赤雹根总皂苷对AA大鼠血清TNF-α与IL-10含量的影响

赤雹根总皂苷对AA大鼠血清TNF-α与IL-10含量的影响顾士栋;阎昊;邹君;佟继铭;曹凯
【摘要】目的:通过观察赤雹根总皂苷(TSmR)对佐剂性关节炎大鼠血清炎性细胞因子TNF-α与IL-10含量的影响,探讨TSTDR治疗类风湿性关节炎的作用机制.方法:60只大鼠随机分组:正常对照组,模型组,TSTDR低、中、高剂量组和雷公藤多苷组,每组10只大鼠.建立佐剂性关节炎大鼠模型后,TSTDR低、中、高剂量组大鼠分别灌胃给予不同剂量的TSTDR(40mg/kg/d、80mg/kg/d和160mg/kg/d),连续21d；雷公藤多苷组大鼠灌胃给予雷公藤多苷(12mg/kg/d),时间同TSTDR组大鼠.分别计算各组大鼠的关节炎指数,ELISA法检测各组大鼠血清TNF-α和IL-10的含量.结果:TSTDR各剂量组大鼠的关节炎指数、血清NF-α含量显著低于模型组(P＜0.01,P＜0.05),TSTDR各剂量组大鼠血清IL-10含量显著高于模型组(P＜0.01).结论:TSTDR对大鼠佐剂性关节炎具有治疗作用,机制可能与降低促炎性因子TNF-α水平、提高炎性抑制因子IL-10水平有关.
【期刊名称】《承德医学院学报》
【年(卷),期】2013(030)003
【总页数】3页(P196-198)
【关键词】赤雹根总皂苷;佐剂性关节炎;TNF-α;IL-10
【作者】顾士栋;阎昊;邹君;佟继铭;曹凯
【作者单位】承德医学院,河北承德067000;承德医学院,河北承德067000;承德医学院,河北承德067000;承德医学院,河北承德067000;承德医学院,河北承德067000
【正文语种】中文
【中图分类】R963
大鼠佐剂性关节炎是常用于类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)研究的动物模型之一，其组织病理学变化和发病机制与人类RA相似[1]。

赤雹为葫芦科多年
蔓生草本植物，赤雹根为赤雹的干燥成熟块根，味苦性寒，可活血祛淤、清热解毒，满族民间用于治疗腰腿痛、风湿痛、痛经、软组织损伤、瘰疬等[2]。

赤雹根总皂
苷(total saponins of Thladiantha dubia root，TSTDR)是赤雹根主要的有效成
分之一，前期研究显示TSTDR对大鼠佐剂性关节炎有明显的抗炎镇痛活性[3]。

本研究观察了TSTDR对佐剂性关节炎大鼠血清炎性细胞因子TNF-α与IL-10含量
的影响，探讨TSTDR治疗RA的作用机制，为进一步研究开发赤雹根提供实验依据。

1 材料与方法
1.1 试药与仪器 TSTDR，承德医学院中药研究所药理毒理实验室制备;弗氏完全佐
剂(FCA)，F5881型，美国Sigma公司;雷公藤多苷片，安徽新陇海药业有限公司;TNF-α、IL-10 ELISA试剂盒，上海索宝公司。

SORVALL Biofuge fresco冷冻离心机，德国Kendro Labrotary公司;Multiskan MK3酶标仪，美国Thermo公司。

1.2 实验动物分组与处理雄性SD大鼠(SPF级)60只，体重160-180g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，合格证号:SCXK京2009-0007。

随机选取其中的10只大鼠作为正常对照组，其余的50只大鼠建立佐剂性关节炎模型，造摸后第
18d，采用关节炎分数评分法计算关节炎指数AI值，以AI值≥6为造模成功的标准。

成模的50只大鼠随机分为模型组，TSTDR低、中、高剂量组和雷公藤多苷
组，每组10只大鼠。

TSTDR低、中、高剂量组大鼠分别灌胃给予不同剂量的TSTDR:40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg，雷公藤多苷组大鼠灌胃给予
12mg/kg的雷公藤多苷，正常组、模型组大鼠灌胃给予等体积的蒸馏水，各组大鼠灌胃时间均为21d。

1.3 模型制备每只大鼠于右后足跖皮下注射FCA 0.1ml。

致炎后第18d，采用关
节炎分数评分法计算关节炎指数AI值:0级，无红肿，计0分;1级，趾关节红肿，1分;2级，小趾关节及足跖关节肿胀，2分;3级，踝关节以下足爪肿胀，3分;4级，包括踝关节在内的全部关节肿胀，4分。

AI值=非致炎3只肢体关节肿胀级之和(最高分为12分)，以AI值≥6为造模成功的标准[4]。

1.4 检测大鼠血清TNF-α和IL-10 大鼠给药结束后,20ml/L戊巴比妥钠(
2.5ml/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，3500r/min离心10min，取血清采用双抗夹心ABC-ELISA法，检测大鼠血清TNF-α和IL-10含量。

1.5 统计分析实验数据以均数±标准差(±s)表示，采用SPSS 17.0统计软件进行分析，多组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 TSTR对大鼠关节炎指数的影响 TSTDR各剂量组大鼠的关节炎指数明显低于
模型组，差异具有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)。

