中药化学苷类PPT课件
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脱。收集洗脱液，回收溶剂，浓缩干燥，即得。
聚酰胺色谱 凝胶色谱
苷的纯化（有效成分）：
2.硅苷胶的、分氧化离铝纯吸化附色谱：适用于极性低的苷类或苷元的分离。
利用被分离组分与吸附剂之间的相互作用（可逆的范德华力） 差异进行分离。在洗脱过程中，柱内不断地发生解吸、吸附， 再解吸、再吸附的过程。即被吸附的物质被溶剂解吸而随溶剂 向下移动，又遇到新的吸附剂颗粒被再吸附，后面流下的溶剂 又再解吸而使其下移动。经过一段时间以后，该物质会向下移 动一定距离。此距离的长短与吸附剂对该物质的吸附力以及溶 剂对该物质的解吸(溶解)能力有关。不同的物质由于吸附力和 解吸力不同 ，移动速度也不同。吸附力弱而解吸力强的物质， 移动速度就较快。
第5节 苷的提取、分离及检识 苷的提取Βιβλιοθήκη 溶剂法 苷的分离： 大孔树脂法
色谱法 苷的检识： 化学检识
色谱检识
1.苷的提取
溶剂法：用极性由小到大的溶剂依次提取。常用溶剂有 沸水、甲(乙)醇、正丁醇、乙酸乙酯等。
！注意：苷的水解（酸、酶、碱的影响）。 原生苷的提取：破坏或抑制酶的活性。 • 药材迅速干燥 • 拌料无机盐如碳酸钙 • 用沸水、高浓度醇提取 次生苷或苷元的提取：利用酶活性。 • 发酵后或水解后，用亲脂性有机溶剂提取。
按操作方式分：薄层色谱 纸色谱 柱色谱
按分离机理分：吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱
按极性分：正相色谱 反相色谱
苷的分离（有效部位）：
2.大苷孔的树分脂离吸附纯色化谱
• 原理：大孔树脂是一类具有多孔结构、不溶于水的固体高分 子物质，可以通过物理吸附（范德华力）从水溶液中有选择 的吸附成分，达到分离目的。
分配色谱：以硅胶、纤维素等为支持剂，水饱和的溶剂为流动 相进行分离，适用于极性较大的苷类成分。常用反相色谱，即 以键合硅胶为固定相，含水的溶剂系统为流动相分离。
3.苷的检识
化学检识
Molish反应（α-萘酚浓硫酸）：糖、苷（＋）紫色环。 糖被氧化成糠醛，糖醛与酚胺缩合生成有色化合物。
BAW：正丁醇－醋酸－水（4:1:5, 上层） BEW：正丁醇－乙醇－水（4:1:2） BBPW：正丁醇－苯－吡啶－水（5:1:3:3） PhOH：水饱和苯酚
2.糖的数目的确定
MS法 • 测定苷和苷元分子量，根据差值或碎片质荷比差值计算。
色谱法—测定水解液中的单糖 • TLC-Scan、HPLC-定量，以单糖对照品为标准。
成苷后，苷元的成苷碳原子（α-C）与相邻的碳原子
（β-C）信号会发生位移，其他碳信号不变；糖端基碳原
子与游离单糖信号相比也发生了位移。
• 苷元：醇苷，α-C 低场位移 4-10ppm
OH
β-C
高场HO位71移.3
62.5
1-4.6Oppm
77.4 75.9
酚苷，α-C 高场位移 HO 77.5
97.4
• 特点：选择性、机械强度高、再生处理方便、吸附速度快等。 应用广泛，如苷与糖类的分离等。
• 分类：非极性、中极性、极性和强极性四类。选择的树脂极 性与被分离物质极性既不能相似（吸附过强），也不能差太 大（无法分离）。常用的有DA-101、DA-201、AB-8型等。
• 操作：样品用水溶解，上样后依次用水、含水醇、浓醇洗
NMR法 • 1HNMR：根据糖端基质子信号数目确定；或全乙酰化、全
甲基化数目推测。 • 13CNMR：根据糖端基碳信号数目（90-112ppm）确定；或苷
和苷元碳信号差值推断。 • 二维NMR
3.糖的连接位置—苷元与糖
13CNMR
• 苷化位移（glycosylation shift, GS）：苷元与糖结合
中药 EtOH 提取
EtOH 提取物 减压回收 EtOH
浓缩物 石油醚提取
石油醚部分 （油脂）
残留物 Et2O或CHCl3提 取
Et2O或 CHCl3提取物 （甙元）
残留物 EtOAc提 取
EtOAc提取液 （含单糖甙或含糖较少的甙）
残留物 n-BuOH提 取
