolide and dehydroandrographolide for ChuanXinLian Wan.Methods:Agilent TC-C18 column(5
μm,4.6×250 mm), Methanol-Water(55:45) as the mobile phase, the flow rate was 1.0
mL/min and detection wavelength was 245 nm.Results:The method was linear.The calibration curves of andrographolide and dehydrographolide was linear in the range of 0.0224~0.2240μg and 0.04～0.40 μg.The average recovery rate(n=3) of andrographolide
and dehydroandrographolidewas 97.51%(RSD=1.11%) and
97.76%(RSD=1.31%).Conclusion: The method is simple,rapid and reproducible.。