见附表。

附表 TSTOR对佐剂性关节炎大鼠关节炎指数和血清细胞因子的影响(±s，n=10)
与模型组比较:*P＜0.01，**P＜0.05组别剂量(mg/kg)关节炎指数 TNF-
α(ng/ml)IL-10(ng/ml)正常对照组 - - 0.15±0.03* 2.60±0.05*模型组 -
7.20±0.32 0.98±0.08 1.91±0.06 TSTDR低剂量组40 6.00±0.40** 0.56±0.05* 2.92±0.23*TSTDR中剂量组80 5.10±0.18** 0.32±0.04* 3.06±0.05*TSTDR高
剂量组160 4.20±032* 0.18±0.04* 3.08±0.05*雷公藤多苷组12 4.30±0.42*
0.15±0.03* 2.83±0.05*
2.2 TSTDR对大鼠血清TNF-α和IL-10含量的影响模型组大鼠血清TNF-α含量
明显高于正常对照组、IL-10含量明显低于正常对照组，差异具有统计学意义(P＜0.01)。

TSTDR各剂量组大鼠血清TNF-α含量明显低于模型组(P＜0.01);TSTDR
各剂量组大鼠血清IL-10含量明显高于模型组(P＜0.01)。

见附表。

3 讨论
RA是以关节滑膜慢性炎症为主的全身性自身免疫性疾病，以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现。

该病好发于手、腕、足等小关节，反复发作，呈对称分布。

RA早期出现关节红肿热痛和功能障碍，继而导致软骨破坏、关节间隙变窄，晚期关节可出现不同程度的僵硬畸形，并伴有骨和骨骼肌的萎缩，影响肢体功能而致残[1]。

TNF-α是RA发病机理中居中心地位的炎症性细胞因子，参与RA的发生发展过程，可刺激滑膜细胞和软骨细胞合成PEG2和胶原酶，导致骨和软骨的吸收破坏，促进成纤维母细胞增生，抑制骨胶原合成。

文献报道，RA模型大鼠炎症组织中有大量TNF-α和IL-1β的表达，是引起大鼠关节肿胀及滑膜损伤的重要因素[5];肖金鱼等报道[6]，RA患者滑液和血清中TNF-α水平显著增高。

有研究显示，应用抗TNF-α单抗治疗RA患者，患者的症状、体征明显减轻，病变关节内的滑膜炎和软骨破坏得以抑制[7]。

本研究发现，TSTDR可明显降低RA大鼠血清TNF-α含量，提
示TSTDR可能通过抑制TNF-α的产生发挥抗类风湿关节炎的作用。

IL-10是一种具有很强免疫抑制及免疫调控作用的细胞因子，可通过抑制HLA-DR、IL-1、TNF-α及GMGSF的产生达到抗炎作用，IL-10含量减少在RA的发病中具有一定作用。

范雪亮等[8]应用ELISA法检测佐剂性关节炎大鼠模型血清IL-10的
水平，结果显示模型大鼠血清IL-10水平明显低于对照组，表明关节炎大鼠模型
IL-10的分泌受到了抑制。

本研究亦证实了这一点，模型组大鼠血清TNF-α含量
显著升高、IL-10含量显著降低;经TSTDR治疗后，TSTDR高、中、低剂量组大鼠
血清IL-10含量均明显高于模型组。

本研究表明，TSTDR可通过降低佐剂性关节炎大鼠模型血清促炎性细胞因子TNF-α的含量、提高炎性抑制细胞因子IL-10的含量，抑制骨滑膜组织增生，减轻软骨和骨破坏，可能是TSTDR治疗RA的作用环节之一。

【参考文献】
[1]许赤多，戴冽，汤美安.大鼠佐剂性关节炎的诱导及观察指标比较[J].中国免疫学杂志，2002，18(2):140-141.
[2]宋立人，红恂，丁绪亮，等.现代中药大辞典[M].上册.北京:人民卫生出版社，2001.1022.
[3]张玉玲，赵波，陈建双，等.赤雹根镇痛作用及有效部位研究[J].时珍国医国药，2010，21(10):2483-2484.
[4]吴虹，陈尹，魏伟，等.栀子总苷对大鼠佐剂性关节炎治疗作用及部分机制的研究[J].中国实验方剂学杂志，2008，14(11):49-52.
[5]Kawahito Y, Kondo M, Tsubouchi Y, et al.15-deoxy-delta(12,14)-
PGJ(2)induces synoviocyte apoptosis and suppresses adjuvantinduced arthritis in rats[J].J Clin Invest, 2000, 106(2): 189-197.
[6]肖金鱼，王炳胜，王书杰.IL-1及TNF-α在关节炎大鼠模型血清中表达的实验研究[J].中国中医急症，2011，20(4):607-608.
[7]Zhang HG, Huang N, Liu D, et al.Gene therapy that inhibits nuclear translocation of nuclear factor kappaB results in tumor necrosis factor alpha-induced apoptosis of human synovial fibroblasts[J].Arthritis Rheum, 2000, 43(5): 1094-1105.
[8]范雪亮，肖金鱼.关节炎大鼠模型血清中IL-4、IL-10表达的检测[J].中国中医急
症，2011，20(7):1102，1127.。