n-BuOH提 取 液 （含糖较多的甙）
溶液制板，增加样品承载量，改善分离效果。如 0.3mol/L Na2HPO4、0.03mol/L H3BO3等。 • HPLC：直接进样，但灵敏度不及GC。 • GC：灵敏度高，但需水解、制备衍生物。
NMR法—直接测定苷，与标准品的糖数据比较。 • 1HNMR、13CNMR • 二维NMR
常见单糖纸色谱hRf
SUCCESS
THANK YOU
2019/6/21
糖的结构鉴定
糖的种类 糖的数目 糖链的结构
位置：苷元-糖、糖-糖 顺序：糖-糖 构型：苷键
1.糖的种类的确定
色谱法—测定水解液中的单糖，与对照品比较。 • PC：最常用。 • TLC：点样量较少≤5μg。可用无机盐（强碱弱酸）的水
C
OH
OH
β-C 低场位移 MeOH
• 糖：端基C低场位移 4-7ppm
Fehling或Tollen反应：还原糖（＋）。 苷、非还原糖(-)。比较水解前后结果，判断是糖还是
苷。 RCHO+2Ag(NH3)2+OH－→RCOONH4+2Ag↓+3NH3+H2O RCHO+2Cu(OH)2+NaOH→RCOONa+Cu2O↓+3H2O
第6节 苷的结构研究
纯度鉴定 分子式的测定 苷的水解 苷元的结构鉴定 糖的结构鉴定
2.苷的分离纯化
溶剂处理法：利用溶解度差异分离。提取液浓缩后，用 合适的溶剂处理，根据苷类与杂质的溶解度不同分离。 如乙醚、丙酮沉淀皂苷等。
铅盐沉淀法：利用醋酸铅在水或稀醇中能沉淀某类成分 的性质，进行除杂或提纯。中性醋酸铅能沉淀具邻二酚 OH、-COOH的酸性苷；碱式醋酸铅能沉淀酚性成分。
色谱法：利用混合物中各组分与固定相和流动相的相互 之间的作用不同，使各组分以不同程度分布在固定相和 流动相中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速 度移动，达到分离。分离效果好，是一种实验室常规分 离方法。
色谱法（Chromatography）分类：
按流动相分：液相色谱（liquid chromatography） 气相色谱（gas chromatography）
聚酰胺色谱 凝胶色谱
苷的纯化（有效成分）：
2.硅苷胶的、分氧化离铝纯吸化附色谱：适用于极性低的苷类或苷元的分离。
利用被分离组分与吸附剂之间的相互作用（可逆的范德华力） 差异进行分离。在洗脱过程中，柱内不断地发生解吸、吸附， 再解吸、再吸附的过程。即被吸附的物质被溶剂解吸而随溶剂 向下移动，又遇到新的吸附剂颗粒被再吸附，后面流下的溶剂 又再解吸而使其下移动。经过一段时间以后，该物质会向下移 动一定距离。此距离的长短与吸附剂对该物质的吸附力以及溶 剂对该物质的解吸(溶解)能力有关。不同的物质由于吸附力和 解吸力不同 ，移动速度也不同。吸附力弱而解吸力强的物质， 移动速度就较快。
第5节 苷的提取、分离及检识 苷的提取Βιβλιοθήκη 溶剂法 苷的分离： 大孔树脂法
色谱法 苷的检识： 化学检识
色谱检识
1.苷的提取
溶剂法：用极性由小到大的溶剂依次提取。常用溶剂有 沸水、甲(乙)醇、正丁醇、乙酸乙酯等。
！注意：苷的水解（酸、酶、碱的影响）。 原生苷的提取：破坏或抑制酶的活性。 • 药材迅速干燥 • 拌料无机盐如碳酸钙 • 用沸水、高浓度醇提取 次生苷或苷元的提取：利用酶活性。 • 发酵后或水解后，用亲脂性有机溶剂提取。
按操作方式分：薄层色谱 纸色谱 柱色谱
按分离机理分：吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱
按极性分：正相色谱 反相色谱
苷的分离（有效部位）：
2.大苷孔的树分脂离吸附纯色化谱
• 原理：大孔树脂是一类具有多孔结构、不溶于水的固体高分 子物质，可以通过物理吸附（范德华力）从水溶液中有选择 的吸附成分，达到分离目的。
分配色谱：以硅胶、纤维素等为支持剂，水饱和的溶剂为流动 相进行分离，适用于极性较大的苷类成分。常用反相色谱，即 以键合硅胶为固定相，含水的溶剂系统为流动相分离。
3.苷的检识
化学检识
Molish反应（α-萘酚浓硫酸）：糖、苷（＋）紫色环。 糖被氧化成糠醛，糖醛与酚胺缩合生成有色化合物。
BAW：正丁醇－醋酸－水（4:1:5, 上层） BEW：正丁醇－乙醇－水（4:1:2） BBPW：正丁醇－苯－吡啶－水（5:1:3:3） PhOH：水饱和苯酚
2.糖的数目的确定
MS法 • 测定苷和苷元分子量，根据差值或碎片质荷比差值计算。
色谱法—测定水解液中的单糖 • TLC-Scan、HPLC-定量，以单糖对照品为标准。
成苷后，苷元的成苷碳原子（α-C）与相邻的碳原子
（β-C）信号会发生位移，其他碳信号不变；糖端基碳原
子与游离单糖信号相比也发生了位移。
• 苷元：醇苷，α-C 低场位移 4-10ppm
OH
β-C
高场HO位71移.3
62.5
1-4.6Oppm
77.4 75.9
酚苷，α-C 高场位移 HO 77.5
97.4
• 特点：选择性、机械强度高、再生处理方便、吸附速度快等。 应用广泛，如苷与糖类的分离等。
• 分类：非极性、中极性、极性和强极性四类。选择的树脂极 性与被分离物质极性既不能相似（吸附过强），也不能差太 大（无法分离）。常用的有DA-101、DA-201、AB-8型等。
• 操作：样品用水溶解，上样后依次用水、含水醇、浓醇洗
NMR法 • 1HNMR：根据糖端基质子信号数目确定；或全乙酰化、全
甲基化数目推测。 • 13CNMR：根据糖端基碳信号数目（90-112ppm）确定；或苷
和苷元碳信号差值推断。 • 二维NMR
3.糖的连接位置—苷元与糖
13CNMR
• 苷化位移（glycosylation shift, GS）：苷元与糖结合
中药 EtOH 提取
EtOH 提取物 减压回收 EtOH
浓缩物 石油醚提取
石油醚部分 （油脂）
残留物 Et2O或CHCl3提 取
Et2O或 CHCl3提取物 （甙元）
残留物 EtOAc提 取
EtOAc提取液 （含单糖甙或含糖较少的甙）
残留物 n-BuOH提 取
n-BuOH提 取 液 （含糖较多的甙）
溶液制板，增加样品承载量，改善分离效果。如 0.3mol/L Na2HPO4、0.03mol/L H3BO3等。 • HPLC：直接进样，但灵敏度不及GC。 • GC：灵敏度高，但需水解、制备衍生物。
NMR法—直接测定苷，与标准品的糖数据比较。 • 1HNMR、13CNMR • 二维NMR
常见单糖纸色谱hRf
SUCCESS
THANK YOU
2019/6/21
糖的结构鉴定
糖的种类 糖的数目 糖链的结构
位置：苷元-糖、糖-糖 顺序：糖-糖 构型：苷键
1.糖的种类的确定
色谱法—测定水解液中的单糖，与对照品比较。 • PC：最常用。 • TLC：点样量较少≤5μg。可用无机盐（强碱弱酸）的水
C
OH
OH
β-C 低场位移 MeOH
• 糖：端基C低场位移 4-7ppm
Fehling或Tollen反应：还原糖（＋）。 苷、非还原糖(-)。比较水解前后结果，判断是糖还是
苷。 RCHO+2Ag(NH3)2+OH－→RCOONH4+2Ag↓+3NH3+H2O RCHO+2Cu(OH)2+NaOH→RCOONa+Cu2O↓+3H2O
第6节 苷的结构研究
纯度鉴定 分子式的测定 苷的水解 苷元的结构鉴定 糖的结构鉴定
2.苷的分离纯化
溶剂处理法：利用溶解度差异分离。提取液浓缩后，用 合适的溶剂处理，根据苷类与杂质的溶解度不同分离。 如乙醚、丙酮沉淀皂苷等。
铅盐沉淀法：利用醋酸铅在水或稀醇中能沉淀某类成分 的性质，进行除杂或提纯。中性醋酸铅能沉淀具邻二酚 OH、-COOH的酸性苷；碱式醋酸铅能沉淀酚性成分。
色谱法：利用混合物中各组分与固定相和流动相的相互 之间的作用不同，使各组分以不同程度分布在固定相和 流动相中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速 度移动，达到分离。分离效果好，是一种实验室常规分 离方法。
色谱法（Chromatography）分类：
按流动相分：液相色谱（liquid chromatography） 气相色谱（gas chromatography）